陳嬌 時(shí)冉冉 常陸林

（漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校生化教研室 河南漯河 462002）

亮菌多糖對(duì)腫瘤免疫效應(yīng)機(jī)制的研究

陳嬌 時(shí)冉冉 常陸林

（漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校生化教研室 河南漯河 462002）

亮菌是一種從發(fā)光柳樹(shù)朽木上的提取出來(lái)的一種菌，又稱假蜜環(huán)菌。而亮菌多糖則是亮菌在生長(zhǎng)代謝的過(guò)程中產(chǎn)生出來(lái)的一種物質(zhì)，然而，很多相關(guān)報(bào)道稱亮菌多糖對(duì)腫瘤具有一定的免疫作用，因此，文章針對(duì)亮菌多糖對(duì)腫瘤細(xì)胞的研究，通過(guò)具體的試驗(yàn)方法，應(yīng)用一些現(xiàn)代生物技術(shù)、細(xì)胞生物學(xué)以及免疫學(xué)等知識(shí)，對(duì)亮菌多糖具有腫瘤免疫效應(yīng)機(jī)制進(jìn)行深入研究，從而能夠?yàn)榱辆嗵窃谀[瘤免疫機(jī)制中的應(yīng)用和研究提供一種理論參考。

亮菌多糖 腫瘤 免疫效應(yīng) 研究

1 腫瘤以及多糖的現(xiàn)狀

在當(dāng)今社會(huì)上，腫瘤已經(jīng)成為一種極其常見(jiàn)嚴(yán)重的疾病，根據(jù)全世界的統(tǒng)計(jì)，大約有7600萬(wàn)的腫瘤患者生活在這個(gè)世界上，并且以每年增加700萬(wàn)的腫瘤患者的情況，全世界由于腫瘤引起的死亡人數(shù)占600萬(wàn)，占死亡總?cè)藬?shù)的12%，在我國(guó)，死于腫瘤人數(shù)占死亡人數(shù)的21.58%。當(dāng)今社會(huì)治療腫瘤的方法主要有化療、放療以及手術(shù)治療等，但是采用這些方法在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也對(duì)人體的正常細(xì)胞具有很大程度上的損害，尤其是人體的免疫功能以及造血功能。因此，一種新型的免疫療法得到了廣泛的應(yīng)用，它可以通過(guò)提高人體的免疫效應(yīng)機(jī)制進(jìn)行抑制殺死腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。

多糖是一種天然的高分子化合物，廣泛的存在于動(dòng)物的細(xì)胞膜以及植物的細(xì)胞壁等。在20世紀(jì)的50年代，很多生物醫(yī)學(xué)家發(fā)現(xiàn)多糖具有抗腫瘤的作用，很多研究表明，多糖對(duì)正常細(xì)胞的損壞小，對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用較強(qiáng)，有些多糖對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率能夠達(dá)到100%。而本文主要研究的多糖是亮菌多糖對(duì)腫瘤免疫效應(yīng)機(jī)制的作用，主要通過(guò)具體試驗(yàn)采用DEAE離子交換柱的方法純化亮菌多糖，測(cè)定硫酸基含量、紅、紫外線的掃描等證明亮菌多糖對(duì)腫瘤免疫機(jī)制。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 亮菌多糖的提取

2.1.1 亮菌的培養(yǎng)

（1） 液體種子的培養(yǎng)方法：事先要準(zhǔn)備好100ml的液體種子的培養(yǎng)基，把斜面菌種勻漿后并且按照5%的接種量加入到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度要在26攝氏度，150rpm條件下振蕩性的培養(yǎng)7天。

（2） 液體發(fā)酵的培養(yǎng)：2/5的裝液量，并且按照5%的接種量把上面的液體種子加入搖瓶中，發(fā)酵的溫度控制在26攝氏度，150rpm振蕩培養(yǎng)5天。

2.2 實(shí)驗(yàn)中的動(dòng)物分組

在無(wú)菌的條件下取得傳代6d的S肉瘤細(xì)胞的懸液，通過(guò)加入一定量的生理鹽水對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行稀釋，對(duì)每一只小鼠在腋下進(jìn)行接種0.2mL，然后再24h后，在進(jìn)行隨機(jī)分組：對(duì)于亮菌多糖組的小鼠要按照每天0.1ml/10g的體重要求在它們的腹腔內(nèi)注射一定量的亮菌多糖，另外一個(gè)正常對(duì)照組的小鼠注射一定的生理鹽水，對(duì)接種腫瘤后一般情況下是12天后分別對(duì)不同組的小鼠進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。

2.3 對(duì)S肉瘤的抑制作用

對(duì)于用于實(shí)驗(yàn)的小鼠采用勁椎脫臼法致死，把它們的腫瘤塊、胸腺以及脾臟等用電子稱它們的重量。最后計(jì)算腫瘤的抑制率、胸腺指數(shù)以及脾指數(shù)用生物統(tǒng)計(jì)的方法進(jìn)行處理解決。

2.4 對(duì)NK細(xì)胞殺傷活性的測(cè)定

2.4.1 NK細(xì)胞的獲取

對(duì)于用于實(shí)驗(yàn)采用勁椎脫臼法致死的小鼠，在無(wú)菌的條件下取出它們的脾臟，以便制備一個(gè)單個(gè)脾細(xì)胞，并且要加入0.4ml的雙蒸水緩慢的振蕩30s，之后就是以最快的速度加入到0.4ml的雙倍生理鹽水中，從而能夠使得溶液等滲，在對(duì)液體進(jìn)行離心10min，使得細(xì)胞沉淀重懸于一種含有10%的小牛血清的培養(yǎng)液中，最后就得到的就是備用的N K細(xì)胞。

2.4.2 靶細(xì)胞的獲取

傳代培養(yǎng)的L929細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中使用的是0.25%胰蛋白酶一般都是消化1至2min ，之后就是加入完全1640培養(yǎng)液進(jìn)行緩慢的吹打細(xì)胞，并且以2000rpm離心5min，最后把沉淀細(xì)胞重懸于1640培養(yǎng)液中，就是備用的NK細(xì)胞的靶細(xì)胞。

2.4.3 對(duì)NK細(xì)胞的活性進(jìn)行測(cè)定

把事先準(zhǔn)備好的靶細(xì)胞懸液加入每個(gè)孔是0.1ml的96孔板中，并且在培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)1h，每個(gè)孔中都有加入0.1ml的效應(yīng)細(xì)胞，加入靶細(xì)胞1640培養(yǎng)液0.1ml，再分別設(shè)置4個(gè)復(fù)孔，在培養(yǎng)24h后倒出上清液，對(duì)每個(gè)孔加滿生理鹽水，重復(fù)兩次，在加入0.1ml的0.1%的中性紅染液，在37攝氏度條件下進(jìn)行培養(yǎng)30min，之后用生理鹽水棄去染液，最后在每個(gè)孔內(nèi)都加入0.1ml的細(xì)胞溶解液，測(cè)量光密度值，并且記錄下來(lái)OD值。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

根據(jù)實(shí)驗(yàn)測(cè)量數(shù)據(jù)分析亮菌多糖組的小鼠腫瘤的生長(zhǎng)速度相對(duì)比較緩慢，并且剝離出來(lái)的腫瘤體是一個(gè)完整的組織，在腫瘤周?chē)](méi)有出現(xiàn)流血以及水腫的現(xiàn)象，并且精神狀態(tài)以及食欲都相對(duì)比較好，由此可以看出，亮菌多糖對(duì)S肉瘤具有很好的抑制作用，抑制率為44.22%。

除此之外，根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，移植腫瘤S之后小鼠的脾臟會(huì)相應(yīng)的變大，進(jìn)而脾指數(shù)也相對(duì)升高，而且胸腺出現(xiàn)了嚴(yán)重萎縮的情況，胸腺指數(shù)也會(huì)相應(yīng)減小，最終導(dǎo)致免疫功能下降，而在亮菌多糖那組的小鼠脾指數(shù)則屬于正常，大概下降了35%，具有顯著性的差異，由此可見(jiàn)，亮菌多糖對(duì)胸腺具有一定的保護(hù)作用，可以抑制腫瘤對(duì)免疫器官的傷害。

結(jié)語(yǔ)：

根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)分析，對(duì)亮菌多糖具有一定的深入了解，隨著現(xiàn)代生物技術(shù)以及醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，在對(duì)腫瘤方面采用的一些比較有效的治療方法得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。文章通過(guò)對(duì)小鼠加以試驗(yàn)研究，根據(jù)最后測(cè)量出的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明亮菌多糖對(duì)腫瘤的免疫治療機(jī)制確實(shí)具有一定的積極作用，可以很好的抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，并且對(duì)正常細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有嚴(yán)重的損壞，對(duì)人體的免疫功能具有一定的保護(hù)作用。

［1］萬(wàn)佐璽，秦恩華，周光來(lái).魔芋中水溶性多糖的提?。跩］. 湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）. 2004（04） .

［2］葉凱貞，黎碧娜，王奎蘭，譚志偉.多糖的提取、分離與純化［J］. 廣州食品工業(yè)科技. 2004（03）.

Q945

A

1674-2060（2016）02-0313-01

陳嬌（1988-），女，漢族，河南漯河，漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，研究方向：生物化學(xué)與分子生物學(xué)。