楊柳 陳宇飛 王磊 張一

摘要：針對(duì)日益嚴(yán)重的中藥材摻假事件，對(duì)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）技術(shù)在中藥材摻假檢測(cè)方面的應(yīng)用進(jìn)行研究，旨在為中藥摻假檢測(cè)中LAMP技術(shù)更廣泛、更深入的應(yīng)用提供一定的幫助。

關(guān)鍵詞：LAMP；中藥材；摻假；檢測(cè)；應(yīng)用

中圖分類(lèi)號(hào)： R282.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A DOI編號(hào)： 10.14025/j.cnki.jlny.2016.09.053

“一物有謬，便性命及之”，藥材真?zhèn)尾粌H關(guān)乎治療效果，而且還關(guān)乎患者生命[1]。由于中藥材摻假事件頻發(fā)，藥材安全問(wèn)題日益嚴(yán)重[2]，而傳統(tǒng)中藥材摻假檢測(cè)方法，如性狀鑒別、分光光度法、色譜法等，已無(wú)法滿(mǎn)足檢測(cè)的要求。近20年間，國(guó)內(nèi)外學(xué)者一起致力于運(yùn)用生物技術(shù)對(duì)中藥進(jìn)行研究，尤其是分子標(biāo)記技術(shù)在中藥鑒定中的應(yīng)用是目前最令人鼓舞的進(jìn)展之一[3]。本文針對(duì)LAMP技術(shù)在中藥材摻假檢測(cè)方面的應(yīng)用進(jìn)行研究，旨在為L(zhǎng)AMP技術(shù)在中藥材摻假檢測(cè)中更好的應(yīng)用提供一定的幫助。

1 LAMP技術(shù)介紹

LAMP技術(shù)是Notomi等在2000年建立的一種新的體外擴(kuò)增特異DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)[4]，在65℃恒溫條件下幾十分鐘即可完成核酸擴(kuò)增。

2 LAMP技術(shù)在中藥材摻假檢測(cè)方面的應(yīng)用

2.1用于人參摻假檢測(cè)

人參在《神農(nóng)本草經(jīng)》中被列為上品，具有大補(bǔ)元?dú)?、?qiáng)心固脫、安神生津的功效，自古以來(lái)，價(jià)格較昂貴，因而出現(xiàn)了許多偽品[5]。明代李時(shí)珍對(duì)沙參、薺尼亂人參析之頗詳，足見(jiàn)人參偽品古亦有多種。

趙源等[6]以線(xiàn)粒體基因 nad1為靶基因設(shè)計(jì)特異性引物，建立了人參的LAMP檢測(cè)方法，能夠在1小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，靈敏度比常規(guī)PCR 高10倍，經(jīng)驗(yàn)證能夠區(qū)分人參及其近緣種，以及人參制品及其常見(jiàn)偽品。

2.2用于冬蟲(chóng)夏草摻假檢測(cè)

冬蟲(chóng)夏草一直被列為滋補(bǔ)品之首，并有“東方傳奇式珍寶”之美譽(yù)[7]。市場(chǎng)上常見(jiàn)的混淆品為有涼山蟲(chóng)草、蛹草、分枝蟲(chóng)草等。

李奎等[8]將包括冬蟲(chóng)夏草在內(nèi)的6種不同蟲(chóng)草進(jìn)行LAMP擴(kuò)增，建立了冬蟲(chóng)夏草的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增快速檢測(cè)方法。

2.3用于金銀花摻假檢測(cè)

山銀花等與金銀花的原植物是近緣種，性狀特征與金銀花相似，當(dāng)金銀花價(jià)格升高時(shí)，部分商家常以山銀花充當(dāng)金銀花進(jìn)行銷(xiāo)售，謀取利潤(rùn)[9]。

蔣超[10] 建立了快速、簡(jiǎn)便、現(xiàn)場(chǎng)化的金銀花分子鑒別方法，當(dāng)溫度為65℃時(shí)，能鑒別金銀花與其同時(shí)偽品，解決了金銀花分子鑒別中操作復(fù)雜，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)的問(wèn)題。

2.4 用于鉤吻摻假檢測(cè)

鉤吻是馬錢(qián)科植物葫蔓藤的全草，又名斷腸草、野葛、毒根、大茶藥等，由于有劇毒，民間一直以外用為主，忌內(nèi)服，多為搗碎或研磨后調(diào)敷患處，也可以煎水洗或煙熏，具有祛風(fēng)散寮、消腫止痛、攻毒殺蟲(chóng)的功能[11]。

余淑琳[12]等采用改良CTAB法提取鉤吻、金銀花和山銀花的總DNA，利用PCR反應(yīng)對(duì)psbA-trnH和trnL-trnF序列進(jìn)行擴(kuò)增，設(shè)計(jì)鉤吻LAMP引物，從而成功鑒別出鉤吻和金銀花類(lèi)藥材及其水提液。

3 LAMP技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)

在中藥材摻假檢測(cè)方面， LAMP技術(shù)具有較強(qiáng)的特異性、較高的靈敏度和較快的檢測(cè)速度。趙源等[6]建立的人參的LAMP檢測(cè)方法，能夠在60分鐘內(nèi)完成檢測(cè)。綜合各文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，可得出結(jié)論：LAMP技術(shù)用于中藥材鑒定領(lǐng)域的基本反應(yīng)可以在60～90 分鐘內(nèi)完成，如果加入環(huán)引物，則能使反應(yīng)時(shí)間縮短為30～45分鐘。李奎等[8]建立的冬蟲(chóng)夏草的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增快速檢測(cè)方法，LAMP最低檢出限達(dá)6 pg/mL。綜合各文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，可得出結(jié)論：與PCR鑒定方法相比，LAMP鑒定靈敏度通常是常規(guī)PCR的10～100倍。LAMP檢測(cè)不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備，檢測(cè)現(xiàn)場(chǎng)只需配一臺(tái)普通的水浴鍋，就可以完成中藥材的摻假檢測(cè)，對(duì)于農(nóng)村、基層非常適用。

4 結(jié)語(yǔ)

LAMP檢測(cè)技術(shù)適用于進(jìn)行中藥材摻假的實(shí)時(shí)定性檢測(cè)。相信隨著LAMP檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展和研究的深入，在未來(lái)，它必將在中藥材摻假檢測(cè)方面有更好的應(yīng)用，也必將推動(dòng)中藥材摻假檢測(cè)技術(shù)朝著更便捷、更廉價(jià)、更準(zhǔn)確的方向發(fā)展。

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