孫維發(fā)

（黑龍江省密山市畜牧獸醫(yī)局動(dòng)物檢疫站，黑龍江密山 158300）

兔沙門(mén)氏菌病的病原學(xué)診斷

孫維發(fā)

（黑龍江省密山市畜牧獸醫(yī)局動(dòng)物檢疫站，黑龍江密山 158300）

兔沙門(mén)氏菌病是由鼠傷寒沙門(mén)氏菌和腸炎沙門(mén)氏菌引起的兔的一種以消化道疾患為主的疾病，主要侵害妊娠母兔。沙門(mén)氏菌感染不僅發(fā)生于兔，人和其他動(dòng)物也有發(fā)現(xiàn)，食用被沙門(mén)氏菌污染的動(dòng)物性食物，往往是導(dǎo)致人食物中毒的重要原因。

沙門(mén)氏菌??；病原學(xué)；診斷

正常動(dòng)物腸道內(nèi)本身就寄生沙門(mén)氏菌，當(dāng)由于環(huán)境因素變化、飼養(yǎng)管理不良以及患有其他疾病，使機(jī)體抵抗力降低時(shí)，就可以通過(guò)內(nèi)源性感染而發(fā)病。根據(jù)感染途徑和發(fā)病經(jīng)過(guò)的不同，沙門(mén)氏菌病分為腹瀉型和流產(chǎn)型兩種臨床表現(xiàn)形式，病理變化也隨疾病的經(jīng)過(guò)不同而不同。

根據(jù)流行病學(xué)、臨床表現(xiàn)及病理變化可做出初步診斷。進(jìn)一步確診，則須進(jìn)行細(xì)菌分離與鑒定。普查兔群污染情況，須作血清學(xué)檢驗(yàn)。

1 流行病學(xué)

本病傳染性比較強(qiáng)，發(fā)病兔不分年齡、性別和品種，但以妊娠母兔易發(fā)。飼養(yǎng)管理不當(dāng)、衛(wèi)生條件不良和家兔體弱、氣候劇變均可增加發(fā)病的機(jī)會(huì)。

2 臨床癥狀

本病分為腹瀉型和流產(chǎn)型兩種。腹瀉型主要發(fā)生于斷奶后的仔兔。病兔體溫升高，食欲不振，精神沉郁，頑固性下痢，病兔消瘦。流產(chǎn)型多發(fā)生于妊娠1個(gè)月前后，多數(shù)病兔由陰道排出黏液膿型分泌物，病兔常于流產(chǎn)后死亡。即使母兔在流產(chǎn)后不死亡，康復(fù)后也不易再受孕。

3 病原學(xué)診斷

（1）樣品采集。剖檢時(shí)采取病死兔的血液、肝臟、脾臟以及有病變的回、盲、結(jié)腸黏膜和腸內(nèi)容物。流產(chǎn)兔還可取子宮、陰道分泌物或流產(chǎn)胎兒的內(nèi)臟器官；病兔，采血液、直腸拭子。

（2）鏡檢。取采集的病料進(jìn)行涂片，革蘭氏染色鏡檢，觀察細(xì)菌形態(tài)。沙門(mén)氏菌為革蘭氏陰性，短桿狀（2～4μm×0.5μm），具有周鞭毛并常有菌毛，不形成芽孢。

（3）分離培養(yǎng)。將采集的樣品接種于SS瓊脂、DHL瓊脂、HE瓊脂或麥康凱平板，37℃培養(yǎng)24h。同時(shí)，接種改良亞硒酸鹽胱氨酸（SCM）增菌培養(yǎng)基中培養(yǎng)20h，再接種上述培養(yǎng)基。本菌在SS瓊脂或DHL瓊脂上呈無(wú)色半透明菌落，邊緣整齊，菌落中心為黑色，周?chē)囵B(yǎng)基透明，呈淡黃色；在HE瓊脂上，菌落呈圓形，邊緣整齊，藍(lán)綠色或藍(lán)色，菌落中心為有或無(wú)黑色，菌落周?chē)囵B(yǎng)基呈透明墨綠色；在麥康凱瓊脂上，呈無(wú)色半透明，邊緣整齊、光滑、稍隆起的菌落。從每塊平板上挑選3個(gè)以上的可疑菌落，接種三糖鐵斜面培養(yǎng)基，接種方法是先劃線(xiàn)而后穿刺，37℃培養(yǎng)過(guò)夜。沙門(mén)氏菌在三糖鐵培養(yǎng)基上，斜面部分保持原來(lái)的顏色為堿性紅色，而垂直部分變?yōu)辄S色并有黑色的硫化鐵產(chǎn)生，產(chǎn)酸產(chǎn)氣。

4 細(xì)菌鑒定

（1）生化試驗(yàn)。在三糖鐵培養(yǎng)基上初步鑒定，符合沙門(mén)氏菌特征者，作靛基質(zhì)、硫化氫產(chǎn)生、pH7.2尿素、氰化鉀培養(yǎng)基生長(zhǎng)、賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)。本菌的硫化氫、賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)為陽(yáng)性。發(fā)酵葡萄糖、甘露糖、麥芽糖，不發(fā)酵蔗糖、乳糖；M.R.試驗(yàn)、枸櫞酸鹽利用、運(yùn)動(dòng)力試驗(yàn)陽(yáng)性，V-P試驗(yàn)、靛基質(zhì)試驗(yàn)、尿素酶產(chǎn)生試驗(yàn)陰性。

（2）血清型鑒定。將培養(yǎng)物與生理鹽水作成的乳濁液，取該乳濁液一滴于玻片上，加入特異性多價(jià)O血清（A-F組多價(jià)O診斷血清）作玻板凝集反應(yīng)。陽(yáng)性反應(yīng)者通常在室溫下3min內(nèi)出現(xiàn)凝集顆粒，若不出現(xiàn)凝集，可確定為陰性。但對(duì)于生化反應(yīng)比較典型的可疑菌株，在血清學(xué)鑒定呈陰性的情況下，可將上述培養(yǎng)物乳濁液100℃處理30min后，再用多價(jià)O血清進(jìn)行凝集試驗(yàn)。對(duì)于確定為沙門(mén)氏菌的菌株，可進(jìn)一步用單價(jià)O因子血清、第Ⅰ相因子血清、第Ⅱ相因子血清作玻片凝集試驗(yàn)，以確定該菌株屬于哪一組，是哪一型的沙門(mén)氏菌（因?yàn)樯抽T(mén)氏菌培養(yǎng)16～20h，鞭毛形成最好，所以在確定第Ⅰ相抗原、第Ⅱ相抗原時(shí)，菌株的培養(yǎng)時(shí)間要適宜，才會(huì)取得令人滿(mǎn)意的結(jié)果）。

（3）辛酯酶熒光試驗(yàn)

試驗(yàn)試劑：①M(fèi)UCAP試劑：按生產(chǎn)者的使用說(shuō)明制備工作濃度的稀釋液，貯存于4℃冰箱，備用。②氧化酶試紙：將1%α-萘酚乙醇溶液與1%二甲基對(duì)苯二胺草酸鹽水溶液等量混合后，70～80℃烘箱烘干，剪成適當(dāng)大小的紙條，密封于塑料袋或瓶中，貯存于4℃冰箱，備用。

細(xì)菌分離培養(yǎng)：挑取一接種環(huán)四硫磺酸鹽煌綠增菌液培養(yǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)液，劃線(xiàn)接種于SS和HE瓊脂培養(yǎng)基各一個(gè)，于36±1℃培養(yǎng)24h。觀察各瓊脂平板上有無(wú)可疑沙門(mén)氏菌菌落，如無(wú)可疑菌落，應(yīng)再繼續(xù)培養(yǎng)24h。

測(cè)定：①測(cè)定方法：從分離培養(yǎng)基上選可疑沙門(mén)氏菌（盡量選較大的單個(gè)菌落），用記號(hào)筆做好標(biāo)記并編號(hào)。用毛細(xì)滴管吸取MUCAP試劑，加一滴于編號(hào)的菌落上，待整個(gè)平皿的被檢菌落全部滴加試劑后，將平皿拿至366nm紫外燈下檢查，發(fā)藍(lán)色熒光的為MUCAP試驗(yàn)陽(yáng)性，將陽(yáng)性菌落記錄下來(lái)。用接種環(huán)挑取熒光反應(yīng)陽(yáng)性菌落，涂于氧化酶試紙上，觀察涂菌點(diǎn)是否變?yōu)樗{(lán)色，于10min內(nèi)變?yōu)樗{(lán)色者判為氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性，不變色者判為氧化酶陰性。②結(jié)果判定：MUCAP試驗(yàn)陰性的樣品，判為“未檢出沙門(mén)氏菌”；MUCAP試驗(yàn)陽(yáng)性，氧化酶試驗(yàn)陰性的樣品，進(jìn)行生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定；MUCAP陽(yáng)性，且氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性者判為沙門(mén)氏菌陽(yáng)性。

5 防制措施

防止傳染源的接觸。一旦發(fā)現(xiàn)本病，應(yīng)立即檢出病兔隔離治療或淘汰，兔籠和用具應(yīng)徹底消毒，并可用凝集反應(yīng)普查帶菌兔，對(duì)陽(yáng)性者最好進(jìn)行淘汰，面對(duì)陰性兔，可應(yīng)用本場(chǎng)所分離到的沙門(mén)氏菌制成死菌苗進(jìn)行預(yù)防注射，用以控制本病的流行。目前，許多沙門(mén)氏菌菌株已對(duì)多種抗生素產(chǎn)生了抵抗力，從而嚴(yán)重地降低了抗菌療法的效力。因此使用抗生素一定要慎重，如果使用已有抗藥性的抗生素以后，則會(huì)破壞已定居的、能對(duì)宿主提供保護(hù)力的固有菌區(qū)系，使微生態(tài)系統(tǒng)受到破壞，造成沙門(mén)氏菌無(wú)限制地增殖，通過(guò)血液循環(huán)系統(tǒng)而導(dǎo)致敗血癥。當(dāng)病兔出現(xiàn)菌血性或敗血性情況時(shí)，注射氯霉素、慶大霉素以及三甲芐磺胺嘧啶合劑對(duì)全身性沙門(mén)氏菌病有效。

［1］ 張清潔，孫文學(xué).兔沙門(mén)氏菌病的診斷［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，1998，（9）：14.

孫維發(fā)（1977-），男，大專(zhuān)，獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物檢疫工作。