譚麗超，卜元卿，程 燕，單正軍　(環(huán)境保護部南京環(huán)境科學研究所，江蘇南京 210042)

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日糧配方·蟲齡和化蛹板對蜜蜂幼蟲生長發(fā)育的影響

譚麗超，卜元卿，程 燕，單正軍(環(huán)境保護部南京環(huán)境科學研究所，江蘇南京 210042)

摘要[目的]模擬自然狀況下蜜蜂幼蟲發(fā)育的環(huán)境條件，探索可行的飼養(yǎng)模式，建立完整的室內人工飼養(yǎng)蜜蜂幼蟲的技術。[方法]以意大利蜜蜂幼蟲為研究對象，以幼蟲存活率、蛹化率和羽化率為評價指標，探討日糧配方、蟲齡和化蛹板等對幼蟲生長發(fā)育的影響。[結果]通過篩選獲得了比較理想的室內人工培養(yǎng)蜜蜂幼蟲的技術，其中幼蟲存活率、蛹化率和羽化率均可達到90%以上。[結論]該研究建立了有效、可行的蜜蜂幼蟲的飼養(yǎng)技術，為進一步研究典型農藥對蜜蜂幼蟲毒性的影響奠定了基礎。

關鍵詞農藥；幼蟲毒性；室內飼養(yǎng)技術

蜜蜂以其授粉高效性、采集專一性和種群社會性等優(yōu)勢在許多農作物授粉中發(fā)揮著重要作用，是自然界最重要的有益昆蟲之一。然而，一些農藥殺蟲劑的不合理使用不僅會傷害采集蜂，而且對蜂群中的幼蟲也具有一定的影響。蜜蜂是典型的真社會性昆蟲，具有明確而細致的勞動分工，蜂群中的幼蟲食物由專職哺育蜂來提供，而人工對幼蟲進行操作，幼蟲往往會被工蜂遺棄[1]，并且在自然蜂群中添加殺蟲劑來研究其對采集蜂和幼蟲的影響時，試驗產物易存儲于巢脾上影響蜂群繁殖，同時還受到外界蜜源沖淡殺蟲劑劑量的影響，造成了人為干預下對蜜蜂幼蟲研究的困難。

建立實驗室內人工飼養(yǎng)蜜蜂幼蟲的技術，是蜜蜂幼蟲作為模式生物研究的基礎[2-4]，是開展農藥對蜜蜂幼蟲毒性試驗的前提。目前已有的室內飼養(yǎng)技術側重于飼喂板的新舊和移蟲模式[5-8]，忽略了日糧配方、蟲齡和化蛹板等方面的影響，導致幼蟲成活率、蛹化率及羽化率均偏低。筆者以意大利蜜蜂幼蟲為研究對象，以實驗室內其正常發(fā)育為目標，模擬自然狀況下蜜蜂幼蟲發(fā)育的環(huán)境條件，探索可行的蜜蜂幼蟲的飼養(yǎng)模式，建立完整的室內人工飼養(yǎng)蜜蜂幼蟲的技術，完善農藥對蜜蜂幼蟲毒性影響試驗的關鍵技術，旨在為進一步開展典型農藥對蜜蜂幼蟲毒性影響研究奠定基礎。

1材料與方法

1.1材料與儀器

1.1.1試驗材料。意大利蜜蜂、無菌水、鮮蜂王漿、D-果糖、葡萄糖、酵母提取物等。

1.1.2儀器與耗材。高壓滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、48孔細胞培養(yǎng)板、24孔細胞培養(yǎng)板、烘箱、電子天平、移蟲針。

1.2試驗方法

1.2.1不同日糧配方對蜜蜂幼蟲存活率的影響。為獲得最佳蜜蜂幼蟲飼糧配比，參照OECD237[9]及Vandenberg等[10]的幼蟲基礎飼糧配方，配制4種蜜蜂幼蟲飼糧，以供篩選。4種幼蟲日糧(Larval diet，LD)的配方如表1所示。4種日糧分別配制，現用現配。

試驗按日糧分為4個處理，每個處理 3個培養(yǎng)板(48 孔)即 3個重復，隨機挑取1日齡幼蟲進行飼喂。全過程觀測幼蟲生長狀況，測定飼喂至化蛹期幼蟲的存活率，觀測比較4種日糧的飼喂效果。

1.2.2蟲齡對幼蟲存活率的影響。試驗日糧統一為試驗1 中飼喂效果最佳的日糧配方，1日齡前期幼蟲(蛋青色)和1日齡后期幼蟲(白色)2個處理組，每個處理 3個培養(yǎng)板(48 孔)即 3個重復。全過程觀測幼蟲生長狀況，測定飼喂至化蛹期幼蟲的存活率，比較2種蟲齡的發(fā)育效果。

1.2.3不同化蛹板對幼蟲發(fā)育的影響?；及宓哪康氖亲尲磳⒒嫉挠紫x在無菌的情況下蛹化。為獲得最佳化蛹條件，試驗設置2個處理組，1個處理組在24孔培養(yǎng)板孔內墊干燥的無菌擦鏡紙，另1個處理組為空白24孔培養(yǎng)板。試驗日糧統一為試驗1 中飼喂效果最佳的日糧配方，挑取試驗2 中飼喂效果最佳的蟲齡進行飼喂，然后將進入排便期即將化蛹的幼蟲(預蛹)用移蟲針移入化蛹板孔中，每孔1 只。此后，不再移動蟲體，幼蟲可在孔中完成排便、吐絲和化蛹的過程，最后羽化為成蜂。測定化蛹率和羽化率，比較2種化蛹板的效果。

2結果與分析

2.1不同日糧配方對幼蟲存活率的影響在飼喂過程中發(fā)現，飼喂LD1、LD2和LD3日糧的幼蟲生長不佳，幼蟲在移植到培養(yǎng)板 3 d左右死亡，個別幼蟲在發(fā)育到蛹期后停止發(fā)育，然后死亡。由表2可知，飼喂LD1、LD2和LD3 3種日糧的幼蟲存活率均低于50%，難于滿足幼蟲毒性試驗的要求。飼喂LD4日糧的的幼蟲生長良好，幼蟲前3 d幾乎不移動，僅采食其身邊的食物，第4天起就可以移動到培養(yǎng)板孔的大部分地方采食大量的食物，且幼蟲的身體以驚人的速度增長，第7天80%的幼蟲存活，且開始排便。由此可見，4種日糧配方中LD4 對幼蟲的飼喂效果明顯優(yōu)于LD1、LD2和LD3。

2.2蟲齡對幼蟲存活率的影響在飼喂過程中發(fā)現，1日齡前期幼蟲在移植到培養(yǎng)板前3 d長勢比較不錯，第4天50%

表2不同日糧配方對幼蟲存活率的影響

Table 2Effects of different diets on the survival rate of the larvae

以上的幼蟲身體彈性減弱，逐漸停止發(fā)育然后死亡。1日齡后期幼蟲生長良好，90%以上的幼蟲存活，排便進入蛹化期。由表3可知，1日齡后期幼蟲飼喂效果明顯優(yōu)于1日齡前期幼蟲。這可能是因為1日齡前期幼蟲所處的巢孔內蜂王漿含量較1日齡后期的幼蟲少，保護措施較差，在人工移蟲過程中對其傷害較大，導致幼蟲受傷，所以后期幼蟲死亡。

2.3不同化蛹板對幼蟲發(fā)育的影響由表4可知，2種化蛹板模式下蜜蜂幼蟲的蛹化率和羽化率差異極顯著(P<0.01)。空白的化蛹板的化蛹模式從預蛹到成蜂僅獲得44.44%的羽化率，而墊干燥的無菌擦鏡紙的化蛹板獲得高達95.83%的成活率。由此可見，墊干燥的無菌擦鏡紙的化蛹板更有利于幼蟲的發(fā)育。由于幼蟲在進入不再吃食的蛹期前，需將堆積于體內的糞便一次排出，而排出的糞便主要為黃色液體，墊干燥的無菌擦鏡紙可吸收排出的液體，保持幼蟲的身體干燥，便于更好地化蛹。

3小結

筆者通過篩選獲得了比較理想的蜜蜂幼蟲日糧營養(yǎng)配方，同時發(fā)現1日齡后期幼蟲飼喂效果明顯優(yōu)于1日齡前期幼蟲，墊干燥的無菌擦鏡紙的化蛹板更有利于幼蟲的發(fā)育，為大規(guī)模進行蜜蜂幼蟲的人工培養(yǎng)提供了條件，建立完整的室內人工飼養(yǎng)蜜蜂幼蟲的技術，完善農藥對蜜蜂幼蟲毒性影響試驗的關鍵技術，為進一步開展典型農藥對蜜蜂幼蟲毒性影響研究奠定基礎。

參考文獻

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Effects of Diet Formula, Insect Age and Pupation Plate on Growth and Development of Bee Larvaes

TAN Li-chao, BU Yuan-qing, CHENG Yan et al

(Nanjing Institute of Environmental Science, Ministry of Environmental Protection, Nanjing, Jiangsu 210042)

Key wordsPesticide; Larval toxicity; Indoor breeding technology

Abstract[Objective] Simulating environmental conditions for the development of bee larvae under natural conditions, the feasible breeding mode was explored, the complete indoor artificial cultivation technology for bee larvae was established. [Method] With Italy bee larvae as the research object, larvae survival rate, pupation rate and eclosion rate as evaluation indicators, effects of diet formula, insect age, pupation plate on growth and development of larvae were discussed. [Result] Through screening, the ideal indoor artificial cultivation technology for bee larvaes was obtained, the survival rate, pupation rate and eclosion rate could reach above 90%. [Conclusion] The study establishes an effective, feasible breeding technology for bee larvae, which will lay a foundation for further studying effects of typical pesticides on toxicity of bee larvae.

基金項目2015年中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務費專項。

作者簡介譚麗超(1985- )，女，山東威海人，助理研究員，碩士，從事農藥生態(tài)毒理學研究。

收稿日期2016-02-02

中圖分類號S 894

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2016)07-079-02