凌彥博 梁艷 王小美 王蘭 張俊仙 陽(yáng)幼榮 白雪娟 陳實(shí)兵 劉軍 楊春瑋 羅華鋒 劉光陵 吳雪瓊

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·論著·

中藥復(fù)方牛貝消核提取物治療結(jié)核病相關(guān)靶標(biāo)的研究

凌彥博 梁艷 王小美 王蘭 張俊仙 陽(yáng)幼榮 白雪娟 陳實(shí)兵 劉軍 楊春瑋 羅華鋒 劉光陵 吳雪瓊

目的 研究中藥復(fù)方牛貝消核提取物治療結(jié)核病的相關(guān)靶標(biāo)，闡明其作用機(jī)制。方法 9只小鼠分為正常組、結(jié)核模型組和牛貝消核治療組，每組3只。結(jié)核模型組和牛貝消核治療組經(jīng)尾靜脈注射5×105CFU(菌落形成單位)的結(jié)核分枝桿菌H37Rv標(biāo)準(zhǔn)株的懸液感染7 d后，牛貝消核治療組用牛貝消核水提取物進(jìn)行灌胃。治療12周后，殺鼠采血至抗凝管，提取小鼠全血總RNA，反轉(zhuǎn)錄后與小鼠基因表達(dá)譜芯片雜交，應(yīng)用IPA(Ingenuity Pathway Analysis)數(shù)據(jù)庫(kù)分析、比較各組間的基因表達(dá)結(jié)果，以差異變化倍數(shù)≥2.0作為基因表達(dá)明顯上調(diào)或下調(diào)的判斷標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果 結(jié)核模型組和正常組基因表達(dá)譜比較共有差異表達(dá)基因5647條，其中2898條上調(diào)，2749條下調(diào)。結(jié)核模型組和牛貝消核治療組比較共有差異表達(dá)基因7051條，3454條基因上調(diào)，其中涉及多個(gè)免疫相關(guān)因子；3597條基因下調(diào)，c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)信號(hào)通路明顯抑制下調(diào)。結(jié)論 牛貝消核提取物具有明顯的免疫調(diào)節(jié)作用，具有下調(diào)JNK信號(hào)通路、抑制炎癥的作用。

中草藥； 結(jié)核； 藥理作用分子作用機(jī)制； 基因表達(dá)譜

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌(Mtb)引起的呼吸道傳染病。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)，全世界約有1/3的人口被Mtb感染，2013年全球新發(fā)結(jié)核病患者900萬(wàn)例，150萬(wàn)例死于結(jié)核病[1]。我國(guó)是世界22個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一，第五次全國(guó)結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查結(jié)果表明，我國(guó)現(xiàn)有結(jié)核病患者500萬(wàn)例，對(duì)一線抗結(jié)核藥物的耐藥率達(dá)36.8%，耐多藥率達(dá)6.8%。因此，結(jié)核病耐藥問(wèn)題是目前亟待解決的難點(diǎn)之一。

中醫(yī)藥是我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的精髓代表，中藥治療的最大優(yōu)勢(shì)是多成分、多靶點(diǎn)、多系統(tǒng)、低毒性地發(fā)揮綜合作用。結(jié)核病在中醫(yī)稱之為癆病，傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為該病的產(chǎn)生有內(nèi)外兩方面因素，外因?yàn)楦腥景A蟲，內(nèi)因?yàn)檎龤馓撊?、氣血不足、陰精耗損所致。由此可見(jiàn)，癆蟲是發(fā)病的因素，正氣虛弱是發(fā)病的基礎(chǔ)，體虛感染癆蟲是形成本病的關(guān)鍵[2]。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)針對(duì)結(jié)核病產(chǎn)生的內(nèi)外因進(jìn)行治療具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，“一則補(bǔ)其虛，復(fù)其真元；一則殺其蟲，以絕其根本”[3]。因此，中藥治療結(jié)核病具有其自身獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。

牛貝消核是結(jié)合長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐和結(jié)核病自身的發(fā)病特點(diǎn)，總結(jié)出的一個(gè)由川貝母、桔梗、白芨、牛蒡子、魚腥草、糯米六味藥配伍而成的民間經(jīng)驗(yàn)方，其中川貝母、白芨二藥相輔作為君藥，魚腥草、桔梗、牛蒡子三味俱為臣藥，以補(bǔ)脾胃、益肺氣的糯米為佐使藥。本方通過(guò)6 種中藥的合理配伍、相互作用，使其達(dá)到清熱解毒、軟堅(jiān)化結(jié)及滋陰潤(rùn)肺、止咳化痰、托舊生新、消腫止血、抗菌消炎的功效，臨床可用于Mtb感染引起的各型肺結(jié)核，尤其是耐多藥結(jié)核病和廣泛耐藥結(jié)核病。經(jīng)過(guò)臨床驗(yàn)證及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，本中藥復(fù)方具有抑制或殺滅Mtb、緩解化療藥物不良反應(yīng)、有效緩解結(jié)核中毒癥狀、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、降低耐藥結(jié)核病發(fā)生率的優(yōu)點(diǎn)，安全、無(wú)不良反應(yīng)[ 4-6]。因此，本研究采用中藥復(fù)方牛貝消核提取物治療小鼠結(jié)核模型后，檢測(cè)基因表達(dá)譜并觀察其變化，旨在尋找該藥物影響疾病發(fā)生和轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵信號(hào)通路和關(guān)鍵靶基因，以闡明其作用機(jī)制。

材料和方法

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與主要試劑：5～6周雌性BALB/c小鼠購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，體質(zhì)量20～22 g，無(wú)特定病原體(specific pathogen free，SPF)級(jí)。中藥牛貝消核水提取物由廣東奇方藥業(yè)有限公司制備?；虮磉_(dá)譜芯片購(gòu)自安捷倫公司(Agilent，USA)。

2.小鼠結(jié)核模型的制備：9只小鼠按照數(shù)字表法隨機(jī)分入下列3個(gè)實(shí)驗(yàn)組：(1)正常對(duì)照組：作為空白對(duì)照組，每天分別對(duì)各組小鼠采用0.5 ml蒸餾水進(jìn)行灌胃；(2)結(jié)核模型組：小鼠經(jīng)尾靜脈注射5×105CFU(菌落形成單位)的結(jié)核分枝桿菌H37Rv標(biāo)準(zhǔn)株。感染7 d后，每天分別對(duì)各組小鼠采用0.5 ml蒸餾水進(jìn)行灌胃；(3)牛貝消核治療組：小鼠經(jīng)尾靜脈注射5×105CFU的結(jié)核分枝桿菌H37Rv標(biāo)準(zhǔn)株，感染后7 d，將水提取物牛貝消核60 mg溶于10 ml滅菌蒸餾水中，每天分別對(duì)該組小鼠采用牛貝消核溶液0.5 ml進(jìn)行灌胃。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每周對(duì)小鼠稱重1次，6周后摘除眼球殺鼠采血，放在乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，混勻。

3.小鼠全血總RNA的提取和純化：采用RNA提取試劑盒(Qiagen公司，德國(guó))對(duì)小鼠全血進(jìn)行總RNA的提取和純化；RNA的質(zhì)量檢測(cè)使用NanoDrop ND-1000(Thermal公司，美國(guó))超微量紫外檢測(cè)儀，使RNA的A260/A280在1.80～2.10之間。

4.小鼠基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)：提純的總RNA在上?？党缮锛夹g(shù)有限公司進(jìn)行基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)。具體方法如下：反轉(zhuǎn)錄的cDNA并用Cy3熒光素標(biāo)記后，分別與4×44 K基因表達(dá)譜芯片在42 ℃條件下雜交16～20 h，將芯片放入安捷倫微陣列芯片掃描儀(Agilent Microarray Scanner)，讀取數(shù)據(jù)。

5.數(shù)據(jù)處理和分析：采集的數(shù)據(jù)采用基因組百科全書(KEGG數(shù)據(jù)庫(kù))和IPA(Ingenuity Pathway Analysis)數(shù)據(jù)庫(kù)(Ingenuity公司，美國(guó))進(jìn)行分析。以差異變化倍數(shù)≥2.0作為基因表達(dá)明顯上調(diào)或下調(diào)的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

結(jié) 果

一、差異表達(dá)的基因

結(jié)核模型組和正常組基因表達(dá)譜比較，共有差異表達(dá)基因5647條，其中2898條上調(diào)，2749條下調(diào)；結(jié)核模型組和牛貝消核治療組比較，共有差異表達(dá)基因7051條，其中3454條上調(diào)，3597條下調(diào)。差異倍數(shù)大的部分基因及其分子功能注釋見(jiàn)表1。

二、中藥治療前后差異表達(dá)基因的基因本體(GO)分析

與正常組比較，結(jié)核模型組小鼠表達(dá)上調(diào)的基因主要參與了下列過(guò)程：1278個(gè)上調(diào)基因參與了細(xì)胞過(guò)程的調(diào)節(jié)，1092個(gè)參與了代謝過(guò)程的調(diào)節(jié)，959個(gè)參與了初級(jí)代謝過(guò)程的調(diào)節(jié)，949個(gè)參與了細(xì)胞代謝過(guò)程，847個(gè)參與了生物調(diào)節(jié)，817個(gè)參與了大分子代謝過(guò)程，813個(gè)參與了生物學(xué)過(guò)程的調(diào)節(jié)，763個(gè)對(duì)細(xì)胞過(guò)程的調(diào)節(jié)，752個(gè)參與了大分子代謝過(guò)程，622個(gè)氮化合物代謝過(guò)程。

與正常組比較，結(jié)核模型組小鼠表達(dá)下調(diào)的基因主要參與了下列過(guò)程：1258個(gè)上調(diào)基因參與了細(xì)胞過(guò)程，940個(gè)參與了代謝過(guò)程，933個(gè)參與了生物調(diào)節(jié)，889個(gè)參與了生物過(guò)程的調(diào)節(jié)，839個(gè)參與了細(xì)胞過(guò)程的調(diào)節(jié)，795個(gè)參與了初代謝過(guò)程，773個(gè)參與了細(xì)胞代謝過(guò)程，871個(gè)對(duì)刺激物應(yīng)答，819個(gè)參與了大分子代謝過(guò)程，739個(gè)多細(xì)胞生物過(guò)程。

表1 牛貝消核治療后表達(dá)明顯上調(diào)的部分基因在結(jié)核模型組、牛貝消核治療組與正常組比較的結(jié)果及其分子功能注釋

表2 牛貝消核治療后表達(dá)明顯下調(diào)的部分基因在結(jié)核模型組、牛貝消核治療組與正常組比較的結(jié)果及其分子功能注釋

與結(jié)核模型組比較，牛貝消核治療組表達(dá)上調(diào)的基因主要參與了下列過(guò)程：1612個(gè)上調(diào)基因參與了細(xì)胞過(guò)程，1207個(gè)參與了代謝過(guò)程，1188個(gè)參與了生物調(diào)節(jié)，1134個(gè)參與了生物過(guò)程的調(diào)節(jié)，1055個(gè)參與了細(xì)胞過(guò)程的調(diào)節(jié)，1021個(gè)參與了一級(jí)代謝過(guò)程，985個(gè)參與了細(xì)胞代謝過(guò)程，871個(gè)對(duì)刺激物應(yīng)答，819個(gè)參與了大分子代謝過(guò)程，739個(gè)多細(xì)胞生物過(guò)程。

與結(jié)核模型組比較，牛貝消核提取物治療組表達(dá)下調(diào)的基因主要參與了下列過(guò)程：1421個(gè)下調(diào)基因參與了細(xì)胞過(guò)程，1163個(gè)參與了代謝過(guò)程，986個(gè)參與了一級(jí)代謝過(guò)程，974個(gè)參與了細(xì)胞代謝過(guò)程，927個(gè)參與了生物調(diào)節(jié)，888個(gè)參與了生物過(guò)程的調(diào)節(jié)，845個(gè)參與了細(xì)胞代謝過(guò)程，773個(gè)參與大分子代謝過(guò)程，695個(gè)參與了細(xì)胞大分子代謝過(guò)程，680個(gè)參與了應(yīng)激反應(yīng)。

三、信號(hào)通路的分析預(yù)測(cè)

應(yīng)用IPA數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)表達(dá)譜結(jié)果進(jìn)行信號(hào)通路分析預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，許多信號(hào)通路均受到影響，但結(jié)核模型組與正常組比較，c-jun氨基末端激酶(c-jun N-terminal kinase，JNK)通路明顯上調(diào)；而牛貝消核治療組與結(jié)核模型組相比，JNK通路明顯下調(diào)，JNK通路分析結(jié)果見(jiàn)圖1。

上圖為牛貝消核治療組與結(jié)核模型組比較，下圖為結(jié)核模型組與正常組比較，圖中深綠色代表大幅下調(diào)，淡綠色代表小幅下調(diào)，藍(lán)色代表預(yù)測(cè)可能下調(diào)，橙色代表大幅上調(diào)，粉色代表小幅上調(diào) 圖1 應(yīng)用IPA數(shù)據(jù)庫(kù)分析JNK通路基因差異表達(dá)結(jié)果

討 論

本研究通過(guò)測(cè)定中藥復(fù)方牛貝消核提取物治療后小鼠轉(zhuǎn)錄組學(xué)基因表達(dá)譜的變化，緊密結(jié)合中藥復(fù)方整體作用的特點(diǎn)，開展中藥功能靶點(diǎn)的研究，旨在發(fā)現(xiàn)和揭示對(duì)結(jié)核病治療和轉(zhuǎn)歸起關(guān)鍵作用的信號(hào)通路與關(guān)鍵基因靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，在整體層面闡釋中藥的作用機(jī)制，為方劑制劑的研究與應(yīng)用提供理論依據(jù)，為復(fù)方的設(shè)計(jì)與優(yōu)化及中西醫(yī)結(jié)合治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

本研究在小鼠Mtb感染后表達(dá)明顯上調(diào)和下調(diào)的部分基因，在牛貝消核提取物治療后發(fā)生了明顯的變化：(1)牛貝消核治療后IL-17、TNF、TNFAIP6、CXCL1、CXCL2和CXCL9的表達(dá)均明顯上調(diào)，抗結(jié)核感染的保護(hù)性免疫依賴于細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化，Th17細(xì)胞是一個(gè)分泌IL-17 的CD4+T細(xì)胞亞群，IL-17也可由CD8+T細(xì)胞、γδ T 細(xì)胞和NK T細(xì)胞等細(xì)胞產(chǎn)生，Th17誘導(dǎo)或促進(jìn)Th1細(xì)胞的抗結(jié)核免疫應(yīng)答，在宿主抗結(jié)核感染中發(fā)揮重要作用[7]；TNF-α 是由巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞或T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，與IFN-γ具有協(xié)同作用，激活被Mtb感染的巨噬細(xì)胞，促進(jìn)對(duì)胞內(nèi)病原菌的殺傷功能，募集巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞遷移至感染部位，促進(jìn)肉芽腫的形成，目前研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)用TNF-α抑制劑可能導(dǎo)致Mtb播散[8]；TNF-α誘導(dǎo)蛋白6(tumor necrosis factor alpha induced protein 6，Tnfaip6)是透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白家族的一個(gè)新成員，可誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子(TNF-α、IL-1)分泌，可能在炎癥發(fā)生期間參與細(xì)胞-細(xì)胞、細(xì)胞-基質(zhì)間的相互作用[9]。CXCL1 [Chemokine (C-X-C motif) ligand 1]、CXCL2和CXCL9均屬于CXC趨化因子家族的小分子細(xì)胞因子，CXCL1趨化因子是由巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和上皮細(xì)胞表達(dá)的，有細(xì)胞趨化作用；CXCL2是專門負(fù)責(zé)單核細(xì)胞募集和遷移的化學(xué)因子；CXCL9是T細(xì)胞趨化因子，都在結(jié)核肉芽腫的形成中發(fā)揮重要作用[10]；目前研究顯示，這些免疫基因下調(diào)可能與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)[11]。因此，本研究結(jié)果證明牛貝消核提取物能夠很好地調(diào)動(dòng)機(jī)體的抗結(jié)核細(xì)胞免疫。(2)呼吸道中固有免疫應(yīng)答的主要因子α防御素相關(guān)序列2(defensin, alpha, related sequence 2，Defa-rs2)表達(dá)明顯上調(diào)[12]；SPARC/骨粘連蛋白、CWCV和KAZAL樣域蛋白多糖1[sparc/osteonectin, cwcv and kazal-like domains proteoglycan 1，即睪丸蛋白聚糖1(SPOCK1)]表達(dá)明顯上調(diào)，激活JAK-STAT信號(hào)通路，誘導(dǎo)感染的巨噬細(xì)胞凋亡[13]；泛素連接酶PDZRN3(PDZ domain containing RING finger protein 3)表達(dá)上調(diào)，自噬作用增強(qiáng)[14]；GTP酶DNM1 (dynamin 1)表達(dá)明顯上調(diào)，促進(jìn)了內(nèi)呑作用[15]，這些都加強(qiáng)了牛貝消核的抗結(jié)核作用。(3)一個(gè)免疫球蛋白分子由2條輕鏈(L鏈)和2條重鏈(H鏈)通過(guò)二硫鍵連接而成，結(jié)核感染后抗體輕鏈和重鏈均增高，說(shuō)明抗體水平增高，Th2型免疫增強(qiáng)，這與目前研究的結(jié)核病免疫機(jī)制是一致的，結(jié)核病患者由Th1型向Th2型免疫轉(zhuǎn)化[16]。牛貝消核治療后抗體輕鏈和重鏈均明顯下降，說(shuō)明牛貝消核能在小鼠體內(nèi)激發(fā)Th1相關(guān)的免疫應(yīng)答，抑制Th2相關(guān)的免疫應(yīng)答，使Th2向Th1轉(zhuǎn)化，而發(fā)揮有效的治療作用。(4)感染后炎癥通路的調(diào)控因子如Foxp1(forkhead box P1)、Eif4g3(eukaryotic translation initiation factor 4 gamma, 3)和Retnlg表達(dá)明顯上調(diào)，調(diào)控促炎細(xì)胞因子的分泌，促進(jìn)炎癥反應(yīng)[17]；而中藥治療后這些因子表達(dá)明顯下調(diào)，可能減輕炎癥及炎癥損傷，控制了結(jié)核病的進(jìn)展。上述許多基因和蛋白與結(jié)核病的關(guān)系目前國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)研究報(bào)道，筆者首次發(fā)現(xiàn)結(jié)核感染后這些基因和蛋白參與了結(jié)核炎癥反應(yīng)。

c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路, 是絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)通路的一個(gè)分支，它在細(xì)胞周期、生殖、凋亡和細(xì)胞應(yīng)激等多種生理和病理過(guò)程中起重要作用。目前的研究已證明，當(dāng)細(xì)胞受各種各樣的刺激(如生長(zhǎng)因子、脂多糖、腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素-1等)發(fā)生應(yīng)激時(shí)可激活JNK表達(dá)特異性蛋白酶和細(xì)胞因子，而在慢性炎癥性疾病中發(fā)揮重要作用[18]；此外，JNK具有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的能力[19]。JNK信號(hào)通路功能失調(diào)可造成慢性炎癥性疾病[20]。本研究首次發(fā)現(xiàn)Mtb感染小鼠后，JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路明顯上調(diào)，提示JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能是結(jié)核細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的重要作用靶標(biāo)，它一方面促進(jìn)炎癥反應(yīng)；另一方面促進(jìn)小鼠巨噬細(xì)胞發(fā)生凋亡，殺死寄生于巨噬細(xì)胞內(nèi)的Mtb，從而阻止Mtb在體內(nèi)的播散[21]；但感染初期大量巨噬細(xì)胞凋亡可能不利于抗原提呈，而使機(jī)體難以誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答[22]。由此可見(jiàn)，JNK信號(hào)通路在結(jié)核病的發(fā)生、發(fā)展中也發(fā)揮了關(guān)鍵作用，通過(guò)對(duì)炎癥反應(yīng)的正負(fù)反饋調(diào)控作用，使炎癥反應(yīng)體系達(dá)到一個(gè)新的動(dòng)態(tài)平衡水平。

本研究應(yīng)用牛貝消核提取物治療感染Mtb的小鼠后，發(fā)現(xiàn)其JNK通路被明顯抑制，逆轉(zhuǎn)了Mtb感染導(dǎo)致的JNK通路上調(diào)，提示牛貝消核提取物作用于JNK信號(hào)通路并阻抑該通路的功能，減弱細(xì)胞對(duì)應(yīng)激抗原的應(yīng)答，抑制Mtb引起的炎癥反應(yīng)；但它也抑制了巨噬細(xì)胞的凋亡，可能導(dǎo)致Mtb在胞內(nèi)存活和繁殖[21]。因此，JNK通路的調(diào)控呈現(xiàn)復(fù)雜性和多面性。本研究試圖闡明JNK信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)及調(diào)節(jié)在結(jié)核炎癥反應(yīng)的動(dòng)態(tài)平衡中發(fā)揮重要作用，通過(guò)調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的異常也可能有益于結(jié)核病慢性炎癥的控制，可能成為結(jié)核病有效治療的新靶標(biāo)。

總之，牛貝消核提取物具有明顯的免疫調(diào)節(jié)作用，通過(guò)加強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬、抑菌作用，提高Th1型免疫，抑制Th2型免疫，下調(diào)JNK通路抑制炎癥反應(yīng)，發(fā)揮抗結(jié)核治療作用。本研究運(yùn)用轉(zhuǎn)錄組學(xué)的方法發(fā)現(xiàn)了中藥復(fù)方牛貝消核在治療結(jié)核病的可能的作用靶標(biāo)JNK通路，對(duì)未來(lái)研發(fā)針對(duì)該分子靶標(biāo)的抗結(jié)核新藥具有指導(dǎo)意義。

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(本文編輯：薛愛(ài)華)

The study on the targets of the antituberculosis effect of traditional Chinese medicine Niubeixiaohe extracts

LINGYan-bo*,LIANGYan,WANGXiao-mei,WANGLan,ZHANGJun-xian,YANGYou-rong,BAIXue-juan,CHENShi-bing,LIUJun,YANGChun-wei,LUOHua-feng,LIUGuang-ling,WUXue-qiong.

*ArmyTubercu-losisPreventionandControlKeyLaboratory,BeijingKeyLaboratoryofNewTechniquesofTuberculosisDiagnosisandTreatment,InstituteforTuberculosisResearch,The309thHospitalofPLA,Beijing100091,China

WUXue-qiong,Email:xueqiongwu@139.com

Objective To study the targets of the anti-tuberculosis effect of traditional Chinese medicine Niubeixiaohe extracts, and analyze its mechanism. Methods Nine mice were divided into three groups: Normal control group, TB model group and Nubeixiaohe treatment group, 3 mice each group.The mice in TB model group and Nubeixiaohe treatment group were injected via the tail vein with 5×105CFUs ofM.tuberculosis(Mtb) H37Rv. At 7 days after infection, the mice in Nubeixiaohe treatment group were administered with Niubeixiaohe extracts by gavage for 12 weeks. Mice were collected the bloods in anticoagulative tube. The total RNAs of mouse whole bloods were extracted, reversed transcription, and then hybridized with gene expression chips. The data were analyzed with IPA (Ingenuity Pathway Analysis) database to find the difference of gene expression between different groups. More than 2.0-fold of gene expression difference was considered as the criteria of significantly upregulation or downregulation. Results There were 5647 genes differentially expressed between TB model group and normal control group (2898 upregarded expression and 2749 downregarded expression). Of 7051 genes differentially expressed between TB model group and Nubeixiaohe treatment group, 3454 were up-regulated expression, in which more genes involve multiple immune-related factors; 3597 were down-regulated expression, in which the genes in c-Jun N-terminal kinase (JNK) signal pathway were significantly down-regulated in treatment group. Conclusion Niubeixiaohe extracts had immunomodulatory related effects, and had a role of anti-inflammation by inhibiting JNK pathway.

Drugs, Chinese Herbal； Tuberculosis; Molecular mechanisms of pharmacological action； Gene expression profiling

10.3969/j.issn.1000-6621.2016.01.006

北京市十病十藥研發(fā)項(xiàng)目(Z141100002214002)

100091 北京，解放軍第三〇九醫(yī)院全軍結(jié)核病研究所 全軍結(jié)核病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 結(jié)核病診療新技術(shù)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(凌彥博、梁艷、王小美、王蘭、張俊仙、陽(yáng)幼榮、白雪娟、陳實(shí)兵、劉光陵、吳雪瓊)；廣東奇方藥業(yè)有限公司(劉軍、楊春瑋、羅華鋒)

吳雪瓊，Email：xueqiongwu@139.com

2015-11-23)