張 暉　薛洪寶

(蚌埠醫(yī)學院化學教研室， 安徽 蚌埠 233030)

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皮革中辛基酚聚氧乙烯醚-10的反相高效液相色譜測定

張 暉薛洪寶

(蚌埠醫(yī)學院化學教研室， 安徽 蚌埠 233030)

摘要：建立了反相高效液相色譜法測定皮革中辛基酚聚氧乙烯醚-10的分析方法，對提取方式、提取溫度和時間進行了優(yōu)化。該方法的線性范圍為2~200 μgmL，相對標準偏差為2.7%~5.2%，回收率為96.3%~103.8%。方法快速、簡單、靈敏度高，能夠用于皮革制品中殘留OPEO-10的測定。

關鍵詞：反相高效液相色譜法； 辛基酚聚氧乙烯醚-10； 皮革制品

辛基酚聚氧乙烯醚-10 (OPEO-10)是一種應用相當廣泛的非離子表面活性劑，主要用于皮革加工、紡織印染和洗滌劑等行業(yè)。使用后最終通過各種途徑進入水環(huán)境系統(tǒng)[1]，對生態(tài)環(huán)境造成嚴重污染。更嚴重的是有研究[2-4]顯示：OPEO-10具有一定的毒性，產(chǎn)品中的副產(chǎn)物具有致癌性、致畸性和致異變性等；其降解產(chǎn)物對人體有嚴重危害，會產(chǎn)生雌激素效應。因此，有必要建立一種分離和檢測皮革等產(chǎn)品中殘留OPEO-10的快速、有效的方法。

當前，OPEO-10的分析方法主要有高效液相色譜法[5-7]、氣相色譜-質(zhì)譜法[8]、液相色譜-質(zhì)譜法[9-11]等。其中：氣相色譜-質(zhì)譜法不能直接分析高聚合度的難揮發(fā)性OPEO-10[12]；另外幾種方法一般用來測定沉淀物或土壤、水體等環(huán)境樣品，對皮革中殘留OPEO-10的測定報道較少[13-16]。

本次研究通過對皮革制品中殘留OPEO-10的提取方式和提取溫度、時間以及色譜分離條件等進行優(yōu)化，建立了簡單、準確、快速測定皮革中OPEO-10的反相高效液相色譜法。

1材料與方法

1.1儀器與試劑

Lab Tech高效液相色譜儀(Lab Tech UV600型紫外可見檢測器，P600型高壓輸液泵2臺，Lab Tech HPLC軟件Version 3.5.2.1，北京萊伯泰科儀器有限公司)；Thermo Scientific APS-ZHYPERSIL Dim色譜柱(5 μm，250 mm×4.6 mm i.d.)；索氏抽提裝置；SB25-12DTN超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司)；BS224S電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；0.22 μm水相混合纖維素酯膜(上海半島實業(yè)有限公司凈化器材廠)。

OPEO-10(購自ACROS公司)；皮革制品(購自本地超市)；甲醇(色譜純，購自天津市大茂化學試劑廠)；蒸餾水(經(jīng)過Millipore QRG 純水系統(tǒng)過濾的二次水)。

1.2對照品標準溶液的配制

1.3樣品預處理

把10 g皮革樣品剪成0.1 cm×0.1 cm的正方形。準確稱量2.000 0 g置于大小適宜的錐形瓶中，加入甲醇30 mL，在60 ℃下超聲照射40 min后轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中。針對錐形瓶中的固體再分別用30，20，10 mL甲醇重復上述操作，將提取液全部轉(zhuǎn)移至上述100 mL容量瓶內(nèi)，用甲醇定容，搖勻。再取適量提取液用0.22 μm有機相濾膜過濾，即得皮革樣品分析液，備用。

1.4色譜條件

色譜柱：Thermo Scientific APS-ZHYPERSIL Dim (5 μm，250 mm×4.6 mm i.d.)；流動相為75%甲醇與25%水的混合物(體積比)；檢測波長為224 nm；柱溫為25 ℃；流速為0.8 mLmin；進樣量為5.0 μL。

2實驗方式及結(jié)果

2.1皮革中OPEO-10提取方式選擇

本實驗對皮革樣品中OPEO-10的提取首先采用索氏提取和超聲提取的方式，然后依據(jù)二者提取效率選擇其一。

索氏提?。喝?.000 0 g皮革樣品和90 mL甲醇，進行索氏提取，考察時間對提取效率的影響。提取時間分別設定為5，6，7，8 h，提取液分別轉(zhuǎn)移至100 mL的容量瓶中，用甲醇定容，搖勻。取適量上述溶液，用0.22 μm有機相濾膜過濾，上機測定。測定結(jié)果顯示索氏提取效率隨時間的延長而提高，但大約7.5 h后OPEO-10提取效率基本不再變化(圖1)。

圖1　時間對索氏提取效率的影響

超聲提?。豪贸暡▽?.000 0 g皮革樣品進行提取。每個超聲提取程序的總時間分別設定為80，120，160，200 min。對皮革中的OPEO-10提取4次，每次超聲提取程序的萃取時間分別為20，30，40，50 min。4次提取所用甲醇的體積分別為30，30，20，10 mL。每個超聲提取程序溫度分別設置為40，50，60，70 ℃。把每個超聲提取程序的提取液全部轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶后，用甲醇定容，搖勻。取適量上述溶液用0.22 μm有機相濾膜過濾，上機測定。實驗結(jié)果表明：超聲時間和溫度對提取效率都有影響。當在60 ℃下，總超聲波照射時間為160 min時，提取效率基本上不再變化，并且和7.5 h索氏提取所得提取液中的OPEO-10濃度相差無幾(表1)。

表1　不同條件下超聲提取皮革中OPEO-10的

2種方式的提取結(jié)果表明：在提取效率大致相同的前提下，索氏提取時間長，而超聲提取時間較短、效率高。因此本次實驗選擇在60 ℃下、總時長為160 min，分4次利用超聲波對OPEO-10進行提取，甲醇體積分別為30，30，20，10 mL。

2.2流動相選擇

采用反相液相色譜法測定皮革樣品中的OPEO-10，選擇強極性溶劑甲醇與水作為流動相?？疾霽甲醇V水分別為95∶5，90∶10，85∶15，80∶20，75∶25，70∶30，65∶35時對OPEO-10出峰時間和峰形的影響。實驗結(jié)果表明：當V甲醇V水=75∶25時，OPEO-10的出峰時間在4 min以內(nèi)，時間長短比較適中，峰形對稱，定量準確。因此，本次實驗選擇V甲醇V水=75∶25的溶液作為流動相。圖2為OPEO-10對照品標準溶液的色譜圖。

圖2　OPEO-10對照品的色譜圖

根據(jù)文獻[17]，OPEO 的紫外吸收光譜分別在224，275 nm左右各有 1 個強吸收峰和弱吸收峰。這是OPEO結(jié)構(gòu)決定的特征紫外吸收峰，其能夠用于OPEO的定量分析[18]。因為在224 nm處的吸收強度大，靈敏度高，所以選擇224 nm作為測定OPEO-10的波長。

綜上所述，本次實驗的色譜條件為：色譜柱，Thermo Scientific APS-ZHYPERSIL Dim (5 μm, 250mm×4.6mm i.d.)；流動相為75% 甲醇與25%水的混合物；檢測波長為224 nm；柱溫為25℃；流速為0.8 mLmin；進樣量為5.0 μL。

2.4加標回收率與精密度分析

分別在1.000 0 g皮革樣品中添加0.025，0.075，0.125 mg的OPEO-10，放置24 h，依照樣品預處理方法處理后進行分析，可得實際加標樣品的回收率和相對標準偏差RSD(n=5)，結(jié)果表明該方法的準確度和精密度良好(表2)。

表2　OPEO-10的加標回收率和相對標準偏差(n=5)

2.5線性方程及線性范圍分析

根據(jù)本次實驗的色譜條件，配制OPEO-10標準溶液進樣分析。以峰面積y對相應的標準溶液的濃度x作標準曲線，得到線性回歸方程、相關系數(shù)r、線性范圍和定量下限 (SN=10)等定量分析參數(shù)，見表3。

表3　定量分析參數(shù)

2.6皮革樣品測定

采用本次研究確定的實驗方法對當?shù)爻心称じ镏破愤M行實驗，色譜圖見圖3。根據(jù)其峰面積和標準曲線方程可得該皮革制品中殘留OPEO-10的質(zhì)量分數(shù)為31.4×10-6。

圖3　皮革樣品溶液的色譜圖

3結(jié)語

以甲醇為溶劑、采取多次超聲波提取的方式從皮革制品中萃取殘留的OPEO-10，并用反相高效液相色譜測定其含量。該方法的線性范圍為2~200 μgmL，RSD為2.7%~5.2%，回收率為96.3%~103.8%。方法快速、簡單、靈敏度高，能夠用于皮革制品中殘留OPEO-10的測定。

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Rapid Determination of Polyoxyethylene Octylphenol Ether in Leather by RP-HPLC

ZHANGHuiXUEHongbao

(Department of Chemistry, Bengbu Medical College, Bengbu Anhui 233030, China)

Abstract:A rapid and simple method was developed for measurement of polyoxyethylene octylphenol ether residue in leather by reversed-phase high performance liquid chromatography. The pretreatment conditions such as extraction method, temperature and time were optimized. The quantitation limit range was 2~200 μgmL. The spiked recoveries were in the range of 96.3%~103.8%, and the relative standard deviations (RSDs) varied from 2.7% to 5.2%. The method is very simple to handle with and has sensitive and rapid response, a useful and efficient one for OPEO-10 residue determination in leather products.

Key words:reversed-phase high performance liquid chromatography; OPEO-10; leather products

文獻標識碼：A

文章編號：1673-1980(2016)01-0110-04

中圖分類號：X832;O657

作者簡介：張暉(1966 — )，男，安徽宿州人，碩士，講師，研究方向為儀器分析檢測技術。

基金項目：安徽省高等學校自然科學研究項目“表面等離子共振法檢測T細胞受體與Mtb-Ag多肽表位結(jié)合的研究”(KJ2015B037BY)；安徽省高校省級優(yōu)秀青年人才基金重點項目“毛細管電泳檢測結(jié)合桿菌蛋白多肽類抗原方法研究”(2013SQRL051ZD)；安徽省自然科學基金項目“以含氮橋柔性多齒羧酸構(gòu)筑的多孔配合物的合成及藥物傳輸研究”(1308085QB24)

收稿日期：2015-11-26