韓榮華

摘 要：為了分析幾種主要病毒病在指示植物上的癥狀，利用指示植物UC10、UC5通過草莓小葉嫁接法，檢測草莓病毒癥狀，特別是單一病毒感染指示植物時(shí)的癥狀。通過設(shè)置多重處理、對(duì)照，比較各處理間、處理內(nèi)癥狀差異，得出病毒在各種指示植物上的癥狀特點(diǎn)。檢測結(jié)果表明：首先，此次試驗(yàn)所檢測的病毒為我國主要草莓病毒，它們是草莓輕型黃邊病毒、草莓斑駁病毒、草莓鑲脈病毒；其次，在嫁接前準(zhǔn)備方面總結(jié)出一套培育壯苗的方法，可顯著提高葉柄粗度34.76%，提高葉柄長度47.83%，為提高嫁接成活率提供了很大的幫助；再次，在嫁接過程中應(yīng)用科學(xué)高效的嫁接方法，達(dá)到了嫁接成活率100%，為后面的癥狀鑒定提供了便利；最后，根據(jù)觀察的癥狀，推測草莓輕型黃邊病毒與草莓鑲脈病毒之間的相互影響關(guān)系。

關(guān)鍵詞：草莓；病毒；小葉嫁接；指示植物

我國草莓產(chǎn)區(qū)普遍存在的病毒有4種，即草莓斑駁病毒（SMoV）、草莓皺縮病毒（SCrV）、草莓輕型黃邊病毒（SMYEV）和草莓鑲脈病毒（SVBV）。 草莓感染病毒后，特別是感染單種病毒，大多癥狀不顯著或難以看出什么癥狀，稱為隱癥。 草莓病毒侵染草莓后，主要表現(xiàn)為葉片失綠、畸形、生長量減少、植株矮化、產(chǎn)量下降、品質(zhì)變劣等。目前，我國草莓產(chǎn)區(qū)中這4種病毒的總侵染株率達(dá)80.2%，其中單種病毒侵染株率為41.6%，兩種或兩種以上病毒復(fù)合侵染株率為38.6%。單—病毒感染植株可使草莓減產(chǎn)20%～30%，兩種病毒復(fù)合感染減產(chǎn)可達(dá)50%，栽培年限越長，感染的病毒種類越多，發(fā)病受害程度越重。

目前對(duì)草莓病毒的檢測主要有4條途徑，即對(duì)栽培植株的外觀性狀直接觀察分析判斷；利用電子顯微鏡直接觀測植株組織中的病毒；利用醫(yī)學(xué)上抗血清鑒定法檢測草莓病毒；在特定的指示植株上接種鑒定。由于病毒侵染栽培植株表現(xiàn)的癥狀在不同的生育階段和季節(jié)中不甚一致、明顯，用直接觀察的辦法難以明確判定侵染病毒的種類，電子顯微鏡法和抗血清檢測法操作復(fù)雜、要求精密、適用面太窄，而指示植物接種檢測法簡單直接又方便實(shí)用。

自從哈雷斯（1942）提出林叢草莓（Fragaria Vesca）可以作為草莓病毒檢測指示植物以來，已確定林叢草莓中的UC4、UC5、UC6以及深紅草莓（Fragaria Virginiana）中的UC10、UC11和UC12共6個(gè)單系作為草莓主要病毒檢測的指示植物，并在國際上通用。為了提高檢測的準(zhǔn)確性，有時(shí)又在草莓病毒檢測指示植物中接種了特定的潛隱型病毒，使有的病毒病癥狀易于顯現(xiàn)。較常用的是Frazier（1974）改進(jìn)的小葉嫁接法，檢測并保存病毒。

本試驗(yàn)通過小葉嫁接法鑒定分析幾種主要病毒病在指示植物上的癥狀。

1 材料和方法

1.1 材料

試驗(yàn)所需材料有指示植物UC10、UC5，生產(chǎn)用的已染病毒草莓苗，以及嫁接用的刀片、70%濃度乙醇、捆綁用塑料條（厚0.08毫米，寬9毫米，長20厘米）、塑料袋（膜）、游標(biāo)卡尺、數(shù)碼相機(jī)等。因組織培養(yǎng)的UC5莖尖取樣不同，株系間有差異，所以UC5分成3個(gè)株系，用UC5（1）、UC5（2）、UC5（3）表示。

1.2 嫁接方法

所有嫁接試驗(yàn)均采用劈接法，具體步驟如下。

1.2.1 準(zhǔn)備嫁接材料 選擇嫁接用的接穗與指示植物。準(zhǔn)備好嫁接刀片、捆綁用的塑料條。接穗與指示植物盡量粗大，便于操作，其次注意葉齡，指示植物葉齡以葉片充分展開的新功能葉為宜，因?yàn)橐ＷC它在嫁接后可生長期足夠長，便于滿足觀察與鑒定的需要。而相對(duì)于接穗的葉齡，最好與指示植物葉齡相匹配。如果條件有限，至少選擇在20天內(nèi)不會(huì)自然衰亡的葉片。然后留葉柄3厘米以上采摘接穗，準(zhǔn)備嫁接。

1.2.2 切葉 用刀片沿指示植物中間葉片根部兩側(cè)斜向內(nèi)切，兩刀匯于一點(diǎn)，刀口呈“V”字型，刀深小于1毫米，取下中間葉片。然后切接穗，在接穗中間復(fù)葉根部沿斜向外方向削去兩側(cè)葉片，刀深至少1毫米。然后再沿兩側(cè)切口向下削成契型。兩面盡量作到一刀成型、削面平滑。楔型面長在0.8～1.5厘米范圍內(nèi)，過短影響嫁接成活率；過長捆綁費(fèi)時(shí)，影響工作效率，1.2厘米為最適長度。再于指示植物“V”型切口底端處，向下切至與接穗等長深度，使指示植物切口上端與接穗切口上端相平，或略大于。

1.2.3 捆綁 以事先準(zhǔn)備好的塑料條，從下端開始自下而上捆綁。要求每綁一圈前都加力使塑料條拉伸變長，然后再繞圈，隨著捆綁圈數(shù)的增加，可以借助塑料條回縮力量使傷口接合處緊密貼合，有利于成活。綁到上端切口時(shí)，注意綁緊，使切口不直接暴露于空氣中，防止失水。然后向下回綁至底端，在底端打結(jié)。最后可以不必涂抹凡士林油，即達(dá)到保濕效果，因?yàn)榫o綁的塑料條層層緊貼，完全可以防止透氣、失水，而且節(jié)省材料和時(shí)間，提高工作效率。

1.2.4 套袋保濕 嫁接完畢的指示植物應(yīng)套透明塑料袋保濕。塑料袋高度應(yīng)高于指示植物5～10厘米，以不限制植株生長為宜。在袋的中下部留有一透氣孔。澆足水后，置于溫度1～20℃環(huán)境中，完全避免太陽直射光。濕度以肉眼觀察：葉片早上結(jié)露，中午葉片干燥，袋內(nèi)壁始終有小水珠為宜。10～14天后揭袋，最少不得低于7天。

2 病毒癥狀鑒定

2.1 草莓輕型黃邊病毒癥狀鑒定

在植株上采摘4枚葉片，分別嫁接到指示植物UC10，UC5（1），UC5（2），UC5（3）上，成為一個(gè)處理。記錄分析處理內(nèi)各指示植物發(fā)病癥狀，發(fā)病時(shí)間，及同一指示植物在各處理間的發(fā)病癥狀和發(fā)病時(shí)間。

草莓輕型黃邊病毒只發(fā)生在成熟功能葉片前端或葉緣，表現(xiàn)為片狀暗紅色斑。依植物抗性不同及感染輕重不同，有復(fù)葉中的單個(gè)葉片發(fā)病和多葉同時(shí)發(fā)病多種情況。中期紅斑處顏色變褐，葉片病變處變薄，葉綠體徹底死亡，葉片無法光合作用，最終導(dǎo)致整個(gè)葉片提早死亡。

通過處理內(nèi)比較，草莓輕型黃邊病毒在各指示植物上癥狀相似，無明顯差異。處理比較則UC10，易表現(xiàn)癥狀，且潛伏期短，發(fā)病較快。上草莓輕型黃邊病毒較適宜的指示植物。由于株系間差異UC5（2）次之，UC5（1）再次之，UC5（3）無發(fā)病癥狀。

分析原因：可能是由于株系間脫毒有差異，所攜帶的潛隱病毒不同，造成最終同種異株系間表現(xiàn)有差異。

2.2 草莓班駁病毒癥狀鑒定

發(fā)病植株中，幼嫩葉片感病癥狀明顯。前期葉片普遍褪綠；中期生長勢衰退；后期葉片硬質(zhì)化，并嚴(yán)重黃化。三重復(fù)葉已展開的嫩葉發(fā)病后，中間葉片靠近葉柄處的葉緣明顯向下反卷，兩側(cè)復(fù)葉也有不同程度下卷。幼葉葉背靠近葉柄處有硬質(zhì)黃化斑塊。葉片未展開的幼葉，葉片扭曲，黃化。葉背及葉柄茸毛多而密，不久便枯黃失去生活力。成熟葉片感病后，葉片變薄，失去肉質(zhì)感，次脈間葉肉凹凸不平，呈波浪狀起伏，造成葉片不同程度扭曲畸形。據(jù)癥狀觀察和數(shù)據(jù)分析UC5（2）癥狀表現(xiàn)較明顯，屬于易感株系，做指示植物效果較好。

2.3 草莓鑲脈病毒癥狀鑒定

癥狀1：觀察本組指示植物，發(fā)病癥狀較統(tǒng)一。草莓鑲脈病毒在指示植物上表現(xiàn)癥狀是：感病指示植物前期大部分葉片均勻褪綠，后期，葉片正面主脈兩側(cè)出現(xiàn)不規(guī)則嫩黃色斑，葉片背部相應(yīng)部位呈暗黃色、硬化。幼齡葉片癥狀尤其明顯，幼葉葉片較小，葉柄較短，葉背、葉柄茸毛較多、較密，葉片變硬質(zhì)、脆化。整株表現(xiàn)矮化特征，抽生新芽較少，植株生長勢減緩。

綜合試驗(yàn)過程中各組發(fā)病癥狀分析：發(fā)病的各處理內(nèi)癥狀相似。有一處理內(nèi)各指示植物均未發(fā)病。推測原因由于接穗株所攜帶病原數(shù)量差異導(dǎo)致指示植物未發(fā)病。根據(jù)發(fā)病株發(fā)病情況統(tǒng)計(jì)得出各指示植物對(duì)草莓鑲脈病毒的敏感度由高至低順序?yàn)椤C5（1）、UC10、UC5（2）、UC5（3）。

癥狀2：癥狀相似第一組輕型黃邊病毒的癥狀，此癥狀表現(xiàn)比例也較大，但多數(shù)不明顯。結(jié)果分析：由于已知接穗帶有草莓鑲脈病毒，對(duì)于是否帶有草莓輕型黃邊病毒及其他病毒不確定，但最終又表現(xiàn)出草莓輕型黃邊病毒的典型癥狀，所以可以推論出兩種情況。推論1：接穗中普遍含有草莓輕型黃邊病毒。但從發(fā)病癥狀來看，癥狀均較輕微，不明顯。所以推測，草莓輕型黃邊病毒與草莓鑲脈病毒同時(shí)存在時(shí)，鑲脈病毒會(huì)干擾輕型黃邊病毒的發(fā)病，使之發(fā)病減弱，可以稱這種現(xiàn)象為“拮抗效應(yīng)”。推論2：接穗中并不攜帶輕型黃邊病毒，指示植物中含有可被激活的隱性病毒。接穗中的鑲脈病毒與指示植物接合，促進(jìn)了指示植物體內(nèi)相應(yīng)隱性病毒發(fā)病，使之處于激活態(tài)，從而表現(xiàn)出非接種病毒癥狀，可以稱這種現(xiàn)象為“活化效應(yīng)”。

據(jù)癥狀觀察和數(shù)據(jù)分析UC5（2）癥狀表現(xiàn)較明顯，屬于易感株系，做指示植物較好，UC10次之。

3 結(jié)論

在嫁接部分，作者總結(jié)出一套嫁接流程和兩種育壯苗方法，依此方法操作，在試驗(yàn)中嫁接成活率可以達(dá)到100%。

在病毒癥狀鑒定、分離過程中，通過觀察嫁接之后的指示植物表現(xiàn)，統(tǒng)計(jì)并分離出草莓輕型黃邊病毒、草莓斑駁病毒、草莓鑲脈病毒在指示植物上的發(fā)病癥狀。有相同點(diǎn)也有異同點(diǎn)，三種病毒癥狀相同點(diǎn)：葉片都有褪綠表現(xiàn)，指示植物長勢有不同程度衰退。有的病毒癥狀間區(qū)別不大，但通過較仔細(xì)的觀察比較，可以發(fā)現(xiàn)它們之間不同之處。草莓輕型黃邊病毒癥狀是：成熟葉片葉緣有黃斑表現(xiàn)；草莓斑駁病毒癥狀是：葉片葉肉有凹凸變化，造成葉片畸形，成熟葉片比幼嫩葉片畸形明顯。草莓鑲脈病毒癥狀是：葉片主脈兩側(cè)葉肉呈帶狀黃化，葉片無畸形表現(xiàn)。但是，在實(shí)際生產(chǎn)中乃至試驗(yàn)中常常會(huì)遇到某些植株有復(fù)合侵染現(xiàn)象，即表現(xiàn)出兩種及兩種以上癥狀。所以給病毒鑒定工作帶來諸多干擾與不便。在初步鑒定、分離出病毒癥狀之后。又用小葉嫁接法對(duì)一些生產(chǎn)品種隨機(jī)檢測，發(fā)現(xiàn)各病毒在田間感染率及復(fù)合感染率都較高，分別占13.3%、36.7%、23.3%、26.7%。

通過草莓小葉嫁接法檢測病毒，在本次試驗(yàn)中各病毒檢出率普遍在75%以上，檢出率較高，所以在生產(chǎn)上可以應(yīng)用此方法檢測病毒。但是，前提條件有二：一是保持較高的嫁接成活率，才會(huì)及時(shí)可靠的得到檢測結(jié)果，節(jié)省時(shí)間，在最短的時(shí)間內(nèi)拿出治療措施，挽救生產(chǎn)上損失，發(fā)揮出小葉嫁接法應(yīng)有的作用。二是對(duì)指示植物的繁殖和保留要保證較高的純度。本次試驗(yàn)中UC5分為3個(gè)株系，即UC5（1）、UC5（2）、UC5（3），在3個(gè)株系中UC5（2）表現(xiàn)往往明顯于其余兩株系，而在檢測輕型黃邊病毒試驗(yàn)中，UC5（3）株系指示植物中無一株有相應(yīng)癥狀表現(xiàn)，同樣是采自同一母株的接穗嫁接到UC5（1）、UC5（2）上都有不同程度癥狀表現(xiàn)。所以，在指示植物繁殖與保留上應(yīng)作到純化。

綜合比較指示植物UC10、UC5。檢測草莓輕型黃邊病毒用UC10效果較好；檢測草莓斑駁病毒、草莓鑲脈病毒用UC5較好。

（責(zé)任編輯 亓 國）