邱　麗，苗　溫，白　虹（.天津醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系，天津　300070；.天津市濱海新區(qū)塘沽中心血站，天津　300456）

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O型孕婦產(chǎn)前IgG抗－A（B）抗體效價變化分析

邱麗1，苗溫2，白虹1
（1.天津醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系，天津300070；2.天津市濱海新區(qū)塘沽中心血站，天津300456）

摘要目的：探討O型孕婦產(chǎn)前IgG抗－A（B）抗體效價的變化及其拐點的出現(xiàn)時間。方法：使用經(jīng)典抗球蛋白試驗檢測2 777 名O型孕婦血清中IgG抗－A（B）抗體效價，并按妊娠次數(shù)、孕周進行結(jié)果分析。結(jié)果：隨著妊娠次數(shù)的增加，血清中IgG抗－A （B）抗體水平也不斷增高，首次妊娠與2次及以上妊娠孕婦血清IgG抗－A（B）抗體效價相比均存在顯著性差異（P＜0．01）；隨著孕周的增加，血清中IgG抗－A（B）抗體水平在16～19周時緩慢增高，在妊娠20周時出現(xiàn)一個明顯增高的拐點，而后繼續(xù)增高并在孕24～28周時達到峰值，隨后不再增長。結(jié)論：O型孕婦在妊娠20周時應(yīng)進行IgG抗－A（B）抗體效價檢測，具有多次妊娠史的O型孕婦，體內(nèi)可能存在高效價的IgG抗－A（B）抗體，應(yīng)及時進行抗體檢測。

關(guān)鍵詞IgG抗－A（B）抗體；新生兒溶血病；拐點

Analysis of IgG anti -A(B)antibody titers in type O pregnant women

QIU Li1，MIAO Wen2，BAI Hong1
（1.Department of Immunology,School of Basic Medical Sciences,Tianjin Medical University,Tianjin 300070,China；2.Binhai Tanggu Blood Station,Tianjin 300456,China）

Abstract Objective:To investigate the changes and turning point of IgG anti-A(B)antibody titers in type O pregnant women.Methods：IgG anti-A(B)antibody titers of 2 777 type O pregnant women were tested by the classic antiglobulin test and the results were analyzed according to the number of pregnancy and gestational weeks.Results：With the increase of the number of pregnancy,serum IgG anti -A(B)antibody levels were also increased,and significant difference was found in IgG anti -A(B)antibody titers between the first pregnancy and the two or multiple pregnant women（P＜0.01）.With the increase of gestational weeks,serum IgG anti -A(B)antibody level was first increased slowly in 16-19 weeks of pregnancy,with a turning point of marked increase at 20 weeks of pregnancy，after which continued to increase to peak at 24-28 weeks of pregnancy,without any further growth.Conclusion：The type O pregnant women should undergo IgG anti-A(B)antibody titers detection at 20 weeks of pregnancy.The group O pregnant women with multiple pregnancy history should carry out IgG anti -A(B)antibody test in time,because high titer antibodies may exist in their sera.

Key words IgG anti-A(B)antibody；haemolytic disease of the newborn；turning point

新生兒溶血?。╤aemolytic disease of the newborn,HDN）一般特指母嬰血型不合引起的胎兒或新生兒同種免疫性溶血性疾病，現(xiàn)已列為孕婦圍產(chǎn)期保健的重要內(nèi)容。新生兒溶血病較多發(fā)生于ABO和Rh血型系統(tǒng)，雖然ABO-HDN的溶血表現(xiàn)相對于Rh-HDN較溫和[1]，但在我國的HDN以ABO系統(tǒng)居多（85.3%），Rh系統(tǒng)較少（14.6%），MNSs系統(tǒng)罕見（0.1%）[2]。近年Meta分析顯示隨著孕婦IgG抗-A(B)抗體效價的升高，發(fā)生HDN的概率也增高[3]。而產(chǎn)前IgG抗－A（B）抗體效價檢測可用于判斷ABOHDN發(fā)病的風(fēng)險，是預(yù)防ABO-HDN發(fā)生的一個重要參考指標[4]。因此對O型孕婦進行血清IgG抗-A （B）抗體效價的檢測，了解其上升速度及影響因素，對于預(yù)防、診斷和治療ABO系統(tǒng)新生兒溶血病有重要意義。本文對濱海新區(qū)2 777名孕婦產(chǎn)前血清IgG抗－A（B）抗體檢測結(jié)果進行分析，結(jié)果如下。

1　資料與方法

1.1收集資料天津市濱海新區(qū)2012年7月-2015年5月在我站進行ABO系統(tǒng)新生兒溶血病產(chǎn)前血清學(xué)檢測的2 777名孕婦，血型均為O型RhD陽性，孕周16～36周，平均孕周20周，孕產(chǎn)次數(shù)為1～6次。其丈夫血型為A型（1 309例）、B型（1 468例）。2 777名孕婦均身體健康，無輸血史，血清不規(guī)則抗體篩查試驗陰性。采集的血樣為孕婦外周靜脈血，使用4 mL促凝管和2 mL EDTA抗凝管采集。

1.2試劑與儀器單克隆抗-A、抗-B（批號20130917）、單克隆抗-D（IgM）（批號20130620）、ABO反定型紅細胞（批號20145317）和抗球蛋白試劑（多特異性）（批號20130904）均為上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)；二硫蘇糖醇（DTT）（批號20140621）和抗體篩選細胞（批號20140408）均為長春博德生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。Coomb’s凝膠卡（批號14002.01）及配套卡式孵育器和離心機（戴安娜公司）；細胞洗滌離心機（KA-2200型，日本久保田）。

1.3血清學(xué)檢測

1.3.1 ABO和RhD血型檢測[5]使用鹽水試管法。

1.3.2孕婦血清抗體篩查試驗使用微柱凝膠法。

1.3.3孕婦血清中IgG抗-A（B）抗體效價檢測取孕婦待檢血清100 μL，加入二硫蘇糖醇（DTT）試劑100 μL，37℃處理1 h，破壞IgM抗- A（B）；處理后血清用生理鹽水進行2倍系列稀釋，然后分別加入對應(yīng)丈夫血型的紅細胞，37℃孵育后進行試管法間接抗球蛋白試驗[6]。試管法間接抗球蛋白試驗是檢測IgG抗-A（B）效價的經(jīng)典方法，也是中國醫(yī)師協(xié)會輸血科醫(yī)師分會所推薦的[7]。IgG抗-A（B）抗體效價以＜64為正常參考值。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理計數(shù)資料的比較使用SPSS 19.0軟件包進行χ2檢驗，P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義?？贵w效價與妊娠次數(shù)、孕周的圖表分析使用Excel軟件。

2　結(jié)果

2.1 2 777名O型孕婦血清IgG抗-A(B)抗體效價檢測結(jié)果見表1。首次妊娠與2次、3次和4～6次妊娠比較，IgG抗-A（B）抗體效價存在顯著性差異（χ2=12.1，26.0，10.3，P＜0.01）；2次妊娠與3次妊娠比較，IgG抗-A（B）抗體效價有差異（χ2=5.92，P=0.015＜0.05），但顯著性水平低于首次妊娠與2次及以上妊娠的比較；3次妊娠與4～6次妊娠比較，IgG抗-A （B）抗體效價無顯著性差異（χ2=0.871，P＞0.05）。

表1　2 777名O型孕婦血清IgG抗-A(B)效價檢測結(jié)果Tab 1 The test result of IgG anti-A(B)antibody titers of 2 777 type O pregnant women

2.2孕婦血清中IgG抗-A（B）抗體水平隨孕周增高變化隨著孕周的增加，血清中IgG抗-A（B）抗體水平在16～19周時緩慢增高，在妊娠20周時出現(xiàn)一個明顯增高的拐點，而后繼續(xù)增高并在孕24～28周時達到頂峰，隨后不再增長，并且抗-A抗體效價水平要高于抗-B抗體，見圖1。

圖1　IgG抗-A（B）抗體水平與孕周的關(guān)系Fig 1 The relationship between IgG anti-A(B)antibody titers and the gestational weeks

2.3孕婦血清中IgG抗-A（B）抗體水平隨妊娠次數(shù)增多變化從圖1中發(fā)現(xiàn)孕16～19周期間孕婦IgG抗-A（B）抗體效價未出現(xiàn)明顯增高的拐點，增長緩慢，因此選取1 692名孕16～19周孕婦按妊娠次數(shù)為1、2、3和4～6次進行分組，計算每組抗體效價的對數(shù)平均值，繪制成趨勢圖。結(jié)果顯示隨著妊娠次數(shù)的增多，抗體效價水平也不斷增高，抗-A抗體效價水平要高于抗-B抗體，見圖2。

圖2　IgG抗-A（B）抗體水平與妊娠次數(shù)的關(guān)系Fig 2 The relationship between IgG anti-A(B)antibody titers and the times of pregnancy

3　討論

HDN是由母親經(jīng)胎盤傳送給胎兒的抗體引起的，其基本原因是免疫性溶血反應(yīng)，在此反應(yīng)中靶細胞為胎兒紅細胞，致敏紅細胞外覆蓋有母親的IgG抗體，溶血是通過抗體依賴性細胞介導(dǎo)的細胞毒作用。胎盤對抗體的吸收是選擇性的，IgG是唯一能穿過胎盤的免疫球蛋白。O型人血液中可天然地存在IgG抗-A（B）抗體[8]，因此不同于Rh-HDN，需要通過輸血或妊娠，經(jīng)同種異體紅細胞抗原刺激產(chǎn)生抗體導(dǎo)致HDN，ABO-HDN在第一胎即可發(fā)生。圖1和2均顯示，IgG抗-A抗體效價略高于抗-B抗體效價，這符合抗-A和抗-B抗體血清學(xué)特點，抗-A比抗-B有相對較大的變化范圍（抗-A：8-2 048/ 抗-B：8-256）[9]。

機體接受抗原刺激后,B淋巴細胞活化增殖，進一步分化成熟為漿細胞和記憶性B細胞，漿細胞合成和分泌特異性抗體，參與體液免疫應(yīng)答；記憶性B細胞不產(chǎn)生免疫球蛋白，但再次與同一抗原相遇時可迅速活化，產(chǎn)生大量抗原特異性的免疫球蛋白。妊娠過程中的胎盤局部破裂造成“經(jīng)胎盤出血”，使得胎兒紅細胞進入母親體內(nèi)刺激母體產(chǎn)生抗體，而隨著母親的再次妊娠，胎兒紅細胞會再次進入母體刺激其產(chǎn)生大量的IgG抗體。有文獻報道[10-11]，多次妊娠的O型孕婦較初次妊娠的O型孕婦更易產(chǎn)生高效價的IgG抗體，但文獻僅分析了首次妊娠與2次及以上妊娠史孕婦之間的顯著性差異。本次研究按首次、2次、3次、4～6次妊娠劃分4組進行統(tǒng)計學(xué)和趨勢分析，結(jié)果顯示首次妊娠與妊娠2次及以上的孕婦血清IgG抗-A（B）抗體效價相比均存在顯著性差異，證明隨著妊娠次數(shù)的增加，孕婦抗體效價增高；而2次妊娠與3次妊娠比較，其顯著性水平低于首次妊娠與2次及以上妊娠的比較，3次妊娠與4～6次妊娠比較，抗體效價已無顯著性差異，從中推測ABO糖類抗原多次刺激機體產(chǎn)生IgG抗體，在3次妊娠后將進入抗體增長的平臺期。

本次研究顯示隨著孕婦孕周的增加，血清中IgG抗-A（B）抗體水平在16～19周時緩慢增高，在妊娠20周時出現(xiàn)一個明顯增高的拐點，而后繼續(xù)增高并在孕24～28周時達到峰值，隨后不再增高，抗-A和抗-B抗體變化趨勢基本一致。IgG通過胎盤是一個主動轉(zhuǎn)運的過程且不可逆，這個過程需要胎盤上的特異性受體（FcR）介導(dǎo)，在最初妊娠的12周內(nèi)，只有少量IgG抗體被轉(zhuǎn)運[12]，妊娠20周后，胎盤細胞膜特異性蛋白受體選擇運轉(zhuǎn)系統(tǒng)成熟[13]，在妊娠24周時胎兒體內(nèi)的IgG濃度開始呈指數(shù)式的增高直至妊娠期末[12]，妊娠期末母體向胎兒轉(zhuǎn)運IgG抗體的速度相對緩慢，這也許和胎盤功能的衰退有關(guān)。國內(nèi)文獻[14-16]支持本文隨著孕周增加抗體效價增高的結(jié)論，但此類報道篇數(shù)少，且以往研究選取的孕周觀測點少、時間跨度大，不能形成完整的趨勢圖進行拐點分析。本文通過較大樣本量對孕周抗體效價變化趨勢進行了直觀的整體分析，發(fā)現(xiàn)妊娠20周為抗體效價變化的拐點，妊娠24～28周逐步達到抗體水平峰值，有利于臨床選擇ABOHDN產(chǎn)前抗體效價的最佳檢測和復(fù)查時間。

隨著我國計劃生育政策的放開，未來2次或2次以上妊娠史的孕婦將逐漸增多。通過本文研究，建議有多次妊娠史的O型孕婦，由于其體內(nèi)可能存在高效價的IgG抗-A（B）抗體，應(yīng)及時進行產(chǎn)前抗體效價檢測；建議妊娠20周作為ABO-HDN產(chǎn)前檢查最佳的初次檢測時間。

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（2015-06-23收稿）

作者簡介邱麗（1982-），女，碩士在讀，研究方向：免疫學(xué)；通信作者：白虹，E- mail：hongbai25@163.com。

文章編號1006－8147（2016）01-0031-03

中圖分類號R722.18

文獻標志碼A