李靜靜　高技科

摘 要：為準(zhǔn)確掌握2015年慶城縣秋季?？谔阋叻酪吖ぷ鞒尚В陀^評(píng)價(jià)防疫質(zhì)量，確保全縣養(yǎng)牛業(yè)健康、穩(wěn)定、持續(xù)發(fā)展，在慶城縣17個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)隨機(jī)采集部分牛血清，用間接血凝方法檢測?？谔阋呙庖呖贵w。結(jié)果表明，慶城縣秋季?？谔阋哒w免疫水平較好，但各鄉(xiāng)鎮(zhèn)散養(yǎng)牛免疫抗體水平不均衡，免疫效果差距明顯，仍存在發(fā)生流行口蹄疫疫情的隱患。通過分析個(gè)別鄉(xiāng)鎮(zhèn)免疫質(zhì)量不佳的原因，對(duì)提高?？谔阋呙庖咚酱胧┻M(jìn)行了探討，以期能為有效提高?？谔阋呙庖呖贵w水平提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：牛口蹄疫；間接血凝試驗(yàn)；免疫抗體水平；慶城縣

中圖分類號(hào) S855.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2016）07-109-03

Abstract：In order to accurately grasp the effectiveness of the autumn bovine foot-and-mouth disease prevention，evaluate the quality of immunization，and ensure the healthy，stable and sustainable development of cattle industry，some bovine serum were collected randomly in 17 townships of Qingcheng County，with indirect hemagglutination method for detecting bovine foot-and-mouth disease immune antibody.The results showed that the whole immune level of the cattle foot-and-mouth disease was better，but scattered cattle antibody level was not balanced，the gap between the immune effect was obvious，there still existed the epidemic of foot-and-mouth disease risks.By analyzing the causes of the poor quality of immunity in individual villages and towns，the measures to improve the level of immune bovine FMDV were discussed in order to provide some reference for the research of improve immunity the antibody level of foot-and-mouth disease in cattle.

Key words：Bovine foot-and-mouth disease；Indirect hemagglutination test；Immune antibody level；Qingcheng County

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的急性、熱性、高度接觸性傳染性疫病，其易感動(dòng)物多達(dá)70多種，主要以牛、豬、羊等偶蹄動(dòng)物為主，發(fā)病率和死亡率均非常高，經(jīng)濟(jì)損失巨大，是目前危害養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的主要疫病之一[1]。近年來通過貫徹實(shí)施預(yù)防為主的防制策略，?？谔阋叽竺娣e流行和暴發(fā)流行已經(jīng)得到了有效控制。慶城縣以春秋集中免疫和適時(shí)補(bǔ)針相結(jié)合，規(guī)模場按程序免疫等方法對(duì)健康成年牛每頭2mL肌注進(jìn)行免疫接種，達(dá)到預(yù)防為主，控制口蹄疫疫情發(fā)生的目的。接種疫苗為口蹄疫O型、亞洲I型二價(jià)滅活疫苗（生產(chǎn)廠家為中農(nóng)威特生物科技股份有限公司，生產(chǎn)批號(hào)為N150504J，2～8℃保存）。為掌握基層秋季集中免疫效果，慶城縣預(yù)防控制中心于2015年10月在慶城縣17個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)隨機(jī)采集部分牛血清，用間接血凝方法檢測牛口蹄疫抗體，旨在為今后防疫決策提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料來源 牛血清335份（其中散養(yǎng)戶170份，養(yǎng)殖場165份），隨機(jī)采集于慶城縣17個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的農(nóng)村散養(yǎng)戶和3個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場（其均用口蹄疫O型、亞洲I型二價(jià)滅活疫苗免疫。血清無膠凍、無溶血、血清經(jīng)離心吸取上層血清液備用。

1.1.2 診斷液 口蹄疫O型間接抗體檢測試劑盒（口蹄疫O型血凝抗原、口蹄疫O型陽性對(duì)照血清、口蹄疫O型陰性對(duì)照血清、稀釋液、封板膜），購自于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。生產(chǎn)批號(hào)：20150924201。

1.1.3 試驗(yàn)器材 96孔110°V型血凝板、單道移液器及槍頭、8道移液器及槍頭、離心機(jī)、微量振蕩器等。

1.2 方法 根據(jù)《口蹄疫診斷技術(shù)》（GB/T18935—2003），嚴(yán)格按照說明書操作，室溫靜置觀察結(jié)果。

1.2.1 加稀釋液 在96孔110V型血凝板上1～7排的1～10孔、第8排的1～4孔和5～7孔，加稀釋液50μL/孔。

1.2.2 稀釋待檢血清 取經(jīng)56℃水浴滅活30min滅活的待檢血清樣品50μL，分別加入反應(yīng)板1～6排的第一孔中，與稀釋液混勻后，吸取50μL，加于第2孔中，以此做2倍系列稀釋至第10孔，第10孔混勻后取出50μL棄去。

1.2.3 稀釋陽性對(duì)照血清 在血凝板的第7排第1孔加陽性血清50μL，2倍系列稀釋至第10孔，混勻后從該孔取出50μL丟棄。此時(shí)被檢血清和陽性血清的稀釋倍數(shù)依次為1∶2～1∶1 024。

1.2.4 稀釋陰性對(duì)照血清 在血凝板的第8排第1孔加陰性血清50μL，對(duì)倍稀釋至第4孔，混勻后從該孔取出50μL丟棄。此時(shí)陰性血清的稀釋倍數(shù)依次為1∶2、1∶4、1∶8、1∶16，第5～7孔為稀釋液對(duì)照，每孔加入50μL稀釋液。

1.2.5 加血凝抗原 血清稀釋孔和對(duì)照孔加血凝抗原（充分搖勻，瓶底應(yīng)無血球沉淀）25μL/孔。將反應(yīng)板置微型振蕩器上震蕩2～3min，直至血球分布均勻。封板膜封板，室溫下靜置2～3h，在對(duì)照孔合格的前提下，再觀察待檢血清各孔，記錄各孔凝集情況。

1.2.6 判定標(biāo)準(zhǔn) 將血凝板放在白紙上，陽性血清抗體效價(jià)≥1∶256、陰性血清≤1∶16、稀釋液對(duì)照孔無自凝現(xiàn)象時(shí)，試驗(yàn)成立。觀察待檢血清各孔，以呈現(xiàn)“++”血凝反應(yīng)的血清最高稀釋度作為該份血清的間接血凝抗體效價(jià)。接種?？谔阋呙庖咝r(jià)≥1∶256為免疫合格。

2 結(jié)果與分析

2.1 各鄉(xiāng)鎮(zhèn)?？谔阋呙庖呖贵w水平不均衡，免疫效果差距明顯 由表1可以看出，慶城縣整體牛口蹄疫免疫抗體水平較好，達(dá)到77.65%，高于農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%標(biāo)準(zhǔn)；驛馬、赤城、桐川和南莊4個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)免疫抗體合格率達(dá)到100%，馬嶺、玄馬、熊家廟3個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)免疫合格率達(dá)到90%以上，但太白梁、卅鋪、葛崾峴、蔡家廟4個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)抗體合格率未達(dá)到國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，而慶城鎮(zhèn)牛口蹄疫免疫水平只有30%的合格率。由此可以看出，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)之間?？谔阋呖贵w免疫水平不均衡，免疫效果差距明顯，抗體水平低的鄉(xiāng)鎮(zhèn)仍然存在發(fā)生流行牛口蹄疫疫情的風(fēng)險(xiǎn)。

2.2 規(guī)模養(yǎng)殖場存在安全隱患 從表2可以看出，2個(gè)養(yǎng)殖場免疫合格率達(dá)到國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)以上，麗園和慶賢養(yǎng)殖場達(dá)到100%和80%以上，而越達(dá)合格率僅僅只有40%，表明部分養(yǎng)殖場仍然存在發(fā)?？谔阋咭咔榈碾[患。

2.3 慶城縣?？谔阋邫z測抗體免疫效價(jià)分析 從表3可以看出，?？谔阋呖贵w效價(jià)≥1∶256的有176份，占82.39%，說明秋季集中?？谔阋呙庖咝Ч^好；抗體效價(jià)≤1∶64的有36份，占10.75%，1∶128的有23份，占6.87%。說明部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)免疫效果依然很差，需要進(jìn)一步采取補(bǔ)免等措施，提高免疫抗體水平，確保免疫效果。

3 討論與建議

3.1 討論 通過本次調(diào)查研究表明，慶城縣大部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)抗體免疫效果均較好，但仍存在個(gè)別鄉(xiāng)鎮(zhèn)免疫效果較差的情況，其免疫抗體效果與質(zhì)量需進(jìn)一步加強(qiáng)與提高。究其原因：（1）疫苗因素：疫苗運(yùn)輸、貯藏等不符合要求，造成疫苗失效，從而降低免疫質(zhì)量；（2）接種人員因素：集中免疫期間，防疫員少、養(yǎng)殖分散、工作任務(wù)大，免疫操作不規(guī)范，例如疫苗接種劑量、“打飛針”、注射部位不正確、注射部位未消毒等因素影響免疫質(zhì)量；（3）免疫程序不合理，未制定正確免疫程序，不進(jìn)行二次加強(qiáng)免疫等導(dǎo)致免疫效果差；（4）動(dòng)物因素：免疫時(shí)動(dòng)物本身不健康，有病或免疫力低下導(dǎo)致免疫不成功。

3.2 建議

3.2.1 堅(jiān)持集中免疫與適時(shí)補(bǔ)針相結(jié)合，切實(shí)提高免疫密度 慶城縣牛養(yǎng)殖方式目前仍以農(nóng)戶散養(yǎng)為主，必須提高散養(yǎng)牛群口蹄疫免疫密度與質(zhì)量，才能有效地控制該疫病的發(fā)生與流行，尤其是新補(bǔ)欄、免疫不合格和漏免牛，一定要落實(shí)村級(jí)防疫員“適時(shí)補(bǔ)針”政策。狠抓春秋兩防，及時(shí)掌握集中免疫進(jìn)展情況，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)要認(rèn)真填寫《動(dòng)物免疫進(jìn)度表》，每周星期四向市獸醫(yī)局上報(bào)一次免疫進(jìn)展情況，直至春秋防疫工作結(jié)束為止。同時(shí)，做到常年免疫、定期補(bǔ)針，必要時(shí)二次加強(qiáng)免疫，使免疫真正達(dá)到“村不漏戶，戶不漏畜，畜不漏針”。

3.2.2 全面規(guī)范免疫檔案管理，積極推行疫病可追溯制度 要認(rèn)真推行動(dòng)物標(biāo)識(shí)制度，建立健全免疫檔案，嚴(yán)格按照《慶陽市重大動(dòng)物疫病免疫檔案》的規(guī)范要求，認(rèn)真填寫免疫信息，切實(shí)做好免疫檔案的規(guī)范管理。作好養(yǎng)殖場戶和養(yǎng)殖小區(qū)的養(yǎng)殖檔案管理，指導(dǎo)畜禽養(yǎng)殖場戶全面、準(zhǔn)確地記錄養(yǎng)殖信息，努力實(shí)現(xiàn)“全程監(jiān)管、有據(jù)可查”，從源頭上保證牛及其產(chǎn)品質(zhì)量安全。

3.2.3 加強(qiáng)技術(shù)培訓(xùn)，加大投入力度 各鄉(xiāng)鎮(zhèn)在春季集中免疫開始前，必須對(duì)村級(jí)防疫員進(jìn)行崗前培訓(xùn)，采取集中培訓(xùn)和現(xiàn)場演示相結(jié)合的方法，就各類疫苗的稀釋比例、注射劑量、注射部位、保存要求、耳標(biāo)佩帶、檔案填寫、注意事項(xiàng)等方面進(jìn)行詳細(xì)的培訓(xùn)和演示，直到防疫員全部熟練掌握為止，以保證集中免疫實(shí)現(xiàn)高密度、高質(zhì)量。同時(shí)，加大對(duì)基層防疫工作的投入，增加財(cái)政預(yù)算，落實(shí)經(jīng)費(fèi)，完善鄉(xiāng)鎮(zhèn)、村級(jí)防疫冷鏈設(shè)備，使疫苗貯藏與運(yùn)輸都要按規(guī)定的要求進(jìn)行，保證疫苗質(zhì)量。

3.2.4 加強(qiáng)動(dòng)物疫情監(jiān)測和報(bào)告工作，及時(shí)掌握疫情動(dòng)態(tài) 堅(jiān)持日常監(jiān)測與應(yīng)急監(jiān)測相結(jié)合，全面監(jiān)測和定點(diǎn)監(jiān)測相結(jié)合的方法，進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)口蹄疫的監(jiān)測工作，加大對(duì)規(guī)模養(yǎng)殖戶、養(yǎng)殖小區(qū)、活畜交易市場、定點(diǎn)屠宰場等重點(diǎn)部位和區(qū)域的監(jiān)測頻次，客觀評(píng)價(jià)免疫效果，及時(shí)掌握牛流行動(dòng)態(tài)，及時(shí)補(bǔ)免和消除疫情隱患，并指導(dǎo)養(yǎng)殖戶制定切實(shí)有效的免疫程序[2]。

3.2.5 加強(qiáng)動(dòng)物檢疫工作，嚴(yán)格監(jiān)督執(zhí)法檢查 落實(shí)基層檢疫人員開展散養(yǎng)與規(guī)模場的產(chǎn)地檢疫工作，從源頭上遏制未經(jīng)免疫、免疫不合格的牛流入市場。對(duì)沒有執(zhí)行國家重大動(dòng)物強(qiáng)制免疫政策或免疫抗體水平檢測不達(dá)標(biāo)牛，要嚴(yán)格按照“不出證、不容許流通、不容許屠宰”的原則嚴(yán)把檢疫關(guān)口，促使牛養(yǎng)殖戶全面落實(shí)免疫，達(dá)到“以檢促防”的目的[3]。

參考文獻(xiàn)

[1]董志強(qiáng)，張志，李曉成，等.口蹄疫檢測技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國動(dòng)物檢疫雜志，2007，24（3）.

[2]王輝，劉偉，賈松濤，等.對(duì)動(dòng)物免疫抗體檢測工作的幾點(diǎn)建議[J].中國動(dòng)物檢疫雜志，2014，31（8），63-64.

[3]李常挺，牛金濤，彭群明，等.2009年隆安縣春防豬瘟抗體水平監(jiān)測[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，41（1），74-76.

（責(zé)編：張宏民）