陳 健，康亞妮＊＊，沈挺挺，趙小東，付艷麗，許 玲

（1.上海交通大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)院/上海系統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)研究中心 上海 200240；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院 上海 200032）

中藥復(fù)方“金復(fù)康”抑制肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)機(jī)制的研究＊

陳 健1，康亞妮1＊＊，沈挺挺1，趙小東1，付艷麗2，許 玲2

（1.上海交通大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)院/上海系統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)研究中心 上海 200240；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院 上海 200032）

目的：本文主要探討中藥復(fù)方金復(fù)康萃取物對(duì)人非小細(xì)胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC）A549細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其分子機(jī)制。方法：本文以人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞為研究對(duì)象，應(yīng)用CCK8試劑盒檢測(cè)了金復(fù)康萃取物對(duì)細(xì)胞增殖活力的影響，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)金復(fù)康對(duì)細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)作用，實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-time qPCR，RT-qPCR）檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)。結(jié)果：金復(fù)康萃取物對(duì)A549細(xì)胞增殖有較顯著抑制作用，并且存在劑量依賴(lài)效應(yīng)。與對(duì)照組相比，金復(fù)康處理組細(xì)胞數(shù)量明顯減少，伴隨著大量細(xì)胞間距增大，失去原有形態(tài)，DAPI細(xì)胞核染色結(jié)果顯示細(xì)胞核受到損傷。流式細(xì)胞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)顯示金復(fù)康明顯誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡。RT-qPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)金復(fù)康上調(diào)凋亡相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平。結(jié)論：金復(fù)康通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抑制A549細(xì)胞增殖，這一過(guò)程可能與其誘導(dǎo)凋亡相關(guān)基因FADD和GADD45a表達(dá)上調(diào)有關(guān)。

肺癌 金復(fù)康 細(xì)胞凋亡 FADD基因 GADD45a基因

肺癌是當(dāng)今世界發(fā)病率和致死率最高的一類(lèi)惡性腫瘤[1]。工業(yè)化速度加快，環(huán)境污染加重和人口老齡化加劇等原因?qū)е路伟┌l(fā)病率和死亡率呈現(xiàn)出明顯上升趨勢(shì)[2]。目前對(duì)于肺癌的治療，臨床一般采取手術(shù)、化療、放療、分子靶向治療等手段[3]。臨床治療雖然可以增加患者的存活率且延長(zhǎng)存活期，但由于化療、放療等對(duì)人體傷害較大，也帶來(lái)了一些令人困擾的不良反應(yīng)[4]。許多中藥復(fù)方通過(guò)其多途徑、多靶點(diǎn)的綜合作用，在減輕其他治療不良反應(yīng)的同時(shí)，還可改善肺癌患者癥狀，提高生活質(zhì)量并延長(zhǎng)生存期。因此，目前認(rèn)為很多中草藥是很有潛力的生物藥物應(yīng)用于癌癥治療[5]。金復(fù)康是國(guó)家三類(lèi)治療肺癌的中成藥，在臨床中應(yīng)用較廣，已被國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局批準(zhǔn)的口服抗非小細(xì)胞肺癌藥物[6]。它作為一類(lèi)黃芪為主的中藥復(fù)方，已有報(bào)道可以提高非小細(xì)胞肺癌患者的化療效果[7]，并且可以在小鼠體內(nèi)抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，但是其分子作用機(jī)制尚不十分明確。

本研究通過(guò)不同濃度金復(fù)康醇取物作用于肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549，深入探討金復(fù)康抗腫瘤作用機(jī)制，從細(xì)胞形態(tài)學(xué)和分子水平檢測(cè)了金復(fù)康抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用，發(fā)現(xiàn)這些作用可能是由金復(fù)康誘導(dǎo)的凋亡相關(guān)基因FADD和GADD45a的表達(dá)所引起。這些研究為治療肺癌新型藥物的研制開(kāi)發(fā)提供了新思路，豐富了中醫(yī)藥扶正抗癌的理論，為中國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)藥進(jìn)一步用于腫瘤的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞系

人非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）細(xì)胞系A(chǔ)549由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院許玲教授課題組惠贈(zèng)，培養(yǎng)于RPMI-1640培養(yǎng)基。將A549細(xì)胞系置于37℃，5% CO2飽和濕度培養(yǎng)箱無(wú)菌培養(yǎng)。

1.2 金復(fù)康醇提物的制備

金復(fù)康醇提物由華東理工大學(xué)金郁教授課題組惠贈(zèng)。金復(fù)康按表1稱(chēng)量，70%乙醇200 mL, 80℃回流提取1 h。70%乙醇定容到200 mL；采用0.22 μm濾膜過(guò)濾，分裝后4℃密封保存。

1.3 主要儀器與試劑

倒置熒光顯微鏡（日本Nikon公司）；低溫離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司）；CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱（美國(guó)Thermo公司），NanoDrop 2000（美國(guó)Thermo公司）；T100-PCR儀（美國(guó)Bio-Rad公司）；ABI Step One Real-time PCR儀（美國(guó)ABI公司）；生物安全柜（新加坡ESCO公司）；Cell Counting Kit 8（日本同仁化學(xué)研究所）；Annexin V/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（北京莊盟國(guó)際生物科技有限公司）；TRIzolReagent，SuperScript III Reverse Transcriptase，UltraPureTMDNase/RNase-Free Distilled Water（美國(guó)Life-Invitrogen公司）；RNasin Ribonuclease Inhibitor（美國(guó)Promega公司）；SYBR Green PCR Master Mix（德國(guó)Bestar公司）。

表1 金復(fù)康組成成分

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制作用

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞，以2×103個(gè)/孔接種于96孔板，每孔加入200 μL培養(yǎng)基，細(xì)胞貼壁后吸盡原培養(yǎng)基，加入含不同濃度（0、0.04、0.05、0.08、0.10 mg·mL-1）的金復(fù)康藥物200 μL，每組設(shè)3個(gè)平行復(fù)孔，0 mg·mL-1設(shè)為對(duì)照組，另設(shè)與實(shí)驗(yàn)組平行但只加培養(yǎng)基不加細(xì)胞的空白對(duì)照組，培養(yǎng)48 h。棄掉培養(yǎng)基，加入100 μL檢測(cè)液（CCK8工作液：培養(yǎng)基=1：10），37℃避光孵育3 h。震蕩混勻，用全自動(dòng)酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)450 nm下測(cè)定各孔吸光值A(chǔ)。數(shù)據(jù)處理，以細(xì)胞增殖抑制率公式計(jì)算實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長(zhǎng)率，確定IC50濃度。細(xì)胞生長(zhǎng)率計(jì)算公式：抑制率/% =（對(duì)照組A450值-實(shí)驗(yàn)組A450值）/（對(duì)照組A450值-空白對(duì)照A450值）×100%

1.4.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化與DAPI染色

細(xì)胞爬片：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A549細(xì)胞，以1×105個(gè)/孔，接種于放有清潔無(wú)菌的載玻片的6孔板，培養(yǎng)24 h后，分別用0 mg·mL-1和IC50濃度金復(fù)康作用細(xì)胞48 h。光學(xué)顯微鏡下觀察0 mg·mL-1和IC50濃度作用后細(xì)胞狀態(tài)變化。DAPI染色觀察DNA損傷：各組細(xì)胞用PBS清洗3遍，用適量4%多聚甲醛固定細(xì)胞30 min后，加入1 μg·mL-1DAPI染色液室溫避光孵育10 min。在倒置熒光顯微鏡下觀察DNA完整性。

1.4.3 AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡

細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測(cè)：以1×105個(gè)/孔的濃度將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A549細(xì)胞，接種于放有清潔無(wú)菌載玻片的6孔板，待細(xì)胞貼壁后，分別用0 mg·mL-1和IC50濃度金復(fù)康處理細(xì)胞。藥物作用48 h后，PBS清洗玻片，每孔加入含有5 mL Annexin V-FITC染色液和10 mL PI染色液的Binding Buffer 500 μL，室溫避光孵育15 min后，倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率：不同濃度金復(fù)康（0、0.04、0.05 mg·mL-1）作用細(xì)胞48 h后，用不含EDTA的0.25%胰蛋酶消化細(xì)胞，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，1 000 r·min-1離心5 min，預(yù)冷PBS清洗2遍，加入500 μL Binding Buffer重懸細(xì)胞，避光加入5 mL Annexin V-FITC染色液和10 μL PI染色液，輕輕混勻，室溫避光孵育15 min，用細(xì)胞篩將細(xì)胞混懸液過(guò)濾至5 mL流式檢測(cè)管，流式檢測(cè)，同時(shí)使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的正常細(xì)胞作為對(duì)照進(jìn)行熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重迭和設(shè)定十字門(mén)的位置。

1.4.4 Real-time PCR檢測(cè)與細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)基因表達(dá)

TRIzol試劑直接提取金復(fù)康（0、0.05 mg·mL-1）處理后的A549細(xì)胞總RNA，Nanodrop 2000核酸定量?jī)x檢測(cè)RNA濃度和純度。取各實(shí)驗(yàn)組1 μg總RNA，按照Superscript IIIReverse Transcriptase說(shuō)明書(shū)反轉(zhuǎn)錄為cDNA。Real-time qPCR檢測(cè)FADD和GADD45a基因表達(dá)，擴(kuò)增引物序列如下：GADD45a-F：CTGGAGAGCAGAAGACCGAA，G A D D 4 5 a-R：A C C C C G A C A G T G A T C G T G；FADD-F：CTGGGGAAGAAGACCTGTGT，F(xiàn)ADD-R：CTGACGAGCCAGCCTTC TC。PCR反應(yīng)：SYBR Green PCR Master Mix（2×）5 μL；Forward Primer（10 μM）0.4 μL；Reverse Primer （10 μM）0.4 μL；cDNA 2 μL；補(bǔ)水至10 μL。PCR擴(kuò)增：95℃，2 min；95℃，10 s；60℃，30 s；72℃，30 s。使用ABI Step One儀器及軟件分析各目的基因表達(dá)情況。

1.4.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異分析采用Student t檢驗(yàn)，P＜0.05時(shí)對(duì)比組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 金復(fù)康對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用

不同濃度金復(fù)康萃取物處理A549細(xì)胞48 h后，用Cell Counting Kit 8檢測(cè)細(xì)胞活力。結(jié)果顯示，金復(fù)康對(duì)A549細(xì)胞增殖有明顯抑制作用，并且隨著濃度的增大，抑制作用越明顯。當(dāng)藥物濃度分別為0.04、0.05、0.08 mg·mL-1時(shí)，細(xì)胞活力分別是61%、44%和41%。金復(fù)康的半數(shù)抑制濃度約為0.05 mg·mL-1（圖1）。

2.2 金復(fù)康引起A549細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化與DNA損傷

與對(duì)照組細(xì)胞相比，金復(fù)康處理組細(xì)胞數(shù)量明顯減少，而且伴隨著細(xì)胞間距增大，失去原有形態(tài)（圖2A）。DAPI染色結(jié)果顯示細(xì)胞核受到損傷（圖2B）。此結(jié)果表明金復(fù)康抑制細(xì)胞增殖，這種抑制作用可能與引起細(xì)胞染色體損傷有關(guān)。

2.3 金復(fù)康誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡

為了確定A549細(xì)胞凋亡與金復(fù)康誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡之間的關(guān)聯(lián)，本文用倒置熒光顯微鏡檢測(cè)了A549細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化（圖3A）。同時(shí)用AnnexinV-FITC和PI對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色分辨正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞。凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜蛋白磷酯酰絲氨酸會(huì)外翻到膜外，可與AnnexinV結(jié)合進(jìn)而被FITC染成綠色，而細(xì)胞核則會(huì)被PI染成紅色。如圖3A所示，凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜被AnnexinV-FITC染成綠色，細(xì)胞核被PI染成紅色，而正常細(xì)胞則沒(méi)有被染上色。進(jìn)一步采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率（圖3B），發(fā)現(xiàn)0.04 mg·mL-1和0.05 mg·mL-1的金復(fù)康處理細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡率分別是10.2%和39.9%，而正常細(xì)胞為4.2%。此結(jié)果說(shuō)明金復(fù)康明顯誘導(dǎo)了A549細(xì)胞凋亡。

圖1 金復(fù)康對(duì)A549細(xì)胞增殖抑制作用

圖2 金復(fù)康處理A549后細(xì)胞形態(tài)變化和DNA損傷

圖3 金復(fù)康誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡

圖4 金復(fù)康誘導(dǎo)FADD和GADD45a表達(dá)上調(diào)

2.4 金復(fù)康調(diào)節(jié)與細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的mRNA水平表達(dá)

為了進(jìn)一步闡明金復(fù)康誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡的分子調(diào)控機(jī)制，本文用Real-time PCR檢測(cè)了凋亡相關(guān)基因的mRNA表達(dá)水平（圖4）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與凋亡相關(guān)重要基因FADD和GADD45a的表達(dá)均上調(diào)。

3 討論

自然界多細(xì)胞有機(jī)體中都存在細(xì)胞增殖與死亡的平衡穩(wěn)態(tài)。二者的失衡往往會(huì)導(dǎo)致很多疾病。腫瘤的一個(gè)明顯特征就是可以腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖。中醫(yī)理論認(rèn)為癌癥可能是由于機(jī)體陰陽(yáng)失衡導(dǎo)致[8]。細(xì)胞增殖與死亡正類(lèi)似于中醫(yī)的陰陽(yáng)消長(zhǎng)，這種陰陽(yáng)消長(zhǎng)平衡被打破是導(dǎo)致癌癥發(fā)生的原因之一。細(xì)胞凋亡是正常細(xì)胞死亡的重要途徑之一，但是在很多腫瘤組織中，細(xì)胞凋亡往往會(huì)失去控制，肺癌的發(fā)生發(fā)展也與細(xì)胞凋亡失控密切相關(guān)[9]。

金復(fù)康是上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院教授劉嘉湘先生，以扶正祛邪思想為指導(dǎo)，歷經(jīng)30多年臨床研究總結(jié)的中藥復(fù)方。針對(duì)肺癌患者多有氣陰兩虛的特點(diǎn)，金復(fù)康精選了益氣養(yǎng)陰，補(bǔ)腎培本等扶正中藥為主，佐以清熱解毒功用中藥組成配伍方藥[10]。金復(fù)康在控瘤和提高患者生存質(zhì)量等方面具有較好療效。本文從誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡方面研究了金復(fù)康的作用機(jī)制。

參與細(xì)胞凋亡調(diào)控的蛋白有很多，F(xiàn)as相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白（Fas Associated Death Domain，F(xiàn)ADD）是死亡受體途徑中重要的一類(lèi)轉(zhuǎn)接蛋白，它可以將Fas/FasL結(jié)合后的凋亡信號(hào)傳導(dǎo)到下游蛋白，激活Caspase8并導(dǎo)致下游Caspase3和Caspase6級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而引起細(xì)胞凋亡[11]。Shin等[12]發(fā)現(xiàn)在大多數(shù)非小細(xì)胞肺癌中均有FADD的表達(dá)。楊超等[13]報(bào)道FADD的表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌的惡性程度有一定關(guān)系，惡性程度越高，對(duì)應(yīng)FADD表達(dá)水平越低。楊琴等[14]發(fā)現(xiàn)FADD在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)程度與癌細(xì)胞凋亡呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)。楊仁榮等[15]的研究發(fā)現(xiàn)在NSCLC組織中癌細(xì)胞凋亡與Fas/FasL的表達(dá)不具相關(guān)性?？梢酝茰y(cè)，非小細(xì)胞肺癌中FADD介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡可能存在不依賴(lài)Fas/FasL的其他通路。另外，F(xiàn)ADD不僅與細(xì)胞凋亡相關(guān)，還可能參與細(xì)胞周期調(diào)控，控制細(xì)胞增殖[16]。因此，F(xiàn)ADD與細(xì)胞凋亡的關(guān)系十分密切。

1988年Fomace等發(fā)現(xiàn)基因GADD45a，其為生長(zhǎng)阻滯和DNA損傷基因[17]。當(dāng)細(xì)胞受到外界因素?fù)p傷時(shí)，GADD45a被誘導(dǎo)高表達(dá)，調(diào)控細(xì)胞周期阻滯于G2/M期[18]。GADD45a的誘導(dǎo)表達(dá)還可以通過(guò)上調(diào)P21、P27、P57等DNA損傷修復(fù)有關(guān)基因，活化P38和JNK通路有效促進(jìn)細(xì)胞凋亡[19]。GADD45a還可誘發(fā)細(xì)胞骨架穩(wěn)定性降低，致使淋巴細(xì)胞瘤-2相互作用的細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)因子（Bcl-2 Interacting Mediator of Cell Death，Bim）蛋白從細(xì)胞骨架解離和Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bcl-2 Assaciated X protein，Bax）寡聚體的形成，導(dǎo)致細(xì)胞色素c由線(xiàn)粒體進(jìn)入胞漿，促進(jìn)凋亡的形成[20]。GADD45a作為生長(zhǎng)周期阻滯和DNA損傷調(diào)節(jié)機(jī)制中的重要基因，在維持基因組穩(wěn)定、抑制腫瘤的發(fā)生、誘導(dǎo)凋亡等生物學(xué)過(guò)程中起著十分重要的作用。

本文CCK8結(jié)果顯示，金復(fù)康對(duì)A549細(xì)胞增殖有明顯抑制作用，并且隨著濃度的增大，抑制作用越明顯。DAPI細(xì)胞核染色實(shí)驗(yàn)表明金復(fù)康抑制細(xì)胞增殖作用可能與引起細(xì)胞染色體損傷有關(guān)。AnnexinV-FITC和PI雙染實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行了定性檢測(cè)，并進(jìn)一步采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，發(fā)現(xiàn)金復(fù)康明顯誘導(dǎo)了A549細(xì)胞凋亡。為了進(jìn)一步闡明具體的分子調(diào)控機(jī)制，本文用Real-time PCR檢測(cè)了凋亡相關(guān)基因的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與凋亡相關(guān)重要基因FADD和GADD45a的表達(dá)均上調(diào)，表明金復(fù)康可通過(guò)FADD和GADD45a介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑來(lái)達(dá)到抗腫瘤的作用。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)證明金復(fù)康醇提物可以誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞的凋亡，這種凋亡作用是通過(guò)激活FADD和GADD45a介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑完成的。本研究為中醫(yī)藥治療肺癌提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和一定的理論支持。

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A Study on the Mechanism Behind the Growth Inhibition of Human Lung Cancer Cells Induced by Chinese Herbal Compound Jin Fu Kang (JFK)

Chen Jian1, Kang Yani1, Shen Tingting1, Zhao Xiaodong1, Fu Yanli2, Xu Ling2
(1. School of Biomedical Engineering, Bio-ID Research Center, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200240, China;
2. Tumor Institute of Traditional Chinese Medicine, Longhua Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200032, China)

The aim of the study was to explore the effects of JFK on the proliferation and apoptosis of human nonsmall cell lung cancer (NSCLC), A549 cells, and its mechanism. In this study, we investigated the anticancer activity and the underlying mechanism of JFK extract on A549 cells. Cell viability analysis was detected using Cell Counting Kit 8 (CCK8), while cell apoptosis was analyzed by flow cytometry. The genetic expressions involved in the apoptosis were quantified using RT-qPCR. As a result, JFK extract inhibited the proliferation of A549 cells in a dose-dependent manner. Compared with untreated cells, the number of living cells administered with JFK extract was significantly decreased, while numerous cells were enlarged and became flat. DAPI staining results indicated that nuclear damage of A549 cells were induced by JFK extract. Flow cytometry assay showed that apoptosis occurred in A549 cells after the administration of JFK extract. It was found that the levels of apoptosis associated genes were up-regulated detected by real-time qPCR. In conclusion, it was demonstrated that JFK extract inhibited the proliferation of lung cancer cell by means of cell apoptosis which could be involved in the up-regulation of FADD and GADD45a, the apoptosis associated genes.

Lung cancer, Jin Fu Kang, cell apoptosis, FADD gene, GADD45a gene

10.11842/wst.2016.10.024

R285

A

（責(zé)任編輯：朱黎婷，責(zé)任譯審：朱黎婷）

2014-12-23

修回日期：2014-12-29

＊ 國(guó)家中醫(yī)藥管理局國(guó)家中醫(yī)臨床研究基地業(yè)務(wù)建設(shè)科研專(zhuān)項(xiàng)課題（JDZX2012123）：基于轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)分析的中藥復(fù)方作用機(jī)理的研究，主持人：趙小東；上海龍華醫(yī)院國(guó)家中醫(yī)臨床研究基地“龍醫(yī)團(tuán)隊(duì)、龍醫(yī)學(xué)者”項(xiàng)目（LYTD-21）：以轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)為表征參數(shù)的金復(fù)康作用機(jī)理研究，主持人：趙小東；上海交大-SMC晨星青年學(xué)者獎(jiǎng)勵(lì)計(jì)劃（15X100090011）：腫瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制，主持人：康亞妮。

＊＊ 通訊作者：康亞妮，講師，主要研究方向：從事中藥抗腫瘤活性及其機(jī)制研究。