王　瑩

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院, 遼寧 沈陽(yáng), 110032)

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微柱凝膠技術(shù)在輸血前紅細(xì)胞和血型不規(guī)則抗體檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值

王瑩

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院, 遼寧 沈陽(yáng), 110032)

關(guān)鍵詞:微柱凝膠技術(shù); 凝聚胺技術(shù); 不規(guī)則抗體; 檢測(cè); 鑒定

不規(guī)則抗體是指血清中除外抗-A和抗-B的其他血型抗體。為避免患者在輸血時(shí)出現(xiàn)溶血性反應(yīng)，在輸血前對(duì)患者所需用血的交叉配合檢測(cè)與不規(guī)則抗體的篩選顯得尤為重要[1]。 微柱凝膠技術(shù)(MGT)在抗體篩選上能夠更大程度地篩選出不規(guī)則抗體，從而防止患者因?yàn)檩斪⒑衅渌贵w的血液而導(dǎo)致的溶血性反應(yīng)，最大程度地保證患者用血治療的安全[2]。本研究比較微柱凝膠技術(shù)與凝聚胺技術(shù)對(duì)不規(guī)則抗體的篩查價(jià)值，并對(duì)其陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行鑒定，報(bào)告如下。

1資料與方法

選擇2013年1月—2016年1月本院申請(qǐng)輸血治療的5 822例患者為研究對(duì)象，其中男2 821例，女3 001例，年齡在5 d～95歲，平均年齡在(44.7±11.8)歲，對(duì)檢測(cè)出的陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行抗體的特異性鑒定。

儀器與試劑：微柱凝膠試劑卡(瑞士達(dá)亞美公司生產(chǎn))、標(biāo)本專用的離心機(jī)和孵育器(瑞士達(dá)亞美公司生產(chǎn))，篩選細(xì)胞、鑒定譜細(xì)胞(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司生產(chǎn))。

操作方法：微柱凝膠試劑卡：排除有干膠、氣泡、雜質(zhì)的試機(jī)卡，并放置于室溫(18℃～25℃)使其平衡，再采用專用離心機(jī)以1 900 r/min離心5 min。懸液的制備：所有患者在輸血前采集靜脈血液2 mL，取患者的壓積紅細(xì)胞10 μL，然后加入1.2 mL的紅細(xì)胞稀釋液，外觀呈現(xiàn)無(wú)絮狀物、均勻淡紅色。分別向微柱孔內(nèi)加入1.0%混合篩選細(xì)胞50 μL和25 μL患者懸液，而后置于專用孵育器內(nèi)孵育15 min，最后采用專用離心機(jī)以9 000 r/min離心10 min。

結(jié)果判斷：通過(guò)判斷離心后紅細(xì)胞的位置，紅細(xì)胞沉積在微柱底部則為陰性，滯留在凝膠中部或上方則為陽(yáng)性。

抗體鑒定：采用1～10號(hào)譜細(xì)胞對(duì)陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行抗體的特異性鑒定。

懸液制備：取紅細(xì)胞與生理鹽水配制5%的細(xì)胞懸液。主管中加入患者的血清與制成的紅細(xì)胞懸液，次管中加入患者紅細(xì)胞懸液與提供血清，將2支管分別加入0.6 mL的低離子介質(zhì)混勻并放置在室溫1 min，之后在2管中加入凝聚胺溶液100 μL，混勻后放置于室溫30 s，然后采用離心機(jī)以3 000 r/min離心20 s，棄置上清液，最后加入100 μL的重懸液，輕輕混合后用肉眼或者顯微鏡觀察結(jié)果。

2結(jié)果

2.12種檢測(cè)技術(shù)中不規(guī)則抗體的陽(yáng)性率比較

采用微柱凝膠技術(shù)和凝聚胺技術(shù)對(duì)5 822例患者的標(biāo)本進(jìn)行鑒定，微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)出陽(yáng)性48例，陽(yáng)性率為0.82%；凝聚胺技術(shù)檢測(cè)出陽(yáng)性27例，陽(yáng)性率為0.46%。微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)的陽(yáng)性率顯著高于凝聚胺技術(shù)(P<0.05)。

2.2微柱凝膠技術(shù)和凝聚胺技術(shù)中不規(guī)則抗體的特異性鑒定結(jié)果比較

微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)的48例不規(guī)則抗體的陽(yáng)性標(biāo)本中，包括了10例(20.8%)抗-D, 2例(4.2%)抗-E, 4例(8.3%)抗-Ec, 3例(6.3%)抗-c, 5例(10.4%)抗-Mur, 5例(10.4%)抗-M, 1例(2.1%)抗-N, 4例(8.3%)抗-Lea, 1例(2.1%)抗-Leb, 1例(2.1%)抗-JKb, 1例(2.1%)抗-P1, 5例(10.4%)冷抗體, 6例(12.5%)自身抗體。凝聚胺技術(shù)檢測(cè)的27例不規(guī)則抗體的陽(yáng)性標(biāo)本中，包括了4例(14.8%)抗-D, 1例(3.7%)抗-E, 4例(14.8%)抗-Ec, 1例(3.7%)抗-c, 3例(11.1%)抗-Mur, 3例(11.1%)抗-M, 1例(3.7%)抗-N, 2例(7.5%)抗-Lea, 0例抗-Leb, 1例(3.7%)抗-JKb, 3例(11.1)冷抗體, 4例(14.8%)自身抗體。

3討論

如何準(zhǔn)確的在輸血前進(jìn)行對(duì)紅細(xì)胞和血型不規(guī)則抗體的檢測(cè)是防止患者出現(xiàn)溶血性反應(yīng)的重要保證[3]。微柱凝膠技術(shù)擁有靈敏度好、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，并且能夠快速準(zhǔn)確地篩選出不規(guī)則抗體中的陽(yáng)性標(biāo)本，大大降低了需要輸血患者出現(xiàn)溶血性反應(yīng)的概率[4]，最大程度地保障了患者的生命安全。

在輸血檢測(cè)技術(shù)中，由于血型而導(dǎo)致的溶血性反應(yīng)較少，因?yàn)檠筒灰?guī)則抗體而導(dǎo)致的溶血性反應(yīng)則是主要原因[5]。隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，紅細(xì)胞和血型的不規(guī)則抗體篩查應(yīng)用在臨床的輸血中，特別是針對(duì)孕婦、需要多次或大量輸血、有自身免疫性疾病、腫瘤等患者，這部分患者為紅細(xì)胞和血型不規(guī)則抗體的攜帶高危人群，在臨床輸血前應(yīng)重點(diǎn)的篩查對(duì)象[6]，確保輸血的安全性。

微柱凝膠技術(shù)是通過(guò)紅細(xì)胞抗原與對(duì)應(yīng)的抗體在凝膠介質(zhì)中產(chǎn)生聚集，然后通過(guò)離心會(huì)使產(chǎn)生聚集反應(yīng)的紅細(xì)胞阻滯于凝膠之內(nèi)，而未產(chǎn)生聚集的紅細(xì)胞會(huì)通過(guò)微孔過(guò)濾到微柱的底部，得以區(qū)分是否有聚集[7]。微柱凝膠技術(shù)是在抗人蛋白試驗(yàn)的基礎(chǔ)上慢慢演變而來(lái)的新型篩選方法，在交叉配血、不規(guī)則抗體的篩查和血型鑒定中得以廣泛應(yīng)用[8]。相關(guān)研究[9]顯示，微柱凝膠技術(shù)在紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的檢測(cè)中具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，出現(xiàn)漏檢率僅為0.01%～0.1%。本研究中，同樣的5 822例患者的血液標(biāo)本，采用微柱凝膠技術(shù)篩選出了48例(0.82%)具有陽(yáng)性的不規(guī)則抗體，而采用凝聚胺技術(shù)篩選出了27例(46%)陽(yáng)性不規(guī)則抗體，證明了微柱凝膠技術(shù)具有很好的準(zhǔn)確性。

不規(guī)則抗體的數(shù)量和質(zhì)量與B細(xì)胞、T細(xì)胞、抗原等多種因素有密切的關(guān)系。當(dāng)機(jī)體在受到抗原的刺激后，會(huì)在T細(xì)胞的作用下刺激B細(xì)胞增殖分化成記憶細(xì)胞，由于記憶細(xì)胞只能夠在細(xì)胞膜上表達(dá)抗體，當(dāng)其受到同一抗原的再次刺激后即會(huì)引起免疫反應(yīng)[10]。所以在臨床輸血治療前血型不規(guī)則抗體篩查尤為重要，特別是對(duì)于不規(guī)則抗體篩查顯示為陽(yáng)性者因進(jìn)一步明確其不規(guī)則抗體的性質(zhì)，在相關(guān)醫(yī)師的指導(dǎo)下制定方案，最大程度地降低患者出現(xiàn)輸血并發(fā)癥。微柱凝膠技術(shù)解決了不規(guī)則抗體篩查的準(zhǔn)確性和簡(jiǎn)便性，由于微柱凝膠技術(shù)克服了傳統(tǒng)試管液體介質(zhì)需要多次洗滌等較為繁瑣、費(fèi)時(shí)的缺點(diǎn)[11]，在應(yīng)用上節(jié)省時(shí)間且較為精確，具有標(biāo)本用量少、保存時(shí)間長(zhǎng)的優(yōu)點(diǎn)。

有關(guān)資料顯示，抗-M、抗-N、抗-Mur能夠引起交叉配血困難以及溶血性反應(yīng)的發(fā)生，在Lewis血型系統(tǒng)中主要為IgM類的抗-Lea和抗-Leb為主，由于Lewis血型系統(tǒng)的抗體具較低的親和力，所以非常容易出現(xiàn)漏檢的發(fā)生[12]。本研究顯示，不規(guī)則抗體特異性的鑒定結(jié)果中抗-D比例較高，這與不規(guī)則抗體血型系統(tǒng)的5類抗原的免疫性強(qiáng)弱有關(guān)，其強(qiáng)弱關(guān)系依次為D>E>C>c>e，而實(shí)驗(yàn)中微柱凝膠技術(shù)鑒定出的抗-D有10例占20.8%，充分說(shuō)明了免疫性強(qiáng)弱的關(guān)系，在Lewis血型系統(tǒng)中微柱凝膠技術(shù)表現(xiàn)出了其特異性、靈敏度的特點(diǎn)，抗-Lea檢測(cè)出了4例，抗-Leb檢測(cè)出了1例，都要明顯優(yōu)于凝聚胺技術(shù)所檢測(cè)出的結(jié)果。

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中圖分類號(hào):R 446.62

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1672-2353(2016)09-114-02

DOI:10.7619/jcmp.201609032

收稿日期:2016-02-16