朱明丹 袁宏偉 魏聰聰 張少?gòu)?qiáng) 劉長(zhǎng)玉 杜武勛

摘要：代謝組學(xué)不同于以往只是采用單一指標(biāo)或少量幾個(gè)指標(biāo)研究某種病理和生理變化，而是通過(guò)對(duì)機(jī)體代謝的終端產(chǎn)物進(jìn)行綜合的多元化分析，從整體上展示了人體內(nèi)在的變化狀態(tài)和趨勢(shì)。中醫(yī)理論最重要的就是“整體觀”、“動(dòng)態(tài)觀”、“辨證觀”，這與現(xiàn)代代謝組學(xué)的研究思路不謀而合。代謝組學(xué)為中醫(yī)研究提供薪新的技術(shù)平臺(tái)，目前，謝組學(xué)在中醫(yī)治療冠心病疾病的研究領(lǐng)域中已經(jīng)取得了一些進(jìn)展。

關(guān)鍵詞：冠心??；中醫(yī)證候?qū)嵸|(zhì)；代謝組學(xué)；綜述

中圖分類(lèi)號(hào)：R541.4文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2016）05-0067-03

冠心病是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的疾病之一，近年來(lái)，其發(fā)病率、病死率呈逐年上升趨勢(shì)。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，僅于2008年由冠心病導(dǎo)致的死亡人數(shù)占心血管疾病總死亡人數(shù)的42.2%。因此冠心病的預(yù)防和治療是降低心血管疾病發(fā)生和死亡率的重要手段和途徑。自東漢名醫(yī)張仲景在《金匱要略》中提出“胸痹心痛”病“陽(yáng)微陰弦”的本虛標(biāo)實(shí)病機(jī)以來(lái)，對(duì)心肌梗死恢復(fù)期氣虛血瘀證的辨證論治和證候?qū)嵸|(zhì)研究一直是中醫(yī)藥防治研究的焦點(diǎn)，人們希望通過(guò)證候物質(zhì)基礎(chǔ)的尋找，找到證候的特異性指標(biāo)，建立證候?qū)嶒?yàn)診斷客觀性金指標(biāo)，從而實(shí)現(xiàn)證候的微觀辨證依據(jù)。代謝組學(xué)是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分，具有整體、動(dòng)態(tài)、綜合與分析的特點(diǎn)，代謝組學(xué)拋開(kāi)體內(nèi)紛繁復(fù)雜的生化分子相互作用和網(wǎng)絡(luò)式代謝過(guò)程變化，從代謝網(wǎng)絡(luò)終端表象的整體角度反映生物體的功能水平，彌補(bǔ)了以往采用單一指標(biāo)或少數(shù)幾個(gè)指標(biāo)研究某種病理和生理變化的不足[1]。從辨證思維模式來(lái)說(shuō)與中醫(yī)學(xué)的系統(tǒng)觀、整體觀相近，因此，代謝組學(xué)技術(shù)為中醫(yī)證候研究提供嶄新的技術(shù)平臺(tái)。中國(guó)學(xué)者對(duì)代謝組學(xué)研究也表現(xiàn)出越來(lái)越大的熱情[2]。文章就冠心病證候?qū)嵸|(zhì)代謝組學(xué)研究綜述如下。

1臨床研究

代謝組學(xué)從1999年Nicholson提出概念，目前已逐步成熟并滲透到醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的各個(gè)層面[3～6]。目前國(guó)內(nèi)已進(jìn)行了人冠心病中醫(yī)辨證分型、慢性胃炎濕熱蘊(yùn)脾證、大鼠肝郁脾虛證、大鼠氣虛血瘀證的代謝組學(xué)研究，分析出某些特異性的代謝產(chǎn)物[7～8]，證型據(jù)此可被較好地區(qū)分，并通過(guò)證型相關(guān)生物標(biāo)記物群的分析初步揭示了相應(yīng)證型的科學(xué)本質(zhì)，證明了代謝組學(xué)研究手段在中醫(yī)證本質(zhì)研究中的可行性。陳閩軍等[9]采用GC和（或）MS技術(shù)，發(fā)現(xiàn)腎陽(yáng)虛模型動(dòng)物的代謝網(wǎng)絡(luò)明顯偏離正常組動(dòng)物，而用溫陽(yáng)中藥干預(yù)后，模型動(dòng)物的代謝譜回歸至正常范圍，呈現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)修復(fù)的效果。魏星[10]采用氣相色譜（GC）-質(zhì)譜（MS）聯(lián)用技術(shù)尋找冠心病血瘀證患者內(nèi)源性代謝分子標(biāo)記物。結(jié)果顯示健康對(duì)照組與冠心病患者血漿代謝物完全分離，對(duì)二者分離貢獻(xiàn)最大是L-纈氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-絲氨酸，且含量較健康對(duì)照組明顯降低；血瘀證與非血瘀證之間有明顯分離趨勢(shì)，44種物質(zhì)對(duì)分類(lèi)有顯著影響。證明血漿GC-MS代謝圖譜能有效的從健康人中區(qū)分出冠心病患者；從冠心病患者中區(qū)分出血瘀證患者，這些含量存在差異和對(duì)分類(lèi)有貢獻(xiàn)的物質(zhì)可能是冠心病血瘀證診斷和辨證的潛在代謝標(biāo)記物和客觀指標(biāo)。史琦等[11]對(duì)45例病患者及15例正常人的血裝樣本進(jìn)行核磁共振檢測(cè)，對(duì)其血裝中的內(nèi)源性小分子及大分子代謝產(chǎn)物進(jìn)行全面鑒定。結(jié)果檢測(cè)到冠心病患者和正常對(duì)照組血漿內(nèi)源性代謝成分39種。特征性代謝物篩選結(jié)果顯示血瘀證的特征性代謝產(chǎn)物包括纈氨酸和丙酮。證明冠心病患者血瘀證的異常代謝過(guò)程主要包括了氨基酸代謝、脂質(zhì)代謝；篩選出的2種代謝生物標(biāo)志物基本上實(shí)現(xiàn)了對(duì)冠心病血瘀證的有效識(shí)別。魏巖等[12]對(duì)10例冠心病心絞痛先天伏寒兼心血瘀阻證、10例冠心病心絞痛非先天伏寒兼心血瘀阻證患者的血清樣本進(jìn)行氫核磁共振檢測(cè)。通過(guò)偏最小二乘法判別分析方法研究2組患者之間血清代謝產(chǎn)物譜的差異。結(jié)果顯示冠心病心絞痛先天伏寒兼心血瘀阻證、非先天伏寒兼心血瘀阻證患者的血清代謝物可以被分開(kāi)，2組存在明顯差異的代謝產(chǎn)物：丙氨酸、低密度脂蛋白/極低密度脂蛋白、脂類(lèi)化合物、谷氨酸、谷氨酰胺、α-葡萄糖、高密度脂蛋白。證明利用代謝組學(xué)方法能區(qū)分冠心病心絞痛先天伏寒兼心血瘀阻證和非先天伏寒兼心血瘀阻證患者的血清氫核磁共振（1H-NMR）代謝譜，能確定先天伏寒證與非先天伏寒證之間存在能量代謝、糖代謝、脂代謝、氨基酸代謝方面的異常。張開(kāi)泰等[13]運(yùn)用1H-NMR技術(shù)，檢測(cè)健康對(duì)照組和冠心病心絞痛心血瘀阻證患者（冠心病組）新血府逐瘀湯治療前后血漿小分子代謝產(chǎn)物的水平。2組血漿代謝產(chǎn)物的變化分析采用主成分分析法（PCA），差異性分析采用單因素方差分析。結(jié)果顯示冠心病組治療前與治療后及健康對(duì)照組的代謝產(chǎn)物具有明顯差異。冠心病組患者治療前血漿乳酸、組氨酸、丙氨酸、葡萄糖、極低密度脂蛋白的含量明顯高于健康對(duì)照組、冠心病組治療后患者，而亮氨酸、蘇氨酸、檸檬酸的含量明顯降低；健康對(duì)照組與冠心病組治療后患者之間代謝產(chǎn)物差異無(wú)顯著性（P>0.05）。結(jié)論新血府逐瘀湯可能通過(guò)調(diào)整糖類(lèi)、脂肪、氨基酸等物質(zhì)的代謝，使人體趨向于平衡，從而發(fā)揮其整體治療作用。華何與等[14]對(duì)12例不穩(wěn)定型心絞痛痰濁痹阻證患者和12例不穩(wěn)定型心絞痛氣虛血瘀證患者的血漿樣本進(jìn)行氫核磁共振檢測(cè)。通過(guò)偏最小二乘判別分析（PLS-DA）方法研究不穩(wěn)定型心絞痛痰濁痹阻證患者與氣虛血瘀證患者之間血漿代謝產(chǎn)物譜及的差異。各組血漿核磁共振氫譜的PCA結(jié)果顯示，不穩(wěn)定型心絞痛證痰濁痹阻患者[JP2]與不穩(wěn)定型心絞痛氣虛血瘀患者能夠被區(qū)分，2組血漿樣本之間的代謝物含量存在明顯差異。不穩(wěn)定型心絞痛痰濁痹阻證組血漿中乳酸、葡萄糖、半乳糖、N-乙酰糖蛋白、低密度脂蛋白、脂類(lèi)化合物、酮體、天門(mén)冬氨酸、谷氨酞胺、酪氨酸、脯氨酸的含量高于氣虛血瘀證組，而檸檬酸、高密度脂蛋白、不飽和脂肪酸、氧化三甲胺的含量低于氣虛血瘀證組。血漿代謝物變化能在一定程度上區(qū)分冠心病不穩(wěn)定型心絞痛的這兩種中醫(yī)證型。王娟等[15]收集冠心病不穩(wěn)定型心絞痛血瘀證患者和健康志愿者的一般資料和尿液樣品，采用磁共振（NMR）和模式識(shí)別技術(shù)對(duì)磁共振氫譜進(jìn)行分析，對(duì)譜圖去水峰后采用0.01化學(xué)位移分段積分和歸一化處理。所得數(shù)據(jù)輸入SIMCA-P軟件，采用偏最小二乘-判別分析法對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果顯示冠心病不穩(wěn)定心絞痛血瘀證患者尿液中脯氨酸、丙氨酸、異亮氨酸、葡萄糖、纈氨酸、組氨酸、馬尿酸等物質(zhì)的含量升高；檸檬酸、肌酸酐、?；撬岬任镔|(zhì)的含量下降。結(jié)合PLS-DA對(duì)尿液樣品的分析結(jié)果顯示冠心病患者與健康人在代謝組學(xué)方面存在差異，且化合物分布在性別方面也有差異。研究表明尿液樣品中檸檬酸、脯氨酸、異亮氨酸、?；撬岬却x物的改變構(gòu)成了冠心病不穩(wěn)定性心絞痛血瘀證患者的代謝組學(xué)特征，從而為疾病的診斷和治療以及中醫(yī)證候研究提供了新思路和新方法。張紅栓等[16]對(duì)12例冠心病心絞痛痰濁證患者和12例冠心病心絞痛血瘀證患者的尿液樣本進(jìn)行氫核磁共振檢測(cè)。通過(guò)偏最小二乘法判別分析方法研究冠心病心絞痛痰濁證患者與血瘀證患者之間尿液代謝產(chǎn)物譜的差異。2組尿液核磁共振氫譜的PLS-DA結(jié)果顯示，冠心病心絞痛痰濁證患者與冠心病心絞痛血瘀證患者能夠被區(qū)分，2組尿液樣本之間的代謝物含量存在明顯差異。冠心病心絞痛痰濁證組尿液中檸檬酸、A-酮戊二酸、順式-烏頭酸、葡萄糖、3-羥基丁酸、丙酮、酪氨酸、肌酐、氧化三甲胺、二甲胺、馬尿酸的含量高于血瘀證組，而膽汁酸、組氨酸的含量低于血瘀證組。因此，2組尿液樣本的1H-NMR代謝譜存在差異，能從代謝組學(xué)分析中找出特異的標(biāo)志性代謝產(chǎn)物。尿液代謝物變化能在一定程度上區(qū)分冠心病心絞痛的不同中醫(yī)證型。魏巖等[17]利用核磁共振技術(shù)開(kāi)展冠心病心絞痛先天伏寒兼心血瘀阻證患者血液的代謝組學(xué)研究。方法：對(duì)10例冠心病心絞痛先天伏寒兼心血瘀阻證，10例冠心病心絞痛非先天伏寒兼心血瘀阻證患者的血清樣本進(jìn)行氫核磁共振檢測(cè)。通過(guò)偏最小二乘法判別分析方法研究2組患者之間血清代謝產(chǎn)物譜的差異。結(jié)果：冠心病心絞痛先天伏寒兼心血瘀阻證、非先天伏寒兼心血瘀阻證患者的血清代謝物可以被分開(kāi)，2組存在明顯差異的代謝產(chǎn)物：丙氨酸、低密度脂蛋白/極低密度脂蛋白、脂類(lèi)化合物、谷氨酸、谷氨酰胺、α-葡萄糖、高密度脂蛋白。結(jié)論：利用代謝組學(xué)方法能區(qū)分冠心病心絞痛先天伏寒兼心血瘀阻證和非先天伏寒兼心血瘀阻證患者的血清1H-NMR代謝譜，能確定先天伏寒證與非先天伏寒證之間存在能量代謝、糖代謝、脂代謝、氨基酸代謝方面的異常。[JP]

2小結(jié)

應(yīng)用代謝組學(xué)開(kāi)展證本質(zhì)的研究主要分為動(dòng)物模型和臨床兩方面，諸多學(xué)者嘗試中醫(yī)證動(dòng)物模型的建立與評(píng)價(jià)研究，但目前對(duì)于中醫(yī)證動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)而言尚缺乏公認(rèn)的技術(shù)方法與指標(biāo)體系[18]。因此，以臨床患者為研究對(duì)象，探討氣虛[FL）][HJ1.85mm][SD1，1][FQ（27*2/3。175mm，X，DY-W][SQ+1mm][CD=175mm]血瘀證潛在生物標(biāo)志物，將是確保中醫(yī)證型研究準(zhǔn)確性的基礎(chǔ)，較動(dòng)物模型研究更加貼近實(shí)際。

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