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巨大血小板對GEN.S血細胞分析儀白細胞計數(shù)及分類的影響

李杰

(鐘祥市人民醫(yī)院 檢驗科， 湖北 鐘祥431900)

目前血液常規(guī)分析主要使用各種血液分析儀完成，儀器均使用阻抗法原理進行細胞計數(shù)，對于白細胞分類則采用各種光、電、化學(xué)染色技術(shù)手段。貝克曼- 庫爾特GEN.S血液分析儀(簡稱GEN.S)利用VCS技術(shù)同時對單個白細胞進行細胞體積(V)，高頻電流傳導(dǎo)(C) 及激光散射(S)的分析，從而得到白細胞五分類的結(jié)果。當血液中出現(xiàn)巨大血小板(giant platelet)時會干擾阻抗法儀器的血小板計數(shù)結(jié)果，導(dǎo)致計數(shù)結(jié)果降低。對于此類標本，國際血液學(xué)專家委員會及國內(nèi)專家提出應(yīng)進行顯微鏡鏡檢以避免巨大血小板對血小板計數(shù)的干擾[1,2]，但巨大血小板對白細胞計數(shù)及分類的干擾則未見報道。本研究對GEN.S血液分析儀巨大血小板報警標本進行顯微鏡檢復(fù)核，發(fā)現(xiàn)巨大血小板除對血小板計數(shù)有干擾外尚可干擾白細胞計數(shù)及分類結(jié)果，有效的顯微鏡檢可保證結(jié)果的準確性。

1材料與方法

1.1儀器與試劑研究使用儀器為貝克曼- 庫爾特GEN.S血液分析儀，試劑為原裝配套試劑，雙目顯微鏡(Olympus公司生產(chǎn))，瑞氏染液(貝索公司生產(chǎn))，牛鮑氏血細胞計數(shù)板，按全國臨床檢驗操作規(guī)程配制白細胞計數(shù)稀釋液。

1.2標本來源湖北省鐘祥市人民醫(yī)院檢驗科臨檢室2015年3月-6月住院病人血常規(guī)標本，其中經(jīng)GEN.S檢測后有巨大血小板陽性提示的血液標本共200例(占同期標本總數(shù)約2%)。

1.3方法及判斷標準抽患者靜脈血2 ml于EDTA.K2抗凝管中送檢，在2小時內(nèi)進行血液分析后取血樣制備血涂片，瑞氏染色后由經(jīng)過細胞形態(tài)學(xué)專業(yè)培訓(xùn)的主管技師按全國臨床檢驗操作規(guī)程進行顯微鏡鏡檢白細胞分類，總共觀察200個白細胞，同時對血液樣本進行手工法白細胞計數(shù)。人工鏡檢陽性標準為整張涂片中巨大血小板占血小板總數(shù)的比例大于15%[1]。以手工鏡檢結(jié)果為標準，與儀器結(jié)果進行對比。

1．4統(tǒng)計學(xué)處理使用SPSS19.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析，定量數(shù)據(jù)使用t檢驗進行組間比較，P<0.05為差別具有顯著性。

2結(jié)果

2.1對200例儀器巨大血小板提示陽性的標本按文獻標準進行血涂片瑞氏染色顯微鏡鏡檢，200例標本巨大血小板提示陽性標本中發(fā)現(xiàn)195例(97.5%)巨大血小板比例增高的現(xiàn)象。

2.2將儀器巨大血小板提示陽性的標本進行手工法白細胞及血小板計數(shù)，在200例標本中，經(jīng)人工復(fù)核，170例結(jié)果儀器測定與人工鏡檢之間差異無顯著性。30例標本提示“Cellular Interference”，檢測結(jié)果中白細胞計數(shù)結(jié)果及淋巴細胞計數(shù)結(jié)果偏高，30例標本人工與儀器白細胞計數(shù)及分類結(jié)果的比較見表1。

2.3對影響白細胞計數(shù)及分類的30例標本進行巨大血小板數(shù)量(占總數(shù)的百分比)與白細胞計數(shù)受干擾程度(增高幅度百分比)的相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)巨大血小板數(shù)量與白細胞計數(shù)受干擾程度呈正相關(guān)，y=0.76x+18.2，r2=0.74。

表1　受干擾標本人工與儀器檢測白細胞計數(shù)及淋巴細胞

3討論

目前已經(jīng)證實血液分析時有核紅細胞、難溶性紅細胞等存在可影響白細胞計數(shù)的準確性，巨大血小板對血小板計數(shù)產(chǎn)生的影響也多見報道[3，4]。但巨大血小板對其它血細胞計數(shù)尤其是白細胞計數(shù)及分類的干擾則未見報道。本研究主要觀察其對白細胞計數(shù)與分類的影響。GEN.S使用經(jīng)典的電阻抗法進行白細胞計數(shù)，全血樣本經(jīng)溶血素作用后，紅細胞破壞而保留白細胞進行電阻抗法計數(shù)。在溶血素的作用下時血小板并未被破壞，但在正常情況下血小板、紅細胞碎片等非WBC顆粒體積在35fl以下，由于儀器定義大于35fl的顆粒為WBC并進行計數(shù)，故正常情況下血小板體積與白細胞差別較大，進行電阻抗法計數(shù)時產(chǎn)生信號不同，儀器可將其與白細胞準確區(qū)分而不干擾白細胞計數(shù)。在出現(xiàn)巨大血小板且比例增高時，由于巨大血小板與白細胞體積接近且不能被溶血素破壞，進行電阻抗法計數(shù)時產(chǎn)生信號相似，故對白細胞計數(shù)產(chǎn)生干擾(儀器提示“Cellular Interference”)并導(dǎo)致計數(shù)結(jié)果偏高。目前在高檔的儀器如LH750血液分析儀上儀器具有白細胞計數(shù)自動糾正功能，可以排除大部分此類干擾，但部分標本儀器仍舊會受到干擾而導(dǎo)致計數(shù)結(jié)果偏高[5]。巨大血小板的數(shù)量越高，體積越大，白細胞計數(shù)與分類受干擾的程度越大，與本研究結(jié)果證實巨大血小板的數(shù)量與白細胞計數(shù)受干擾的程度呈正相關(guān)相符，故對此類結(jié)果應(yīng)予以人工糾正以保證其準確性。

GEN.S在白細胞分類中使用VCS技術(shù)同時對白細胞進行三種不同的參數(shù)分析從而得到白細胞五分類的結(jié)果。其原理為在分析前使用溶血素(ERYTHROLYSE REAGENT)破壞紅細胞，然后使用穩(wěn)定劑(STABILYSE REAGENT)中和溶血素并保證白細胞接近于自然狀態(tài)，此時五類白細胞大小(V)，電導(dǎo)率(C)，光散射(S)不同，儀器通過收集8192個白細胞的VCS參數(shù)以進行VCS分析分類。巨大血小板的VCS各參數(shù)接近于淋巴細胞，當其比例增高時儀器將其分類為淋巴細胞，故結(jié)果提示淋巴細胞比例增高。由于部分血小板被儀器誤認為白細胞，故儀器進行白細胞分類時分析的白細胞數(shù)量不足，分類結(jié)果會受到干擾而不可信。人工顯微鏡檢時，可在顯微鏡下通過細胞大小、顆粒、折光性、染色等特性不同而對白細胞與血小板進行區(qū)分，故可準確計數(shù)并分類。

目前各醫(yī)院血液分析均使用各類儀器進行，儀器進行細胞計數(shù)均使用經(jīng)典的電阻抗法，干擾因素較多。從本研究結(jié)果可以看出，血液分析標本巨大血小板報警陽性率約2%，其中有97.5%證實為真陽性標本。在真陽性標本中有15%的標本對除血小板計數(shù)產(chǎn)生干擾外也對白細胞計數(shù)與分類產(chǎn)生干擾。使用GEN.S進行血液分析時，對于儀器如出現(xiàn)巨大血小板報警陽性的標本，在進行人工鏡檢復(fù)核血小板數(shù)量時，必須注意血小板對白細胞數(shù)量與分類的干擾，進行人工白細胞計數(shù)及分類才能保證結(jié)果的準確性。某些血小板系統(tǒng)疾病會出現(xiàn)血小板數(shù)量及形態(tài)的改變，人工顯微鏡檢除了保證結(jié)果的準確性以外也是血小板系統(tǒng)疾病診斷的標準之一[6,7]。故人工顯微鏡鏡檢仍然是對儀器結(jié)果進行復(fù)核的金標準。

參考文獻：

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(收稿日期：2015-09-06)

文章編號：1007-4287(2016)03-0480-02