時冉冉 陳嬌 宗自衛(wèi)

（漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校生化教研室 河南漯河 462002）

靈芝多糖抗腫瘤作用的免疫分子機制研究

時冉冉 陳嬌 宗自衛(wèi)

（漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校生化教研室 河南漯河 462002）

靈芝多糖是一種從靈芝實體中被提取出來的多糖組份，靈芝多糖極易溶于水。很多科學(xué)研究表明，靈芝多糖具有一定的免疫調(diào)節(jié)功能以及一定的抗腫瘤等作用，并且認(rèn)為在體外靈芝多糖并沒有直接的對腫瘤細(xì)胞有抑制作用或者殺傷作用，反而在體內(nèi)靈芝多糖則具有很好的抗腫瘤作用。所以，通常情況下，對靈芝多糖的抗腫瘤作用的研究主要就是通過增加免疫功能，盡管我國很多科學(xué)家已經(jīng)從免疫功能的角度對靈芝多糖的抗腫瘤作用進(jìn)行研究，但確切的機制并沒有明確。因此文章結(jié)合具體實驗對靈芝多糖的抗腫瘤作用的免疫分子機制進(jìn)行深入研究。

靈芝多糖 抗腫瘤 免疫分子機制 研究

1 靈芝多糖抗腫瘤作用的實驗研究方法

1.1 準(zhǔn)備荷瘤小鼠

一般情況下，用于實驗的小鼠選取的都是8至10周齡的BALB/ c純系小鼠，并且用一次性的1ml的無菌注射器，把那些生長狀態(tài)最佳的S-180腹水瘤傳代細(xì)胞吸取出來，按照每一只抽取0.15ml的要求穿過小鼠肌肉在右邊后肢的腹股溝皮下進(jìn)行接種，正常喂食這些實驗小鼠，一般10天之后把脾臟內(nèi)或者腹腔內(nèi)的巨噬細(xì)胞提取出來用于靈芝多糖的實驗研究。

1.2 荷瘤小鼠脾臟細(xì)胞的培養(yǎng)

每次取2只BALB/c荷瘤小鼠，并且采用拉頸椎的方法把小鼠致死，在無菌的環(huán)境條件下，把小鼠的脾臟取出來，放在含有少量的Hank液的培養(yǎng)器皿中，通常都是采用兩塊載玻片夾持的方法把脾細(xì)胞碾碎，之后就移入離心管中，并且用吸管吹打一定的次數(shù)，用200目尼龍布進(jìn)行細(xì)胞過濾，過濾之后的濾液要進(jìn)行1500轉(zhuǎn)離心來收集細(xì)胞，最后使用Hank液進(jìn)行清洗三次，然而再通過使用含有10%的新生牛血清以及青霉素和鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，并且要按照一定的要求配成每毫升8000000個細(xì)胞，并且把上述細(xì)胞懸液加入在已經(jīng)加好一定待試藥物與對照試劑96孔板的每個小孔中，通常每個小孔需要加入0.1ml細(xì)胞懸液，并且總體積為0. 2ml，最后就把用于實驗的培養(yǎng)箱放置在濕度飽和、5%的二氧化碳、溫度在37攝氏度的環(huán)境條件下進(jìn)行培養(yǎng)，要根據(jù)一定的培養(yǎng)時間要求。

2 靈芝多糖抗腫瘤作用的實驗方案

2.1 靈芝多糖在體外對脾細(xì)胞增殖的量效關(guān)系

一般情況下，把實驗分成6組，并且每個實驗小組有6個樣本，一組為對照組，其他5組則都是具有不同濃度的靈芝多糖GLB組，不同濃度通常設(shè)置為0.025mg/ml、0.050mg/ml、0.100mg/ml、0. 200mg/ml、0.400mg/ml。并且在96孔的培養(yǎng)板中選定6*6孔的區(qū)域加入不同濃度的靈芝多糖，第一列是實驗的對照組，之后依次就是具有不同濃度的GLB組，事先要做的就是在對照組的孔內(nèi)加入0. 1ml的RPMI1640培養(yǎng)液，在其他實驗孔內(nèi)依次加入0.1ml不同濃度的RPMI1640培養(yǎng)液。取兩只BALB/c荷瘤小鼠，按照上述方法進(jìn)行準(zhǔn)備小鼠脾細(xì)胞懸液，并且在每個小孔內(nèi)加入0.1ml的小鼠脾細(xì)胞懸液。最后培養(yǎng)72小時，檢測細(xì)胞的增殖情況。

2.2 靈芝多糖提高荷瘤小鼠脾細(xì)胞血清中IFN-y的水平

根據(jù)實驗的不同分組，取32只8至10周齡的小鼠，并且用一次性的無菌注射器取1ml生長狀態(tài)最佳的S-180腹水瘤傳代細(xì)胞，并且按照細(xì)胞數(shù)量為106/ml，0.15ml/只，穿過小鼠的右后肢腹股溝皮下的肌肉進(jìn)行接種，到了第二天，隨機的把32只小鼠進(jìn)行分成4組，設(shè)置一個生理鹽水為對照組，其他的小組按照小劑量GLB組，一般為50mg/kg，中劑量GLB組，一般為100mg/kg，大劑量GLB組，一般為200mg/kg。在小鼠的腹腔內(nèi)分別注射一定的藥物，靈芝多糖要用生理鹽水進(jìn)行配置，每天注射一次，連續(xù)注射9天。到了第10天，對小鼠進(jìn)行抽血5ml放在離心管中，在室溫的條件下放置3個小時使其在自然狀態(tài)下凝固，并且剝離凝血塊，進(jìn)行1500轉(zhuǎn)離心，取得上清液進(jìn)行測量IFN-y的含量。一般采用的是單向方差分析，通過比較實驗組和對照組的均數(shù)，檢查小鼠血清的IFN-y的水平。

3 實驗結(jié)果的具體分析

3.1 靈芝多糖在體外能夠促進(jìn)小鼠的脾細(xì)胞增殖

根據(jù)以上的研究分析，靈芝多糖在一定條件下能夠促進(jìn)正常小鼠的脾細(xì)胞增殖，文章為了從免疫學(xué)的角度進(jìn)行深入研究靈芝多糖的抗腫瘤機制，首先就要檢測靈芝多糖對小鼠脾細(xì)胞的增殖作用。實驗結(jié)果表明GLB在0.05mg/ml-0.4mg/ml的濃度下都能夠促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞的增殖，并且隨著濃度的逐漸增大，促進(jìn)的效果就越大。

3.2 靈芝多糖能夠促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-a

TNF-a細(xì)胞一般都是由淋巴細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞分泌產(chǎn)生的，通常情況下，在小鼠的脾細(xì)胞內(nèi)既含有巨噬細(xì)胞，也含有淋巴細(xì)胞，因此，為了進(jìn)一步更好的確定靈芝多糖作用的靶細(xì)胞，一般都是對小鼠的腹腔內(nèi)脾細(xì)胞進(jìn)行試驗研究。試驗結(jié)果檢測出的數(shù)據(jù)表明，GLB在0.2mg/ml下對荷瘤小鼠的腹腔內(nèi)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-a具有明顯的促進(jìn)作用，以及統(tǒng)計學(xué)上的顯著差異P=000，相比較于基礎(chǔ)水平而言，增加了112%。

結(jié)語：

文章通過具體的小鼠作為試驗對象，設(shè)置了不同組進(jìn)行對比分析，并且根據(jù)相應(yīng)的檢測結(jié)果進(jìn)行分析靈芝多糖具有抗腫瘤作用的免疫機制，文章首先對實驗的相關(guān)準(zhǔn)備工作進(jìn)行了詳細(xì)介紹，其次是實驗的具體方案，最后對檢測的結(jié)果進(jìn)行分析，從小鼠脾細(xì)胞的免疫學(xué)角度進(jìn)行分析靈芝多糖對腫瘤細(xì)胞的抑制作用，在一定條件下，不僅能夠促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞的增殖，而且能夠促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞的巨噬細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞分泌TNF-a細(xì)胞。這次實驗研究很好的表明了靈芝多糖具有抗腫瘤作用的免疫分子機制，從而能夠?qū)σ院蟮哪[瘤研究具有一定的參考價值。

［1］何中秋，李義華，李英輝，張晶，何淼.低分子多糖對腫瘤血管生長因子抑制作用的研究［J］.實用腫瘤學(xué)雜志.2005（05）.

［2］陳慶偉，陳志桃.枸杞多糖藥理作用研究進(jìn)展［J］.海峽藥學(xué). 2005（04）.

R73

A

1674-2060（2016）02-0317-01

時冉冉（1986-），女，漢族，河南漯河，漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，研究方向：生物化學(xué)與分子生物學(xué)。