席歐彥,李 曉,鄭 飛,段新晨,唐秀麗,胡紅英

(新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，烏魯木齊 830046)

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楊樹螢葉甲DNA條形碼研究

席歐彥,李 曉,鄭 飛,段新晨,唐秀麗,胡紅英

(新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，烏魯木齊 830046)

摘要：【目的】楊樹螢葉甲(楊毛臀螢葉甲)(Agelastica alni orientalis Baly)主要分布于新疆，是楊、柳及蘋果等林果的重要食葉害蟲，對(duì)作物的嚴(yán)重危害期通常在幼蟲期，難以對(duì)此做出準(zhǔn)確鑒定。運(yùn)用DNA條形碼技術(shù)可以對(duì)害蟲各齡期的標(biāo)本進(jìn)行快速和準(zhǔn)確的鑒定?！痉椒ā客ㄟ^提取楊樹螢葉甲的基因組DNA，以線粒體細(xì)胞色素氧化酶(COⅠ)基因作為通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，最后獲得準(zhǔn)確的堿基序列作為楊樹螢葉甲的DNA條形碼?！窘Y(jié)果】根據(jù)楊樹螢葉甲在不同齡期的DNA序列一致的原理，運(yùn)用DNA條形碼研究技術(shù)，獲得了楊樹螢葉甲成蟲和三齡幼蟲的COⅠ基因序列，并進(jìn)行了序列分析。結(jié)果顯示相似性最高可達(dá)97.74%。獲得的序列可以用于對(duì)楊樹螢葉甲的祿步鑒定?！窘Y(jié)論】DNA條形碼技術(shù)可簡單、快速、準(zhǔn)確的鑒定不同齡期楊樹螢葉甲的標(biāo)本，為及時(shí)采取害蟲防治措施提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

關(guān)鍵詞：楊樹螢葉甲； DNA條形碼；COⅠ基因；快速鑒定

0 引 言

【研究意義】楊樹螢葉甲又名楊毛臀螢葉甲(AgelasticaalniorientalisBaly)，屬鞘翅目(Coleoptera),葉甲科(Chrysomelidae)。在國內(nèi)主要分布于新疆和內(nèi)蒙古，在新疆境內(nèi)自烏魯木齊起，西到伊犁，北迄塔城，東抵托克遜、哈密，南自和田、喀什等地。它是新疆危害楊、柳、榆、巴旦杏、蘋果樹的主要食葉害蟲。近幾年在烏魯木齊、昌吉和伊犁等地區(qū)的苗圃、防護(hù)林及果園為害猖獗。主要以成蟲和幼蟲為害，該蟲蟲口密度較大，取食量大，成蟲取食柳葉部分的葉肉和葉脈，留下缺刻；其幼蟲從柳葉背面取食柳葉的葉肉、剩下葉脈，被食害的柳葉呈網(wǎng)狀缺刻，大大降低了柳葉的光合作用，導(dǎo)致柳葉枯黃、早落。嚴(yán)重時(shí)整棵柳樹只剩下樹干，它不僅危害柳樹還危害楊樹、榆樹、蘋果樹等，嚴(yán)重影響了林木及果樹的生長。而且它是五種柳樹食葉害蟲中危害情況最嚴(yán)重的害蟲[1-2]。而目前對(duì)該害蟲的鑒定主要根據(jù)其形態(tài)特征，對(duì)危害嚴(yán)重的害蟲鑒定較為困難。DNA條形碼不受發(fā)育階段的影響，可為快速準(zhǔn)確的鑒定該害蟲的幼蟲期提供重要依據(jù)?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】DNA條形碼(DNA barcoding)是由加拿大Hebert等首次正式提出，是應(yīng)用有足夠變異的標(biāo)準(zhǔn)化短基因片段對(duì)物種進(jìn)行快速、 準(zhǔn)確鑒定的新的生物身份識(shí)別系統(tǒng)。具有準(zhǔn)確性高、鑒定快速、且不受發(fā)育階段的影響等優(yōu)點(diǎn)[3]。隨著DNA條形碼技術(shù)的推進(jìn),已經(jīng)發(fā)布的DNA條形碼序列有168 719種,其中完整的物種DNA條形碼序列 (包含準(zhǔn)確的物種信息和條形碼序列信息 )19 163個(gè)物種[4]。很多國際組織自行建立的 DNA條形碼數(shù)據(jù)庫構(gòu)成整個(gè)DNA條形碼項(xiàng)目的重要組成部分，比如，Birds組織計(jì)劃在5年內(nèi)完成所有鳥類約10 000種的DNA條形碼數(shù)據(jù)庫的構(gòu)建,1 233種鳥類的DNA條形碼數(shù)據(jù)已經(jīng)得到[5]。近年來在國內(nèi)昆蟲條形碼研究也在不斷進(jìn)行，主要是關(guān)于鞘翅目(Coleoptera)、直翅目(Orthoptera)、半翅目(Hemiptera)、鱗翅目(Lepidoptera)的天蛾和卷蛾、雙翅目(Diptera)實(shí)蠅與寄蠅、膜翅目中國榕小蜂的相關(guān)研究進(jìn)展。DNA 條形碼作為當(dāng)代生命科學(xué)領(lǐng)域最為活躍的學(xué)科之一受到重視。在全球已知鞘翅目種類36×104余種，占全球已知昆蟲總數(shù)的1/3，中國記載約1×104余種。鞘翅目昆蟲數(shù)量眾多，國內(nèi)外學(xué)者對(duì)鞘翅目不同分類階元的系統(tǒng)發(fā)育問題進(jìn)行了廣泛而深入的研究。國內(nèi)研究方面利用線粒體基因部分序列對(duì)鞘翅目昆蟲系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系的研究較多，對(duì)DNA條形碼的研究并不是很多。到目前為止( 2014年2 月) ，GenBank 上共提交鞘翅目線粒體全基因組( 或者近線粒體全基因組) 共74個(gè)，而針對(duì)楊樹螢葉甲的全基因組序列測(cè)定的則沒有[6-10]。【本研究切入點(diǎn)】目前對(duì)楊樹螢葉甲幼蟲的形態(tài)學(xué)鑒定較為困難，而DNA條形碼技術(shù)能快速鑒定各齡期昆蟲。因而研究基于楊樹螢葉甲DNA條形碼缺少的情況，選擇昆蟲條形碼通用基因線粒體DNA[11]，對(duì)不同齡期的楊樹螢葉甲的COⅠ基因進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序，為其快速、準(zhǔn)確鑒定提供科學(xué)依據(jù)。因此，利用線粒體DNA來測(cè)出楊樹螢葉甲的序列對(duì)快速的鑒定楊樹螢葉甲有很重要的意義?！緮M解決的關(guān)鍵問題】DNA barcoding 的技術(shù)流程比較簡潔，主要包括樣品獲取、DNA提取、PCR擴(kuò)增、序列測(cè)定、序列比對(duì)及根據(jù)序列差異進(jìn)行判別。通過獲得準(zhǔn)確的序列來對(duì)楊樹螢葉甲進(jìn)行快速的鑒定，以便為及時(shí)采取害蟲防治措施提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，為自治區(qū)農(nóng)林業(yè)的發(fā)展作出貢獻(xiàn)[12]。

1材料與方法

1.1　材 料

在新疆大學(xué)和新疆醫(yī)科大學(xué)等校園內(nèi)柳樹上捕捉楊樹螢葉甲成蟲，采摘大量帶有卵塊的葉片。

1.2　 方 法

1.2.1 楊樹螢葉甲的室內(nèi)飼養(yǎng)及形態(tài)學(xué)觀察鑒定

成蟲的飼養(yǎng)：將采集到的楊樹螢葉甲成蟲放在有通氣孔的小罐中，在罐中放入少量柳樹葉片,并放置在室溫(20~30℃)下，并保證光照充足。幼蟲的飼養(yǎng)：當(dāng)一齡幼蟲孵出后，開始在培養(yǎng)皿中飼養(yǎng)，同樣放置在室溫下，保證濕度合適。

在飼養(yǎng)的過程中挑出一部分幼蟲分齡期保存。放置于-20℃的冰箱中凍存，以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)用。如果需要長期保存可將其放入無水乙醇中保存或者放入超低溫冰箱中凍存。

1.2.2 楊樹螢葉甲基因組DNA的提取

實(shí)驗(yàn)前的材料處理。取無水乙醇中浸泡的楊樹螢葉甲的成蟲，先用蒸餾水進(jìn)行沖洗，去除殘留的酒精，再將其用剪刀剪成小塊，液氮研磨。楊樹螢葉甲的幼蟲同樣先用蒸餾水沖洗，去除殘留酒精，再將幼蟲切成小塊。新鮮材料可直接用液氮研磨處理。利用通用型柱式基因組提取試劑盒(康維世紀(jì))，按照說明書的操作步驟進(jìn)行提取。

1.2.3 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

分別取楊樹螢葉甲成蟲和三齡幼蟲的DNA。如果DNA濃度過高,在用之前可先稀釋，再作為模板。COI通用引物的序列[13-15]：

LCO1490 5’

—GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG—3’

HCO2198 5’

—TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA—3’

由公司合成引物(北京鼎國公司)，利用PCR儀(PCR儀2400PE，美國)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增體系為：ddH2O，11 L；10×PCR Buffer ，2 L；MgCl2，2 L；模板，1.5 L；dNTP，2 L；Taq酶(5U/L)，0.5 L；上下游引物各0.5 L。共計(jì)20 L。PCR反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5 min；94℃變性30 s；52℃退火 50 s；72℃延伸 30 s；循環(huán)30次；最后72℃保留10 min。PCR反應(yīng)結(jié)束后，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物擴(kuò)增情況。

1.2.4 序列處理

將PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物交由公司測(cè)序，測(cè)序完成后對(duì)序列進(jìn)行處理分析。使用DNAMAN進(jìn)行核苷酸序列的分析，用BLAST軟件( http://www．ncbi．nlm．nih．gov /blast)進(jìn)行核苷酸序列的同源性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1　結(jié)楊樹螢葉甲的形態(tài)學(xué)鑒定

楊樹螢葉甲成蟲為橢圓形，具藍(lán)色金屬光澤，體長7.0~8.0 mm。該蟲屬于完全變態(tài)昆蟲，分為卵、幼蟲、蛹、成蟲四個(gè)階段。其中，幼蟲又有三個(gè)齡期(一齡，二齡，三齡)。圖1

注：A.卵； B.幼蟲； C.蛹； D.成蟲

Note:A. egg B. larvae C. pupa D. adult

圖1 楊樹螢葉甲的各齡期形態(tài)
Fig.1Life cycle ofAgelasticaalniorientalisBaly

2.2　 楊樹螢葉甲基因組DNA的提取結(jié)果

利用試劑盒所提取的基因組DNA，經(jīng)1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，所得的DNA條帶完整，清晰無蛋白質(zhì)和RNA的污染。電泳圖可知：楊樹螢葉甲成蟲和幼蟲分子量大小均為15 000 bp。圖2

M:15 000 bp ladder；1,2：幼蟲；3：成蟲

M: 15，000 bp ladder;1,2: larvae;3：adult

圖2 楊樹螢葉甲總DNA提取
Fig.2Total DNA fromAgelasticaalniorientalisBaly

2.3　 CO I基因PCR擴(kuò)增后的電泳結(jié)果

將稀釋了50倍的楊樹螢葉甲成蟲和幼蟲的基因組DNA作為模板，利用通用引物對(duì)其擴(kuò)增，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果顯示，楊樹螢葉甲COI基因序列分子量為700 bp左右，與預(yù)期結(jié)果一致。圖3

注：1,2,3:幼蟲;4,5:成蟲； 6:陰性對(duì)照； M:2 000 bp ladder

Note:1, 2, 3: larvae;4,5: adult;6: negative control; M: 2，000 bp ladder

圖3楊樹螢葉甲COⅠ基因PCR產(chǎn)物電泳圖
Fig.3Electrophoresis ofCOⅠ gene PCR productsofAgelasticaalniorientalisBaly

2.4 　PCR測(cè)序結(jié)果

將通用引物擴(kuò)增出來的楊樹螢葉甲成蟲和三齡幼蟲的PCR產(chǎn)物直接送公司測(cè)序，所得的測(cè)序結(jié)果如下。

楊樹螢葉甲的三齡幼蟲序列：

AGGGCGGCCATTCTTATTTTTGGTATTTGAGCAGGATAGTAGGAACATCATTAAGAATTC

TAATTCGAGTAGAATTAGGAAATCCTGGCTCATTAATTGGTAATGACCAAATTTACAATG

TAATCGTAACAGCTCATGCTTTTATCATAATTTTCTTTATAGTTATACCTATCATAATTGGA

GGATTTGGTAATTGACTTGTCCCATTAATAATTGGAGCTCCAGATATAGCATTTCCACGA

ATAAATAATATAAGATTTTGATTATTACCCCCATCAATTTTTTTATTAATTATAAGTAGAAT

TGTAGAAAGAGGAGCAGGGACGGGATGAACAGTATATCCTCCTTTATCTTCTAATATCG

CTCATAATGGTTCATCAGTTGATTTAGCTATTTTTAGCCTTCATTTAGCTGGAATTTCATC

TATTTTAGGTGCCATTAATTTTATTACAACAGTTATTAATATACGACCAAATGGAATAAGA

TTTGACCGAATACCCTTATTTGTCTGAGCAGTAGTAATTACTGCAGTTCTATTATTACTAT

CTTTACCAGTTTTAGCTGGTGCTATTACAATATTATTAACTGACCGAAATTTAAATACATC

ATTTTTTGATCCAACTGGTGGAGGTGACCCAATTCTATACCAACACTTATTT

楊樹螢葉甲的成蟲序列:

TTACAGAGAGGCTTTACTTTATTTTTGGTTTTGAGCAGGAATAGTAGGAACATCATTAA

GAATTCTAATTCGAGTAGAATTAGGAAATCCTGGCTCATTAATTGGTAATGACCAAATTT

ACAATGTAATCGTAACAGCTCATGCTTTTATCATAATTTTCTTTATAGTTATACCTATCATA

ATTGGAGGATTTGGTAATTGACTTGTCCCATTAATAATTGGAGCTCCAGATATAGCATTT

CCACGAATAAATAATATAAGATTTTGATTATTACCCCCATCAATTTTTTTATTAATTATAAG

TAGAATTGTAGAAAGAGGAGCAGGGACGGGATGAACAGTATATCCTCCTTTATCTTCTA

ATATCGCTCATAATGGTTCATCAGTTGATTTAGCTATTTTTAGCCTTCATTTAGCTGGAAT

TTCATCTATTTTAGGTGCCATTAATTTTATTACAACAGTTATTAATATACGACCAAATGGA

ATAAGATTTGACCGAATACCCTTATTTGTCTGAGCAGTAGTAATTACTGCAGTTCTATTAT

TACTATCTTTACCAGTTTTAGCTGGTGCTATTACAATATTATTAACTGACCGAAATTTAAA

TACATCATTTTTTGATCCAACTGGTGGAGGTGACCCAATTCTATACCAACACTTATTT

2.5 　楊樹螢葉甲基因組的序列

將楊樹螢葉甲成蟲與三齡幼蟲的序列做初步的比對(duì)。又利用NCBI 中的“BLAST”軟件進(jìn)行檢索，發(fā)現(xiàn)研究所獲得的基因序列的同源性很高，證明所獲得基因序列真實(shí)可信。之后在GenBank中注冊(cè)了該昆蟲的基因序列，登錄號(hào)為KP250652，可以利用此登錄號(hào)查找出基因序列。將楊樹螢葉甲的成蟲和三齡幼蟲的測(cè)序結(jié)果利用DNAMAN軟件進(jìn)行分析，結(jié)果顯示相似性最高可達(dá)97.74%。楊樹螢葉甲成蟲和三齡幼蟲的堿基變化，利用DNAMAN進(jìn)行序列分析，輸出多序列對(duì)比的結(jié)果所示，相比而言，楊樹螢葉甲三齡幼蟲的核苷酸序列中存在5個(gè)堿基(第1,2,3,4和41位點(diǎn))的缺失(用·表示)；第7個(gè)位點(diǎn),第9個(gè)位點(diǎn)，第13個(gè)位點(diǎn),第14個(gè)位點(diǎn)，第16個(gè)位點(diǎn)，第20個(gè)位點(diǎn)和第21個(gè)位點(diǎn)的堿基出現(xiàn)不同。圖4

3 討 論

DNA barcoding提出后就存在許多爭議。目前主要集中在以下兩個(gè)方面:一是DNA barcoding技術(shù)與傳統(tǒng)分類學(xué)的關(guān)系；二是關(guān)于DNA barcoding的一些技術(shù)問題。隨著DNA條形碼技術(shù)研究的不斷推進(jìn)，DNA條形碼技術(shù)有巨大的潛力能夠廣泛的進(jìn)行科學(xué)應(yīng)用,在保護(hù)生物學(xué),包括生物多樣性調(diào)查等領(lǐng)域尤其顯著。當(dāng)傳統(tǒng)的分類學(xué)受到阻礙時(shí),這種技術(shù)就更可以發(fā)揮其優(yōu)勢(shì)。另外，利用DNA條形碼技術(shù)為分類學(xué)家發(fā)現(xiàn)新種提供了一個(gè)新方法[16]。

目前，由于楊樹螢葉甲在我國分布有局限性，研究的還比較少，在文獻(xiàn)中關(guān)于楊樹螢葉甲DNA條形碼的報(bào)道也幾乎沒有，而在新疆楊樹螢葉甲對(duì)林果業(yè)的危害很大，DNA條形碼的研究是很有必要的，也具有一定的創(chuàng)新性和研究價(jià)值。如果條形碼可以在鑒定和檢驗(yàn)上得到充分的利用，就會(huì)為新疆林果業(yè)害蟲的防治帶來新的生機(jī)。因此，利用分子生物學(xué)的方法對(duì)楊樹螢葉甲分類和鑒定，且有快速有效，不受齡期限制的特點(diǎn)，可用于楊樹螢葉甲的準(zhǔn)確快速鑒定。其中存在的問題有:(1)取材:材料主要依賴野外采集，而且昆蟲發(fā)生期間時(shí)間集中、短暫，很大程度上受季節(jié)的影響；(2)保存： 根據(jù)文獻(xiàn)，將新鮮的材料保存在無水乙醇中，實(shí)際提取過程中，發(fā)現(xiàn)楊樹螢葉甲總DNA有降解的現(xiàn)象，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不甚理想。還可以再繼續(xù)對(duì)楊樹螢葉甲的蛹，一齡、二齡幼蟲的序列繼續(xù)測(cè)定，再做進(jìn)一步的序列比對(duì)。通過對(duì)楊樹螢葉甲的成蟲和三齡幼蟲所提取的總DNA經(jīng)電泳檢測(cè)，所得的DNA條帶完整，清晰無蛋白質(zhì)和RNA的污染。由于楊樹螢葉甲幼蟲在保存過程中方法有些不當(dāng)，DNA有些降解現(xiàn)象，但純度足夠高不影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。PCR擴(kuò)增后，將稀釋了50倍的楊樹螢葉甲成蟲和幼蟲的基因組DNA作為模板，利用通用引物對(duì)其擴(kuò)增，其分子量大小與預(yù)期大小基本一致。說明PCR體系也很好的滿足實(shí)驗(yàn)要求，可以進(jìn)行后續(xù)的產(chǎn)物測(cè)序。測(cè)序完成后，獲得了楊樹螢葉甲的成蟲和三齡幼蟲的COI基因序列。

楊樹螢葉甲屬于完全變態(tài)昆蟲，其幼蟲有三個(gè)齡期，而通過幼蟲的形態(tài)學(xué)觀察無法斷定其種類，DNA條形碼就可以快速準(zhǔn)確的鑒定出來此幼蟲是否為楊樹螢葉甲。若鑒定出來，就可以采取合理的方法來進(jìn)行有效的防治。隨著DNA條形碼技術(shù)的不斷發(fā)展，可以彌補(bǔ)傳統(tǒng)的昆蟲鑒定方法的不足之處，為簡單快速的鑒定昆蟲提供了方法。線粒體基因組的獲得對(duì)于所需的實(shí)驗(yàn)材料要求很高，最好是100%酒精浸泡的新鮮標(biāo)本；對(duì)DNA模板質(zhì)量、PCR的反應(yīng)條件、實(shí)驗(yàn)操作過程及序列的測(cè)定都有很高的要求。因此，在對(duì)昆蟲測(cè)序上，利用DNA條形碼技術(shù)有優(yōu)點(diǎn)也有缺點(diǎn)，還需要繼續(xù)更深入的研究。

注：*表示堿基相同,·表示缺失

Note:* expressed the same base, ·expressed the base deletion

圖4 楊樹螢葉甲三齡幼蟲和成蟲的COⅠ基因序列對(duì)比
Fig.4COⅠ gene sequence comparison between 3rdinstars larvae and adult ofAgelasticaalniorientalisBaly

4 結(jié) 論

通過對(duì)楊樹螢葉甲的成蟲和幼蟲總DNA的提取，PCR擴(kuò)增后進(jìn)行測(cè)序，獲得了楊樹螢葉甲的成蟲和幼蟲的COI基因的序列。由于成蟲和幼蟲的序列最高具有97.74%的一致性，可以根據(jù)所獲得的序列作為一個(gè)參考標(biāo)準(zhǔn)。DNA條形碼技術(shù)的應(yīng)用如同平時(shí)在超市購物，可以通過刷條形碼來確定物品種類、價(jià)格?，F(xiàn)在，COI基因的序列可作為楊樹螢葉甲DNA條形碼。所獲得的楊樹螢葉甲的COⅠ基因序列就可以作為該昆蟲的條形碼，對(duì)其各齡期進(jìn)行快速準(zhǔn)確鑒定，為害蟲的及時(shí)有效防治提供科學(xué)依據(jù)。

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DNA Barcoding ofAgelasticaalniorientalisBaly

(Coleoptera: Chrysomelidae)

XI Ou-yan, LI Xiao, ZHENG Fei, DUAN Xing-chen, TANG Xiu-li, HU Hong-ying

(CollegeofLifeScienceandTechnology,XinjiangUniversity,Urumqi830046,China)

Abstract：【Objective】 Angelastica alniorientails Baly is mainly distributed in Xinjiang, and it is harmful to the leaf of willow and apple tree, the most harmful period of this pest to the crops is in its larval phase which is difficult to be identified. DNA barcoding is a new life identification system which can distinguish species rapidly and accurately by analyzing standard short DNA sequences with enough variation.【Method】By extracting the genomic DNA of Angelastica alniorientails Baly, the CO I gene was used as universal primers to PCR, and the accurate base sequence was got as the DNA barcoding of Angelastica alniorientails Baly.【Result】This study based on the theory that different instars of Angelastica ainiorientails Baly DNA sequence is always consistent. The CO I gene sequence of Angelastica alniorientails Baly in larva and adult can be obtained by the technology of DNA barcoding, and then analyse the serial.CO I gene sequence comparison between 3rd instars larvae and adult of Agelastica alni orientalis Baly,the results show that the similarity of up to 97.74%.So the sequences obtained can be used for preliminary identification of Agelastica alni orientalis Baaly.【Conclusion】Because this method can identify the species of pest simply, rapidly and accurately, it might be able to provide the primary data for pest prevention in time.

Key words:Agelastica alni orientalis Baly; DNA barcoding; COⅠ; rapid and accurate identification

通訊作者:胡紅英(1969-)，女，新疆人，教授，博士，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)槔ハx學(xué)，(E-mail)hoohyi-69@163.com

作者簡介:席歐彥(1990-)，女，河南省碩士研究生，研究方向?yàn)樯飳W(xué)，(E-mail)13565801178@163.com

基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(U1170305);國家大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)訓(xùn)項(xiàng)目(XJU-SRT-13049)

收稿日期：2015-10-08

中圖分類號(hào)：S188;S433.5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1001-4330(2016)02-0309-08

doi:10.6048/j.issn.1001-4330.2016.02.017