李雅伶　王建萍　李　云　丁雪梅　白世平　曾秋鳳

程傳民2　高慶軍2　柏　凡2*　張克英1*

(1.四川農業(yè)大學動物營養(yǎng)研究所，成都611130；2.農業(yè)部飼料質量監(jiān)督

檢驗測試中心(成都), 成都610041)

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我國西南地區(qū)蛋禽配合飼料中霉菌毒素的污染分布規(guī)律

李雅伶1王建萍1李云2丁雪梅1白世平1曾秋鳳1

程傳民2高慶軍2柏凡2*張克英1*

(1.四川農業(yè)大學動物營養(yǎng)研究所，成都611130；2.農業(yè)部飼料質量監(jiān)督

檢驗測試中心(成都), 成都610041)

摘要：本次研究旨在了解霉菌毒素在我國西南地區(qū)的污染分布規(guī)律。對西南地區(qū)(四川、重慶、貴州、廣西、云南)來自不同規(guī)模飼料廠的蛋禽(蛋雞、蛋小雞和蛋鴨)的95個配合飼料進行霉菌毒素[黃曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZON)、嘔吐毒素(DON)和伏馬毒素(FB)]含量檢測，檢測方法先用酶聯(lián)免疫吸附測定試驗(ELISA)法初篩，對含量超過國家限量值的80%的樣品運用高效液相色譜法復查。結果表明：1)AFB1、DON、ZON和FB的檢出率分別為83.16%、93.68%、94.74%和100.00%，AFB1和ZON的超標率均為3.16%，而DON和FB均無超標。不同省市之間蛋禽飼料產品中的AFB1、DON和ZON的平均含量差異極顯著(P<0.01)，其中AFB1含量最高的是重慶，為10.9 μg/kg，DON含量最高的是四川，為1.07 mg/kg。2)不同蛋禽飼料品種之間的4種霉菌毒素的含量差異均不顯著(P>0.05)。3)不同規(guī)模飼料廠中的蛋禽飼料樣品的AFB1含量差異顯著(P<0.05)，其中AFB1含量最高的是小規(guī)模飼料廠(年產量<5萬t)的飼料，為6.36 μg/kg。由此可見，我國西南地區(qū)的蛋禽配合飼料中AFB1、DON、ZON和FB的污染廣泛，不同地區(qū)和不同規(guī)模飼料廠蛋禽飼料間的霉菌毒素含量存在差異。

關鍵詞：蛋禽；配合飼料；霉菌毒素；西南地區(qū)；分布規(guī)律

霉菌毒素是不同產毒真菌經(jīng)過一段時間生長產生的多種化合物[1]，其性質穩(wěn)定，不易分解。據(jù)統(tǒng)計，全世界每年有25%的農作物遭到霉菌毒素的污染，造成了大量的人畜中毒死亡事件，經(jīng)濟損失達數(shù)千億美元[2]。飼料中常見的霉菌毒素主要包括黃曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZON)、嘔吐毒素(DON)和伏馬毒素(FB)等。近年來部分關于霉菌毒素的調查報告發(fā)現(xiàn)，我國部分地區(qū)的飼料原料及飼料產品中霉菌毒素的檢出率達100%，且96%的飼料及其原料受到2種及

2種以上霉菌毒素的污染[3]。而目前對于西南地區(qū)的不同蛋禽配合飼料產品中的霉菌毒素污染分布規(guī)律還未見相關的報道。本研究旨在了解西南地區(qū)不同省市蛋禽配合飼料產品中的霉菌毒素分布規(guī)律、不同品種蛋禽配合飼料中霉菌毒素的分布規(guī)律及不同規(guī)模飼料廠蛋禽配合飼料中的霉菌毒素分布規(guī)律，并幫助企業(yè)對霉菌毒素進行污染防護，保障養(yǎng)殖動物及其產品安全，提供一定的科學依據(jù)。

1材料與方法

1.1樣品采集

在2014年8—10月，從四川省、重慶市、云南省、貴州省和廣西省的不同規(guī)模飼料廠里采集蛋小雞、產蛋高峰期蛋雞和產蛋高峰期蛋鴨的配合飼料共計95個樣品。不同規(guī)模飼料廠包括：小規(guī)模飼料廠(年產量<5萬t)、中規(guī)模飼料廠(年產量5萬～10萬t)、大規(guī)模飼料廠(年產量>10萬t)。抽樣方法嚴格按照《飼料采樣》(GB/T 14699.1—2005)進行，每份樣品不少于1 000 g，粉碎后過20目篩，樣品在檢測前置于-20 ℃下密封保存。

1.2樣品分析

所有樣品檢測AFB1、ZON及DON含量，從中隨機選取21個樣品檢測FB含量。樣品檢測時統(tǒng)一采用ROMER公司的酶聯(lián)免疫吸附測定試驗(ELISA)試劑盒進行初篩檢測。由于ELISA不能準確定量[4]，因此初篩結果達到限量值80%以上的全部樣品，再用高效液相色譜法(HPLC)(Agilent，美國)采用免疫親和柱-高效液相色譜法進行檢測。

1.3判定標準

限量值的判定標準詳見表1，超過限量值判定為超標，表1中執(zhí)行依據(jù)為引用該標準的限量值，低于檢出限的為未檢出。

表1　蛋禽配合飼料中霉菌毒素的限量標準和儀器檢測方法

NY/T為行業(yè)標準，GB/T為國家標準。

NY/T was industry standard, and GB/T was national standard.

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計及處理

數(shù)據(jù)按所有飼料、不同飼料種類、不同省市、不同飼料企業(yè)規(guī)模分別用SPSS 17.0 一般線性模型的GLM程序進行方差分析，含量結果用“平均值±標準差”表示，多重比較用Duncan氏法，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2結果與分析

蛋禽配合飼料霉菌毒素檢測結果見表2，4種霉菌毒素均檢出，其中AFB1的檢出率最低，為83.16%，DON、ZON和FB的檢出率均在90%以上；超標率最高的是AFB1和ZON，均為3.16%，而DON和FB均無超標。變異范圍最大的為AFB1，其次為ZON。

2.1不同品種蛋禽配合飼料的霉菌毒素污染情況

由表3可知，蛋雞、蛋小雞和蛋鴨配合飼料的AFB1的檢出率分別為77.05%、85.71%和100.00%。蛋鴨飼料中AFB1超標率最高，為10%，蛋雞飼料中無AFB1超標樣品。蛋鴨飼料中AFB1的含量最高，達到6.43 μg/kg；AFB1含量最低的是蛋小雞飼料，為3.17 μg/kg，3種飼料中AFB1的含量間無顯著差異(P>0.05)。從DON來看，蛋禽配合飼料中的DON檢出率均在90%以上，其中蛋小雞飼料中DON的檢出率達到100.00%，但所有蛋禽飼料中均無DON超標。3種飼料之間的DON含量差異不顯著(P>0.05)。對于ZON，蛋雞、蛋小雞和蛋鴨飼料中ZON的檢出率均在92%～95%，蛋鴨和蛋雞飼料中ZON超標率分別為5%和3.28%，而蛋小雞飼料無超標。不同品種蛋禽飼料中ZON含量無顯著差異(P>0.05)。而對于FB，除蛋小雞飼料僅1個樣品外，蛋雞和蛋鴨飼料中FB檢出率均達到100.00%，但是超標率均為0，二者FB含量無顯著差異(P>0.05)。

表2　蛋禽飼料霉菌毒素污染檢出情況

平均值為所有樣品的平均值，未檢出的樣品含量按照0計算；檢出率=超過檢出限的樣品數(shù)/總樣品數(shù)；超標率=超過限量值的樣品數(shù)/總樣品數(shù)。

Average value was the average of all samples, the content of undetected samples was 0; detection rate=number of samples exceeding the limit of detection/total number of samples; over-limit rate=number of samples exceeding the limit value/total number of samples.

表3　不同品種蛋禽配合飼料中霉菌毒素污染檢出情況

同種毒素同行數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

Different letter superscripts in the same row of the same toxin mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2西南地區(qū)不同省市蛋禽配合飼料的霉菌毒素污染情況

如表4所示，蛋禽配合飼料中AFB1以重慶的檢出率(100.00%)和超標率(15.38%)最高，而云南、廣西和貴州的檢出率均高于四川，但均無超標樣品；四川的檢出率和超標率分別為75.00%和2.08%。重慶的AFB1平均含量極顯著高于其他4個地區(qū)(P<0.01)。而蛋禽配合飼料中四川和貴州的DON檢出率達到100.00%，但均未超標。四川飼料的DON含量最高，為1.07 mg/kg，極顯著高于廣西(P<0.01)，而其他地區(qū)飼料的DON含量差異均不顯著(P>0.05)。

表4　不同地區(qū)蛋禽配合飼料中AFB1和DON的污染檢出情況

由表5可知，貴州和云南飼料中ZON的檢出率達到100.00%，其他地區(qū)的檢出率均在80%以上。云南的超標率最高，為5.88%，其次是四川(4.17%)，其他地區(qū)均無超標樣品。貴州飼料中ZON的含量(0.20 mg/kg)最高，廣西飼料中的ZON含量最低，顯著低于四川、貴州和云南(P<0.05)，而其他地區(qū)之間差異不顯著(P>0.05)。從FB污染情況來看，除貴州外蛋禽配合飼料中FB檢出率均為100.00%，但超標率為0。從飼料中FB的含量來看，四川最高(1.11 mg/kg)，廣西最低(0.4 mg/kg)，各個地區(qū)之間差異不顯著(P>0.05)。

2.3不同規(guī)模飼料企業(yè)的蛋禽配合飼料中的霉菌毒素污染情況

由表6可知，大、中、小規(guī)模飼料廠的蛋禽配合飼料中AFB1檢出率均在80%以上，其中大規(guī)模飼料廠AFB1檢出率最低，且無超標；中規(guī)模飼料廠AFB1檢出率最高，但超標率低于小規(guī)模飼料廠；小規(guī)模飼料廠AFB1檢出率略高于大規(guī)模飼料廠，但超標率最高，為7.14%。從AFB1的平均值來看，總體趨勢是小規(guī)模飼料廠>中規(guī)模飼料廠>大規(guī)模飼料廠，其中小規(guī)模飼料廠與大規(guī)模飼料廠間差異顯著(P<0.05)。3種規(guī)模飼料廠飼料中蛋鴨飼料中AFB1的含量均最高，特別是中規(guī)模飼料廠。

由表7可知，3種規(guī)模飼料廠蛋禽飼料中DON的檢出率均在90%以上，但均未超標；各種規(guī)模飼料廠飼料中DON的含量差異不顯著(P>0.05)。小、大規(guī)模飼料廠飼料中蛋小雞飼料中DON含量均最高。

表5　不同地區(qū)蛋禽配合飼料中ZON和FB的污染檢出情況

表6　不同規(guī)模飼料廠的蛋禽配合飼料中AFB1的污染檢出情況

表7　不同規(guī)模飼料廠的蛋禽配合飼料中DON的污染檢出情況

由表8可知，中等規(guī)模飼料廠蛋禽飼料中ZON的檢出率達100.00%，而小、大規(guī)模飼料廠中ZON的檢出率分別是89.29%和95.65%。中等規(guī)模飼料廠飼料ZON超標率最高，為4.76%，大規(guī)模飼料廠飼料中ZON超標率最低，為2.17%。3種規(guī)模飼料廠飼料中ZON的含量之間均差異不顯著(P>0.05)。小規(guī)模飼料廠飼料中蛋鴨飼料中ZON的含量(0.24 mg/kg)最高。

由表9可知，各種規(guī)模飼料廠蛋禽飼料的FB檢出率均高達100.00%，但均未超標。中等規(guī)模飼料廠飼料中FB含量(1.03 mg/kg)最高，小規(guī)模飼料廠(0.6 mg/kg)最低，但3種規(guī)模飼料廠飼料中FB含量之間均差異不顯著(P>0.05)。

3討論

本次調查共檢測了來自西南5個省市的95個蛋禽配合飼料樣品，4種霉菌毒素的檢出率均較高，其中DON、ZON和FB的檢出率均在90%以上，而AFB1檢出率最低，也在80%以上。但僅AFB1和ZON超標，超標率均為3.16%。由此表明，不同種類的蛋禽飼料中霉菌毒素的含量不同，不同地區(qū)和不同規(guī)模飼料廠的飼料中霉菌毒素的含量也有差異。

3.1蛋禽飼料種類對霉菌毒素含量的影響

蛋雞、蛋小雞和蛋鴨飼料中AFB1、DON、ZON和FB的污染情況各不相同，從AFB1的污染情況來看，蛋雞、蛋小雞和蛋鴨配合飼料的AFB1的檢出率分別為77.05%、85.71%和100.00%。而張自強等[5]、敖志剛等[6]和王若軍等[7]報道，配合飼料中AFB1的檢出率均在90%以上。從AFB1的超標率來看，超標率最高的是蛋鴨配合飼料，其次是蛋小雞配合飼料，蛋雞飼料中無AFB1超標樣品。這可能是3種飼料AFB1的限量標準不同，與蛋雞配合飼料的限量標準(≤20 μg/kg)相比，蛋鴨配合飼料的限量標準(≤15 μg/kg)更嚴格，而蛋小雞(≤10 μg/kg)對AFB1的耐受力很低，因此對原料的選擇更嚴格，所以超標率最低。張自強等[5]報道家禽配合飼料中AFB1的超標率為7.78%，本研究結果與之一致。王若軍等[7]報道的配合飼料中AFB1的超標率為0，本研究結果與之不一致，可能是因為抽樣地區(qū)和飼料品種不同。張自強等[5]報道家禽配合飼料的AFB1的平均含量為9.49 μg/kg，王若軍等[7]報道全價飼料中AFB1的平均含量為8.27 μg/kg。本研究發(fā)現(xiàn)，西南地區(qū)飼料產品AFB1的平均含量為4.09 μg/kg，低于前人的報道，這可能與監(jiān)管部門加強了對飼料原料中AFB1的監(jiān)管力度有關。

表8　不同規(guī)模飼料廠的蛋禽配合飼料中ZON的污染檢出情況

蛋小雞、蛋鴨和蛋雞配合飼料的DON檢出率均高，但均未超標，三者含量無顯著差異。本次調查中發(fā)現(xiàn)蛋禽配合飼料產品中的DON平均含量明顯低于王金勇等[8]2013年調查結果，分析可能因為2012年爆發(fā)了小麥赤霉病有關。

李榮濤等[9]2004年對小麥和玉米中ZON研究發(fā)現(xiàn)，小麥和玉米中ZON的陽性檢出率均達到100.00%；程傳民等[10]2014年研究發(fā)現(xiàn)，我國不同種類的飼料產品中ZON的檢出率有很大差異。本次研究結果與之一致。本次研究結果發(fā)現(xiàn)，不同種類的蛋禽配合飼料中ZON的檢出率達到90%以上，其中蛋鴨和蛋雞飼料超標。各類蛋禽配合飼料的ZON含量是0.15～0.18 mg/kg，低于王金勇等[11]2013年調查結果，可能是因為飼料樣品的來源不同。黃廣明等[12]2010年統(tǒng)計了2008、2009和2010年全價飼料的ZON含量分別為0.14、0.22和0.16 mg/kg。本次研究結果與之基本一致。蔣惠嵐等[13]2011年用ELISA法對廣西地區(qū)的不同種類的配合飼料中的ZON進行檢測發(fā)現(xiàn)，禽配合飼料中ZON的平均含量為0.34 mg/kg，高于本次調查結果(0.17 mg/kg)，可能是因為檢測方法不同有關，ELISA檢測法的假陽性缺陷導致整體試驗結果較高。

蛋雞和蛋鴨配合飼料中FB的檢出率均為100%，但均未超標，平均含量為0.75 mg/kg。王金勇[14]2012年對全球飼料中霉菌毒素進行調查發(fā)現(xiàn)，全價飼料中FB的檢出率為64%，平均含量為0.86 mg/kg，和本次研究結果不一致，可能是因為飼料的來源和品種不同。

表9　不同規(guī)模飼料廠的蛋禽配合飼料中FB的污染檢出情況

3.2不同省市對蛋禽飼料中的霉菌毒素含量的影響

四川、重慶、貴州、云南和廣西地區(qū)氣候情況各不相同，因而不同地區(qū)的飼料中霉菌毒素的含量也各不相同。劉興玠等[15]報道，在我國17省的糧食中黃曲霉菌產毒菌株比例各不相同，因此產毒含量也各不相同，存在地區(qū)差異。張自強等[5]報道，我國11個省的飼料中AFB1分布具有地域差異。本次研究結果與前人報道一致。蛋禽配合飼料中AFB1以重慶的檢出率(100.00%)、超標率(15.38%)和含量最高，云南、廣西和貴州的檢出率均高于四川，但均無超標樣品；四川的檢出率和超標率分別為75.00%和2.08%。AFB1是倉儲性毒素，其產毒菌黃曲霉的生長、產毒與環(huán)境氣候條件密切相關，在一定范圍內表現(xiàn)為溫度越高、相對濕度越高，黃曲霉生長越旺盛[16]。重慶蛋禽配合飼料產品的AFB1含量和超標率較高的原因可能是重慶夏季溫度高，秋季多雨，空氣濕度大，更利于黃曲霉的生長。

Seyfort Ruegg 1981: David Seyfort Ruegg, The Literature of the Madhyamaka School of Philosophy in India, Wiesbaden: Otto Harrassowitz.

甄陽光等[17]2009年對全國11省市飼料原料和產品中DON的調查表明，北方地區(qū)的DON含量較高，存在地域差異。程傳民等[18]2013年調查小麥類飼料原料發(fā)現(xiàn)全國七大區(qū)域飼料中DON的污染情況也各不相同。本研究表明，四川蛋禽飼料產品中的DON含量極顯著高于廣西。DON是一種田間毒素，生長需要合適的溫度、濕度、氧氣和能量。當谷物的水分含量為22%、濕度為85%左右、溫度為20 ℃時，谷物即產生大量的DON[19]。和其他四省相比，四川地區(qū)的作物播種、生長、收貨時的溫度和濕度最適合DON的生長和產毒，因此四川的蛋禽配合飼料中DON污染最嚴重。

廣西蛋禽配合飼料ZON的檢出率和平均含量均最低，這可能與廣西的氣候有關，廣西秋季干燥少雨，不利于鐮刀菌的生長，而四川、重慶、云南、貴州全年降雨量偏多，因此蛋禽配合飼料中ZON的污染相對嚴重，這與雷元培等[20]的研究一致。程傳民等[10]對全國地區(qū)的飼料原料中ZON的調查發(fā)現(xiàn)，除了東北地區(qū)以外，其他地區(qū)的超標率均在10%左右。西南地區(qū)的蛋禽飼料產品ZON雖然檢出率較高，但是超標率僅為3.16%，這表明西南地區(qū)的飼料產品的ZON的污染遠低于全國飼料原料水平，可能是為了保證生產出合格的飼料產品，飼料企業(yè)對飼料原料進行了篩選。

FB廣泛存在于世界各地的玉米、小麥、高粱等農作物中，其含量的高低與氣候、種植及儲存條件有關[14]。何樹森等[21]研究表明，我國四川地區(qū)玉米中FB污染水平明顯高于其他地區(qū)。與之相似，本次研究發(fā)現(xiàn)四川省的蛋禽配合飼料中FB含量高于重慶、云南和廣西，這可能是由于四川地區(qū)濕度大、氣候溫和，有利于FB的產生。Ogunlade等[22]研究表明，飼料FB含量在15.2 mg/kg以下不影響蛋雞生長、產蛋能力及雞蛋的營養(yǎng)價值。本次調查表明蛋禽配合飼料中FB的平均含量為0.75 mg/kg，因此就本次的調查結果來看，蛋禽配合飼料中FB的含量在安全水平以下。

3.3不同規(guī)模飼料廠的蛋禽配合飼料間霉菌毒素差異分析

本次研究結果發(fā)現(xiàn)，除了不同規(guī)模飼料廠的蛋禽配合飼料中DON和FB污染情況差異不明顯外，中小規(guī)模飼料廠蛋禽配合飼料中AFB1和ZON的污染情況比大規(guī)模飼料廠的嚴重，這可能是因為大規(guī)模飼料廠的資金較充足，對飼料原料的選取和監(jiān)控比小規(guī)模飼料廠要嚴格，小規(guī)模飼料廠的資金缺乏，對原料和產品的監(jiān)控力度相對不足。

4結論

① 西南地區(qū)蛋禽配合飼料檢出霉菌毒素AFB1、ZON、DON和FB，檢出率分別為83.16%、94.74%、93.68%和100.00%，AFB1和ZON的超標率均為3.16%，而DON和FB未超標；平均含量分別是4.09 μg/kg、0.17 mg/kg、0.86 mg/kg和0.75 mg/kg。

② 蛋禽飼料中霉菌毒素含量隨著飼料種類、地區(qū)和飼料廠規(guī)模的不同而變化，其中蛋鴨飼料中AFB1的含量最高，蛋小雞飼料中DON含量最高；重慶飼料中AFB1含量最高，四川飼料中DON含量最高，貴州飼料中ZON含量最高；小規(guī)模飼料廠飼料中AFB1的含量最高，中規(guī)模飼料廠中FB含量最高，各規(guī)模飼料廠的DON和ZON含量接近。

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(責任編輯武海龍)

Mycotoxin Distribution of Layers Feed in Southwest China

LI Yaling1WANG Jianping1LI Yun2DING Xuemei1BAI Shiping1ZENG Qiufeng1CHENG Chuanmin2GAO Qingjun2BAI Fan2*ZHANG Keying1*

(1. Institute of Animal Nutrition, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China; 2. Feed Products Quality Monitoring Center of the Agricultural Ministry of China (Chengdu), Chengdu 610041, China)

Abstract:The objective of this survey aim to study the mycotoxins contamination of layers feed in southwest area of China. A total of 95 feed samples from different area (Sichuan, Chongqing, Guizhou, Guangxi and Yunnan) of southwest were obtained to determine the contents of aflatoxin B1 (AFB1), zearalenone (ZON), deoxynivalenol (DON) and fumonisin (FB). Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was initially used for determination. Then, some samples would be detected by high performance liquid chromatography (HPLC) if the mycotoxins content was beyond 80% of the national limited standard. The results showed as follows:1) the detection rates of AFB1, DON, ZON and FB in layer’s feeds were 83.16%, 93.68%, 94.74% and 100.00%, respectively. The over-limit ratio of AFB1 and ZON was 3.16%, respectively, while DON and FB were not observed to exceed the limits. The average content of AFB1, DON and ZON in layer’s feed of different province/city was significantly different (P<0.01), with the Chongqing had the highest content of AFB1 (10.9 μg/kg), Sichuan had the highest content of DON (1.07 mg/kg). 2) The average content of four mycotoxins had no significant difference in different feed type (P>0.05). 3) The content of AFB1 of layer’s feed was observed to be different in different production scale company (P<0.05), and the small-scale feed company (less than 50 000 t per year) had higher content of AFB1(6.36 μg/kg). It is concluded that in southwest of China, the contamination of AFB1, DON, ZON and FB are relative low in layer’s feed, but the contents of these four mycotoxins are different in different regions and different scale enterprises.[Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(1)：172-181]

Key words:layer; feed; mycotoxins; southwest region; distribution

*Corresponding authors: BAI Fan, professor, E-mail: baifan-111@163.com; ZHANG Keying, professor, E-mail: zkeying@sicau.edu.cn

中圖分類號：S816.33

文獻標識碼：A

文章編號：1006-267X(2016)01-0172-10

作者簡介：李雅伶(1990—)，女，安徽宿州人，碩士研究生，從事動物營養(yǎng)與飼料科學專業(yè)研究。E-mail: 1442118326@qq.com*通信作者：柏凡，研究員，碩士生導師，E-mail: baifan-111@163.com；張克英，教授，博士生導師，E-mail: zkeying@sicau.edu.cn

基金項目：農業(yè)部專項項目——飼料產品中霉菌毒素污染狀況摸底調查；科技部及四川省科技廳科技支撐項目(2014BAD13B04,2014NZ0043)

收稿日期：2015-08-07

doi：10.3969/j.issn.1006-267x.2016.01.023