劉鑫　辛瑞　劉魯英

【摘 要】目的：檢測(cè)胃癌組織中Kindlin-2與VEGF-C蛋白的表達(dá)，探討二者在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法：選取109例胃癌組織標(biāo)本為研究對(duì)象，采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)Kindlin-2與VEGF-C的表達(dá)。結(jié)果：Kindlin-2在54.1%的胃癌組織中表達(dá)，與腫瘤TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，并發(fā)現(xiàn)Kindlin-2表達(dá)與VEGF-C表達(dá)在胃癌組織中呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論：Kindlin-2和VEGF-C可能在胃癌細(xì)胞侵襲過(guò)程中協(xié)同發(fā)揮作用。

【關(guān)鍵詞】胃癌；Kindlin-2；VEGF-C；免疫組織化學(xué)染色

The expression and significance of Kindlin-2 and VEGF-C in gastric carcinoma

LIU Xin XIN Rui LIU Lu-ying

（Department of Pathology， Binzhou Medical University， Yantai Shandong 264003， China）

【Abstract】Objective：to detect the expression of Kindlin-2 and VEGF-C in gastric cancinoma and explore the role of the two proteins in the progression of gastric cancer. Methods： 109 cases of gastric carcinoma were selected as the research object. The expression of Kindlin-2 and VEGF-C were detected by immunohistochemical staining. Result： Kindlin-2 expressed in 54.1% of gastric cancer tissue， and it is closely related to the tumor TNM stage and lymph node metastasis。We also found that Kindlin-2 expression were positively correlated with the expression of VEGF-C in the tissue of gastric cancer（P<0.05）. Kindlin-2 and VEGF-C may have coordinated role in the procession of gastric cancer cell invasion.

【Key words】Gastric cancer； Kindlin-2； VEGF-C； Immunohistochemistry

胃癌起病隱匿，診斷時(shí)往往已經(jīng)是晚期，因此，5年生存率較低，是危害人類(lèi)健康的重要疾病。Kindlin-2屬于黏著斑蛋白（vinculin），在人類(lèi)乳腺癌、前列腺癌中發(fā)現(xiàn)Kindlin-2與腫瘤的侵襲有關(guān)[1-2]。VEGF-C是VEGF家族成員之一，因其能調(diào)節(jié)淋巴管的發(fā)育、參與腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移、促進(jìn)新生血管生成而備受關(guān)注。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)Kindlin-2與VEGF-C在胃癌組織中表達(dá)及其相關(guān)關(guān)系，探討Kindlin-2在胃癌侵襲等生物學(xué)行為中的作用及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

收集109例在我院接受胃癌根治手術(shù)并有完善病理資料的病例，其中，男性76例、女性33例，男女比例為2.3：1；年齡<60歲的58例，≥60歲的51例。根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行TNM分期，I期18例、II期20例、III期38例、IV期33例；所選擇的患者術(shù)前均未行任何形式的輔助治療。所有標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)，采用10%福爾馬林液固定，石蠟包埋切片備用。

1.2 主要試劑及方法

兔抗人Kindlin-2多克隆抗體購(gòu)自Abcam公司，兔抗人VEGF-C多克隆抗體購(gòu)自Zymed公司，EnVision免疫染色試劑盒購(gòu)自Dako公司。

切片常規(guī)脫蠟水化，封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，抗原修復(fù)，加入一抗工作液，加入二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、透明、封片。PBS取代一抗作空白對(duì)照。

1.3 結(jié)果判讀

細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃色細(xì)顆粒、棕黃色顆?；蜃睾稚诸w粒即判斷為陽(yáng)性表達(dá)。顯色強(qiáng)度以多數(shù)細(xì)胞呈現(xiàn)的染色特征為標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)著色（顏色）無(wú)、弱（淡黃）、中（棕黃）、強(qiáng)（棕褐）分別計(jì)分為0、1、2、3分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤5%、6%-25%、26%-50%、51%-75%、≥75%分別計(jì)分0、1、2、3、4分。免疫反應(yīng)評(píng)分=顯色強(qiáng)度×陽(yáng)性細(xì)胞百分率。判定陽(yáng)性結(jié)果：得分0～4分為低表達(dá)，5～12分為高表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS19.0數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，樣本率之間比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析進(jìn)行，P<0.05代表檢驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Kindlin-2蛋白在胃癌組織中的表達(dá)

Kindlin-2蛋白免疫組化顯色為黃色或棕黃色，彌漫分布于細(xì)胞質(zhì)中。Kindlin-2高表達(dá)者59例（54.1%）、低表達(dá)者50例（45.9%）。

2.2 VEGF-C蛋白在胃癌組織中的表達(dá)

VEGF-C蛋白免疫組化染色呈棕黃色或棕褐色，分布于胃癌細(xì)胞胞漿內(nèi)，腫瘤間質(zhì)中少量存在。109例胃癌標(biāo)本中，42例表達(dá)（38.5%）、67例不表達(dá)（61.5%）。

2.3 Kindlin-2在胃癌組織中表達(dá)的臨床意義及其與CTGF表達(dá)的相關(guān)性

Kindlin-2在胃癌組織中的表達(dá)隨著TNM分期的升高明顯增強(qiáng)（P=0.014），并且在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中胃癌組織表達(dá)Kindlin-2顯著強(qiáng)于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例（P=0.014）。Kindlin-2在胃癌組織中的表達(dá)與胃癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、Lauren分型、脈管癌栓和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等都沒(méi)有顯著相關(guān)性。見(jiàn)表1。

胃癌組織中Kindlin-2蛋白表達(dá)與CTGF蛋白表達(dá)顯著相關(guān)（P=0.004）。見(jiàn)表2。

表1 Kindlin-2蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理特征之間的關(guān)系

表2 Kindlin-2蛋白表達(dá)與VEGF-C表達(dá)之間的關(guān)系

3 討論

Kindlin-2是新近發(fā)現(xiàn)的黏著斑蛋白，通過(guò)與整合素β亞基胞質(zhì)尾區(qū)高親和力的結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，調(diào)控整合素活化與細(xì)胞骨架重排，參與機(jī)體多種重要的生理功能和病理過(guò)程。目前，Kindlin-2與臨床疾病的關(guān)系認(rèn)知較少，Kindlin-2異常不直接導(dǎo)致特定的遺傳性疾病可能與其具有胚胎致死性有關(guān)。但Kindlin-2在心血管系統(tǒng)的發(fā)育及新生血管的形成[2]及腫瘤的侵襲[3]過(guò)程中有著潛在且不可忽視的重要性。Kindlin-2在惡性黑色素瘤和胸膜肺癌轉(zhuǎn)移瘤中高表達(dá)并參與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移[4]。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)Kindlin-2蛋白在胃癌組織中的表達(dá)，Kindlin-2高表達(dá)者59例（54.1%），Kindlin-2在胃癌組織中的表達(dá)隨著TNM分期的升高明顯增強(qiáng)（P=0.014），并且在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中胃癌組織表達(dá)Kindlin-2顯著強(qiáng)于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例（P=0.014）。

VEGF-C屬于血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）家族[5]，Cao[6]等測(cè)定VEGF-C對(duì)血管和淋巴管的誘導(dǎo)情況，結(jié)果表明VEGF-C能誘導(dǎo)幾乎等量的血管和淋巴管生成。Kindlin-2是細(xì)胞間緊密連接的重要組成部分，作為一種信號(hào)銜接蛋白參與VEGF-C對(duì)血管通透性的調(diào)節(jié)作用。作用機(jī)制可能為：VEGF-C可以促進(jìn)Kindlin-2的酪氨酸磷酸化，加強(qiáng)腫瘤血管對(duì)大分子物質(zhì)的滲透作用。本研究發(fā)現(xiàn)胃癌中Kindlin-2的表達(dá)與VEGF-C呈正相關(guān)，表明Kindlin-2與VEGF-C相互作用，共同參與胃癌的發(fā)生發(fā)展。

目前，胃癌的臨床治療方式單一，生物治療現(xiàn)狀也不令人滿(mǎn)意，由于缺乏特異及高效的生物治療靶點(diǎn)，現(xiàn)有的臨床病理指標(biāo)不足以支持胃癌的個(gè)體化治療。高表達(dá)的Kindlin-2和VEGF-C可能與胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為相關(guān)。深入研究胃癌的侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程中可能涉及的分子機(jī)制將有助于我們發(fā)現(xiàn)胃癌轉(zhuǎn)移的診斷標(biāo)志物，對(duì)設(shè)計(jì)新的治療胃癌的方法和尋求治療靶點(diǎn)有重要的意義。

【參考文獻(xiàn)】

[1]Sin S，Bonin F， Petit V， et al. Role of the focal adhesion protein kindlin-1 in breast cancer growth and lung metastasis[J].J Natl Cancer Inst，2011，103（17）：1323-1337.

[2]Gong X， An Z， Wang Y， et al. Kindlin-2 controls sensitivity of prostate cancer cells to cisplatin-induced cell death[J].Cancer Lett，2010，299（1）：54-62.

[3]Shen Z， Ye Y， Dong L， et al. Kindlin-2：a noval adhesion protein related to tumor invasion， lymph node metastasis， and patient outcome in gastric cancer[J].Am J Surg，2012，203（2）：222-9.

[4]An Z， Dobra K， Lock J G， et al. Kindlin-2 is expressed in malignant mesothelioma and is requiret for tumor cell adhesion and migration[J].Int J Cancer，2010，127（9）：1999-2008.

[5]段澤星，謝立群，等.VEGF在腫瘤生長(zhǎng)和血管生成中的作用[J].世界華人消化雜志，2010，18（27）：2894-2900.

[6]Cao R， Eriksson A， Kubo H， Alitalo K， Cao Y， Thyberg J. Comparative evaluation of FGF-2， VEGF-A， and VEGF-C-induced angiogenesis， lymphangiogenesis， vascular fenestrations， and permeability[J].Circ Res，2004，94：664-670.

[責(zé)任編輯：王楠]