侯柏龍，杜王琪，熊一融，蔡一奇，宋易玲，林曉云，薛向陽，張麗芳（.溫州醫(yī)科大學(xué) 分子病毒與免疫研究所、微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室，浙江 溫州 35035；.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 胃腸外科，浙江 溫州 3505）

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人宮頸癌SiHa細(xì)胞荷瘤裸鼠模型的建立及鑒定

侯柏龍1，杜王琪1，熊一融1，蔡一奇2，宋易玲1，林曉云1，薛向陽1，張麗芳1
（1.溫州醫(yī)科大學(xué) 分子病毒與免疫研究所、微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室，浙江 溫州 325035；2.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 胃腸外科，浙江 溫州 325015）

[摘 要]目的：建立人宮頸癌SiHa細(xì)胞裸小鼠體表荷瘤模型，并對(duì)其成瘤特性進(jìn)行分析和鑒定。方法：將5×106/mL、1×107/mL及5×107/mL 3個(gè)濃度的SiHa細(xì)胞懸液分別在3組裸小鼠背部右腋近上肢皮下接種，建立人宮頸癌裸小鼠體表荷瘤模型，觀察荷瘤裸鼠的成瘤率并測(cè)量腫瘤的大小，5周后取腫瘤組織經(jīng)病理學(xué)方法觀察其組織學(xué)特性，并采用PCR及免疫組織化學(xué)方法對(duì)腫瘤組織的HPV16E7 DNA表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：3組裸小鼠接種SiHa細(xì)胞的成瘤率均為100%，5周后腫瘤大小分別達(dá)到（77.29±28.34）mm3、（178.91± 61.55）mm3和（305.11±12.62）mm3。3個(gè)濃度組間腫瘤體積大小差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。病理學(xué)大體觀察可見SiHa腫瘤的生長(zhǎng)均以局部浸潤(rùn)為主；組織切片觀察新生腫瘤細(xì)胞特點(diǎn)呈現(xiàn)體積大、核大深染及易見核分裂相的病理性特征；SiHa新生腫瘤組織經(jīng)PCR檢測(cè)證實(shí)了HPV16E7 DNA陽性，并經(jīng)免疫組織化學(xué)檢測(cè)證實(shí)了HPV16E7蛋白表達(dá)陽性。結(jié)論：成功建立了SiHa細(xì)胞荷瘤裸鼠模型，為人宮頸癌腫瘤靶向治療及生物學(xué)特性研究提供了理想的動(dòng)物模型。

[關(guān)鍵詞]宮頸腫瘤；動(dòng)物模型；BALB/c-nu裸小鼠；SiHa細(xì)胞

宮頸癌是全球最常見的婦科惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在女性惡性腫瘤中僅次于乳腺癌排第二位，而我國(guó)宮頸癌患病率和病死率約占世界的28.8%，宮頸癌患病人數(shù)約占世界三分之一[1]。宮頸癌的發(fā)病與人乳頭瘤病毒（human papilloma-virus，HPV）感染的相關(guān)性已經(jīng)明確，且基于HPV L1蛋白的宮頸癌預(yù)防性疫苗也已經(jīng)商業(yè)化[2]，但宮頸癌的治療尚未獲得突破性研究進(jìn)展。盡管HPV型別眾多，其高危型別（HPV16、18、31、33、58等）也具有地域分布特性，但流行病學(xué)研究表明HPV16感染為全球?qū)m頸癌致病主要型別[3]。因此，本研究采用人HPV16 DNA陽性的SiHa細(xì)胞株接種建立人宮頸癌荷瘤裸鼠模型，為宮頸癌治療及其發(fā)病機(jī)制研究提供了基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1細(xì)胞株 人宮頸癌SiHa細(xì)胞購(gòu)自上海中科院細(xì)胞庫（HTB-35）。常規(guī)方法從液氮罐中取出SiHa細(xì)胞凍存液，迅速經(jīng)37 ℃水浴后加入RPMI-1640培養(yǎng)液吹打混勻，1 000 r/min離心5 min，棄上清液，加入適量含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，吹打成細(xì)胞懸液，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，細(xì)胞長(zhǎng)至80%融合時(shí)，用胰酶消化傳代后備用。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 BALB/c裸小鼠購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司（合格證號(hào)：SCXK（滬）2012-0002），21只，雌性未孕，成熟健康，鼠齡5～8周，體質(zhì)量18～25 g，SPF級(jí)，在溫州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心屏障系統(tǒng)內(nèi)飼養(yǎng)。所有進(jìn)入屏障系統(tǒng)的飼料、水、空氣、鋪墊物及各種用品均需經(jīng)過高溫高壓等滅菌處理；所有進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的人、動(dòng)物均需經(jīng)過嚴(yán)格的微生物控制。

1.3試劑 RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液、胎牛血清FBS均購(gòu)自Gibco公司；各組織DNA提取試劑盒購(gòu)自天根生化科技有限公司；HPV16 E7特異性兔抗體由本實(shí)驗(yàn)室提供；HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG（H+R）抗體購(gòu)自聯(lián)科生物技術(shù)有限公司。

1.4腫瘤動(dòng)物模型的建立 裸小鼠適應(yīng)性生長(zhǎng)1周后，隨機(jī)分為3組，每組7只。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SiHa細(xì)胞，用胰酶消化后，用PBS分別配制成5×106/mL、1×107/mL和5×107/mL，即低、中、高3個(gè)不同濃度的單細(xì)胞懸液，在無菌條件下皮下注射接種于裸小鼠背側(cè)近右腋窩處，每只0.2 mL。

1.5腫瘤特征的觀察 每隔1 d觀察裸小鼠的精神狀態(tài)、活動(dòng)力、反應(yīng)、飲食、體質(zhì)量、皮下接種區(qū)域外觀及觸感。每3 d用電子游標(biāo)卡尺測(cè)量瘤體最長(zhǎng)徑a和最短經(jīng)b，按公式V=1/2（ab2）計(jì)算腫瘤體積[4]。以腫瘤體積和生長(zhǎng)周數(shù)分別為坐標(biāo)繪制不同接種濃度下的腫瘤生長(zhǎng)曲線。

1.6形態(tài)學(xué)和組織學(xué)檢查 ①大體形態(tài)檢查：接種SiHa細(xì)胞懸液5周后處死荷瘤裸鼠，解剖觀察腫瘤形態(tài)、直徑、質(zhì)地、活動(dòng)度及腦、肝、肺、腎等轉(zhuǎn)移情況。②組織學(xué)檢查：將標(biāo)本送至溫州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理解剖學(xué)教研室，部分腫瘤組織以4%多聚甲醛固定，石蠟包埋常規(guī)切片和HE染色，顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)特征；另外部分腫瘤組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè)HPV16E7蛋白的表達(dá)情況。剩余腫瘤組織及主要器官（肝臟、肺臟和大腦等）組織置液氮保存，用于PCR檢測(cè)HPV16E7的DNA表達(dá)。

1.7PCR方法檢測(cè) 根據(jù)HPV16E7的全長(zhǎng)DNA序列，設(shè)計(jì)HPV16E7 PCR引物[5]，上游引物為：5’-GGAATTCCA TATGCATGGAGATACACCT-3’，下游引物為：5‘-CCGCTC GAGTGGTTTCTGAGAACAGA-3’；各組織DNA提取則采用試劑盒進(jìn)行，方法按說明書操作，提取本實(shí)驗(yàn)中荷瘤裸鼠腫瘤組織及腦、肝、肺、腎等的DNA，分別以這些組織的DNA為模板，通過PCR擴(kuò)增HPV16 E7 DNA全長(zhǎng)基因。PCR反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共35個(gè)循環(huán)，72 ℃延伸10 min，PCR反應(yīng)產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳鑒定。

1.8免疫組織化學(xué)方法檢測(cè) 取上述石蠟包埋的各腫瘤組織進(jìn)行切片（厚度為3 μm），常規(guī)脫蠟、固定、抗原修復(fù)后，以HPV16E7特異性兔血清多克隆抗體（1:100稀釋）為一抗，4 ℃孵育過夜。 以HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG（H+R）抗體（1:500稀釋）為二抗，室溫孵育2 h，經(jīng)DAB顯色、蘇木精復(fù)染和脫水后進(jìn)行封片。同時(shí)以PBS兔血清代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，同一時(shí)間段各組間腫瘤組織平均體積差異比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1成瘤潛伏期與成瘤率 21只荷瘤裸鼠全部存活，成瘤率均為100%。3個(gè)濃度組5×106/mL、1× 107/mL和5×107/mL的荷瘤裸鼠成瘤潛伏期分別為（11.71±1.80）d、（9.00±2.87）d、（6.14±1.07）d。5周后3組荷瘤裸鼠腫瘤大小分別達(dá)到（77.29± 28.34）mm3、（178.91±61.55）mm3、（305.11±12.62）mm3，3組間腫瘤體積大小差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.001）。

2.2荷瘤裸鼠腫瘤大小及一般特性觀察 裸小鼠接種SiHa細(xì)胞后，腫瘤呈持續(xù)性生長(zhǎng)（見圖1A）。在第1周5×106/mL組和5×107/mL組腫瘤大小差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），在第2周5×106/mL組和1×107/mL組腫瘤大小差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），在第3周1×107/mL組和5×107/mL組腫瘤大小差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）（見圖1B）。所有荷瘤裸鼠接種SiHa細(xì)胞后一般狀況尚可，活動(dòng)量正常，反應(yīng)敏捷，進(jìn)食及進(jìn)水量無明顯變化，體質(zhì)量無明顯變化。

2.3形態(tài)學(xué)和組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果 第5周將荷瘤裸鼠麻醉處死，解剖觀察，移植瘤大多呈結(jié)節(jié)狀，與皮膚粘連甚少，腫瘤有清楚的組織界限，外觀呈乳頭結(jié)節(jié)或分葉狀，血供豐富且易分離，腫瘤組織切面呈魚肉樣；肝、腦、肺和腎等組織未見明顯的轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)。經(jīng)制備腫瘤組織病理切片，在普通顯微鏡光鏡下觀察，可見腫瘤組織癌巢、血管擴(kuò)張充血、小灶凝固性壞死和少量淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)；腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)體積大、核大深染且易見核分裂相等腫瘤病理性特征，肝、腦、肺和腎等均未見明顯的轉(zhuǎn)移灶（見圖2）。

2.4PCR檢測(cè)結(jié)果 各組裸小鼠腫瘤組織提取DNA后，經(jīng)HPV16E7特異性引物PCR后進(jìn)行瓊脂糖電泳鑒定，結(jié)果在分子質(zhì)量約300 bp處可見單一條帶，與HPV16E7全長(zhǎng)基因大小一致（見圖3A），而腦、肝、肺、腎和肌肉等組織未見明顯的單一DNA條帶（見圖3B）。

圖1　不同濃度組的腫瘤體積生長(zhǎng)情況

圖2　腫瘤和其他器官組織的病理切片（×400）

圖3　腫瘤及各器官組織DNA PCR檢測(cè)產(chǎn)物電泳圖

2.5免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果 新生腫瘤組織及肝、腦、肺、腎等組織切片經(jīng)免疫組化分析，以HPV16E7特異性兔血清抗體為一抗，以HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG（H+R）抗體為二抗（見圖4A），同時(shí)以PBS兔血清代替一抗作為陰性對(duì)照，其余步驟均一樣（見圖4B）。結(jié)果可見，只有圖4A腫瘤組織切片中在細(xì)胞質(zhì)和核膜周圍出現(xiàn)團(tuán)狀或點(diǎn)塊狀棕黃色沉淀顆粒，其他切片結(jié)果均未見。

圖4　各器官組織細(xì)胞中HPV16 E7蛋白的表達(dá)（×400）

3 討論

為了更加深入地研究宮頸癌的發(fā)生發(fā)展及其治療，動(dòng)物模型的建立對(duì)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究宮頸癌均有重要的意義。人類理想的動(dòng)物模型要求其發(fā)生部位、類型、病因、發(fā)生機(jī)制及其生物學(xué)行為等方面符合所研究的人類腫瘤[6-7]。至今為止，宮頸癌動(dòng)物模型的制作主要分為自發(fā)性腫瘤模型、誘發(fā)性腫瘤模型、基因修飾（轉(zhuǎn)基因）腫瘤模型和移植性腫瘤模型四大類[8]，前面三種模型制作方法具有操作復(fù)雜，耗時(shí)漫長(zhǎng)，腫瘤發(fā)生率較低且不穩(wěn)定、發(fā)生時(shí)間難以預(yù)測(cè)、個(gè)體差異大和成本高昂等缺陷[9]。相比較而言，移植性腫瘤模型具有制作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)。尤其是，裸小鼠的遺傳背景明確，性狀穩(wěn)定，因免疫缺陷而不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)[10]，可進(jìn)行體表部位腫瘤移植而形成體表移植瘤，是目前應(yīng)用最廣泛的研究動(dòng)物模型，也是研究腫瘤病因和篩選抗腫瘤新藥中最常用的模型[11]。因此，本研究選擇裸小鼠作為宮頸癌細(xì)胞荷瘤裸鼠進(jìn)行移植性腫瘤模型的構(gòu)建。荷瘤裸鼠模型成功率高且對(duì)動(dòng)物損傷小、死亡率低；研究的可重復(fù)性好，動(dòng)物大小、體形及生物學(xué)行為等適合于所做的實(shí)驗(yàn)研究要求；所用制作方法對(duì)人體危害較少，對(duì)環(huán)境的污染小。

目前報(bào)道的人宮頸癌HPV陽性的動(dòng)物模型主要為HeLa-229荷瘤裸鼠，而人宮頸癌HPV16陽性的SiHa細(xì)胞、Caski細(xì)胞荷瘤裸鼠模型報(bào)道并不深入[12]。本研究采用SiHa（HPV16+）細(xì)胞接種裸小鼠建立人宮頸癌動(dòng)物模型，裸小鼠移植瘤的成功率達(dá)100%，移植瘤生長(zhǎng)迅速、良好，實(shí)驗(yàn)中裸小鼠全部存活，活動(dòng)良好，體質(zhì)量逐漸增加，適用于宮頸癌動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)中，裸鼠成瘤時(shí)間與接種的細(xì)胞濃度高低有關(guān)，濃度越高成瘤時(shí)間越短。提示要想短時(shí)間建模成瘤，在一定濃度范圍內(nèi)接種細(xì)胞濃度越高越好。同時(shí)，移植瘤體積大小和接種細(xì)胞數(shù)呈劑量依賴性（見圖1），即同一時(shí)間點(diǎn)，腫瘤大小與接種細(xì)胞濃度呈正相關(guān)；同一濃度的組內(nèi)，各裸小鼠腫瘤大小也存在差異，甚至差異可達(dá)到263.72 mm3，筆者認(rèn)為此與裸小鼠個(gè)體之間的差異有關(guān)。在制備動(dòng)物模型進(jìn)行腫瘤靶向治療及生物學(xué)特性等研究時(shí)，裸小鼠數(shù)量足夠，才能選擇腫瘤大小較一致的個(gè)體進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。此外，隨著時(shí)間的推移，腫瘤的體積也在不斷增大，但達(dá)到一定的程度時(shí)，腫瘤體積增長(zhǎng)速度減緩，而裸小鼠開始出現(xiàn)惡病質(zhì)的情況，筆者考慮這是由于裸小鼠進(jìn)入惡病質(zhì)階段后，攝取營(yíng)養(yǎng)能力下降，腫瘤細(xì)胞攝取營(yíng)養(yǎng)的量也較前減少，增長(zhǎng)速度減慢。

宮頸癌是一個(gè)由癌前病變逐漸衍變?yōu)榘┑倪B續(xù)性病理過程。目前大量研究已證實(shí)HPV是感染宮頸癌的主要危險(xiǎn)因素。已有的研究[13]表明，90%以上的宮頸癌標(biāo)本中有HPV DNA的存在。高危型HPV持續(xù)感染及多重感染是導(dǎo)致宮頸癌變的重要原因之一。HPV高危型別的E7是誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化的腫瘤原性蛋白，也是轉(zhuǎn)化細(xì)胞持續(xù)表達(dá)的病毒特異性蛋白，因此E7是宮頸癌治療研究的靶位點(diǎn)[14]。本研究除了一般移植瘤的特性檢測(cè)之外，對(duì)HPV16 E7的特異性指標(biāo)（即HPV16 E7 DNA和蛋白表達(dá)）采用PCR和免疫組化的方法進(jìn)行鑒定，從而從分子水平進(jìn)行了人宮頸癌荷瘤裸鼠模型的鑒定。

此外，本研究中荷瘤裸鼠經(jīng)5周觀察，并經(jīng)解剖大體、病理切片組織學(xué)、免疫組化和PCR檢測(cè)（見圖3-4），均未發(fā)現(xiàn)有體表腫瘤向各主要器官轉(zhuǎn)移的證據(jù)。這表明SiHa細(xì)胞荷瘤裸鼠在建模的5周內(nèi)基本不發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，可能與本研究采用單細(xì)胞懸液皮下接種的方法有關(guān)。我們將SiHa細(xì)胞懸液移植于腋部皮下，在起初的第1～第4天，裸小鼠皮下有囊性包膜形成，由于血供不豐富，淋巴引流較差，腫瘤細(xì)胞在原接種部位生長(zhǎng)，而不易造成浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。腫瘤細(xì)胞接種后的第6天，可觀察到接種部位囊性包塊被吸收而呈現(xiàn)實(shí)質(zhì)性、米粒大小的瘤體。之后，隨著裸小鼠周齡的增加，腫瘤也開始增大（見圖1）。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程當(dāng)中，未發(fā)現(xiàn)裸小鼠有偏癱、行走不穩(wěn)（腦轉(zhuǎn)移）、呼吸費(fèi)力、發(fā)紺（肺轉(zhuǎn)移）、攝食減退、黃疸、活動(dòng)度下降（肝轉(zhuǎn)移）等重要器官腫瘤轉(zhuǎn)移的跡象，也未發(fā)現(xiàn)生物學(xué)行為有較大的變化。我們認(rèn)為采用單細(xì)胞懸液皮下接種的方法具有操作簡(jiǎn)單、腫瘤表淺、便于觀察及測(cè)量瘤體大小、潛伏期短、腫瘤生長(zhǎng)速度較快且不易轉(zhuǎn)移的優(yōu)點(diǎn)。

現(xiàn)在，人類已經(jīng)在HPV的基礎(chǔ)研究、病原學(xué)診斷等諸多方面有了極大進(jìn)步，在流行病學(xué)領(lǐng)域也得到了準(zhǔn)確的資料。本研究通過裸小鼠接種SiHa細(xì)胞成功建立了宮頸癌動(dòng)物模型，以5×107/mL濃度接種最快可在3 d時(shí)觸摸到米粒大小的瘤體，經(jīng)觀察21 d，瘤體大小可達(dá)（200.61±48.04）mm3，可以進(jìn)行后續(xù)的治療和特性研究。經(jīng)5周觀察，荷瘤裸鼠一般狀態(tài)良好，沒有發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。同時(shí)本實(shí)驗(yàn)對(duì)HPV16 E7 DNA和蛋白表達(dá)分別采用PCR和免疫組化的方法進(jìn)行鑒定，進(jìn)一步從分子水平進(jìn)行了人宮頸癌荷瘤裸鼠模型的鑒定。本實(shí)驗(yàn)為宮頸癌相關(guān)研究的后續(xù)工作，提供了快速建模的劑量-時(shí)間數(shù)據(jù)。和其他報(bào)道[15-16]相比，本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更多更細(xì)化。相比其他研究者一般僅從組織水平進(jìn)行驗(yàn)證報(bào)道，本研究則分別從分子水平、組織水平及動(dòng)物的大體水平進(jìn)行了驗(yàn)證，為后期宮頸癌靶向治療研究奠定了基礎(chǔ)。本研究的技術(shù)方法以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為建立人宮頸癌HPV16陽性的荷瘤裸鼠模型提供理論依據(jù)。

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（本文編輯：吳昔昔）

Establishment and identification of human cervical cancer SiHa cells tumor bearing model in nude mice

HOU Bailong1,DU Wangqi1,XIONG Yirong1,CAI Yiqi2,SONG Yilin1,LING XiaoYun1,XUE Xiangyang1,ZHANG Lifang1.1.Institute of Molecular Virology and Immunolog,Department of Microbiology and Immunology,Wenzhou Medical University,Wenzhou,325035; 2.Department of Gastrointestinal Surgery,the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University,Wenzhou,325015

Abstract:Objective:To establish human cervical cancer SiHa cells tumor bearing model on the body surface area in nude mice,and analyze its tumor characteristics.Methods:Three groups nude mice were subcutaneous inoculated with 5×106/mL,1×107/mL and 5×107/mL concentrations of cervical cancer SiHa cells in the right axillary close to upper limbs,to establish human cervical cancer SiHa cells tumor bearing model in nude mice.The tumor of nude mice was observed and the size of tumor was measured.The histological characteristics of tumor tissue was observed by pathological method after 5 weeks.HPV16E7 DNA of tumor tissue was comfirmed by PCR assay,and the expression of HPV16 E7 protein in tumor tissue was detected by immunohistochemistry method.Results:The tumor rate of 3 groups of nude mice inoculation with SiHa cell line was 100%.Their tumor sizes reached up (77.29±28.34) mm3,(178.91±61.55) mm3and (305.11±12.62) mm3after 5 weeks,and there was a significant difference among 3 groups (P<0.001).Pathology observation showed the growth of SiHa cell tumors were mainly in local infiltration.Histopathological of slice observation showed the new SiHa cells tumor tissue appeared pathological characteristics of large volume,large nucleus,nucleus deep dyeing and the mitotic phase.HPV16E7 DNA and the protein expression were positive comfirmed by PCR and immunohistochemistry detection respectively in tumor tissue.Conclusion:Human cervical cancer SiHa cells tumor bearing model in nude mice was established successfully,and provide an ideal animal model for human cervical cancer tumor targeted therapy and biological research.

Key words:uterine cervical neoplasms; animal models; BALB/c nude mice; SiHa cells

通信作者：張麗芳，教授，Email：wenzhouzlf@126.com。

作者簡(jiǎn)介：侯柏龍（1988-），女，山西晉城人，檢驗(yàn)技師，碩士。

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81176423）。

收稿日期：2015-03-24

[中圖分類號(hào)]R3

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

DOI:10.3969/j.issn.2095-9400.2016.02.004