占少華

摘要：目的 探討覆盆子中椴樹(shù)苷和山奈酚含量測(cè)定方法及效果。方法 采用兩種不同的藥物含量提取方法對(duì)覆盆子中椴樹(shù)苷和山奈酚含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果 不同提取方法覆盆子椴樹(shù)苷和山奈酚含量差異明顯。結(jié)論 實(shí)驗(yàn)結(jié)果為建立覆盆子藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考。

關(guān)鍵詞：覆盆子；高效液相色譜法；椴樹(shù)苷；山奈酚；測(cè)定方法

為了保證藥物臨床使用的安全性，完善藥典相關(guān)空缺，本文對(duì)覆盆子中進(jìn)一步完善藥典，保證臨床用藥安全有效，對(duì)覆盆子中椴樹(shù)苷和山奈酚含量進(jìn)行測(cè)定，建立高效液相色譜法測(cè)定覆盆子中椴樹(shù)苷和山萘酚含量方法，報(bào)告如下。

1 儀器與材料

1.1實(shí)驗(yàn)儀器 本次研究中中所使用的儀器與試劑及廠(chǎng)家（見(jiàn)表1）。

1.2材料 覆盆子：江西德興；對(duì)照品：椴樹(shù)苷對(duì)照品（上海永恒生物科技有限公司）；山奈酚對(duì)照品（上海永恒生物科技有限公司）。

1.3方法

1.3.1供試品溶液制備 精確稱(chēng)取定量覆盆子，采用粉碎機(jī)粉碎成細(xì)粉，并過(guò)60目篩。同時(shí)，稱(chēng)取精密稱(chēng)定1.5g，置于圓底燒瓶中，精密加入已配制好的80%的甲醇30ml，回流提取1h。放冷后稱(chēng)定質(zhì)量，采用濃度為80%的甲醇補(bǔ)充減少質(zhì)量，混合均勻、濾過(guò)。

1.3.2對(duì)照品溶液的制備 椴樹(shù)苷和山奈酚對(duì)照溶液的制備：精密稱(chēng)取椴樹(shù)苷對(duì)照品9.98mg和山奈酚對(duì)照品11.84mg置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得每1ml含椴樹(shù)苷0.3992mg的對(duì)照品溶液。

1.3.3 HPLC測(cè)定操作 前期準(zhǔn)備：開(kāi)啟高效液相色譜儀后，排氣，排氣完成后，關(guān)上排氣閥，先用純甲醇沖洗色譜柱再用流動(dòng)相沖洗色譜柱，待柱子平衡后開(kāi)始進(jìn)樣；進(jìn)樣測(cè)定：逐一精密吸取對(duì)照品溶液及不同提取方案所得到的供試品溶液50μl（定量環(huán)20μl），注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖[1]。

1.4色譜條件的選擇

1.4.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 將上述獲得溶液等進(jìn)行全波長(zhǎng)圖譜掃描，確定最大吸收波長(zhǎng)。本次研究中，進(jìn)行三次全波長(zhǎng)掃描，且最大波長(zhǎng)為316nm，最大吸收值為2.8（見(jiàn)表2）。

1.4.2色譜流動(dòng)相比例的選擇 采用流動(dòng)相甲醇-0.1%的磷酸水比例為55：45、52：48、50：50按進(jìn)行高效液相檢測(cè)，結(jié)果如下（見(jiàn)圖1）：

由此看出：當(dāng)甲醇濃度為0.1%的磷酸水=55：45時(shí)，分離效果不好，適當(dāng)調(diào)低甲醇的比例，保留時(shí)間延長(zhǎng)，分離度增大；當(dāng)甲醇：0.1%的磷酸水=52：48時(shí)分離效果較好，再減小甲醇比例，分離效果變化不大，但保留時(shí)間延長(zhǎng)較大。因此，選用甲醇：0.1%的磷酸水=52：48作為流動(dòng)相。

1.4.3色譜條件的確定 覆盆子的HPLC含量測(cè)定條件為：高效液相色譜儀（Agilent1260，μV檢測(cè)器）；色譜柱（C18，5μm，200×4.6mm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%的磷酸水=52：48；檢測(cè)波長(zhǎng)：366nm；柱溫：25℃；流速1ml/min。

1.5提取工藝的考察

1.5.1提取溶媒的考察 精密稱(chēng)取覆盆子粉末（過(guò)60目篩）1.5g2份，置錐形瓶中，分別準(zhǔn)確加入80%甲醇25ml、80%乙醇25ml，稱(chēng)重，回流提取1h，取出，放至室溫后，再稱(chēng)定重量，用所用的溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾。取續(xù)濾液用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，制得供試品溶液，吸取20μl測(cè)定峰面積[2]。見(jiàn)圖2。

由此看出：乙醇的回流提取效果不如甲醇回流提取效果好，故采用甲醇作為提取溶劑。

由上圖可以看出用甲醇回流方法提取的峰面積比超聲方法大，故選用回流提取方法。

1.6含量測(cè)定 標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定：取混合標(biāo)準(zhǔn)品椴樹(shù)苷（0.11976mg/ml）山奈酚（0.02368mg/ml）進(jìn)行峰面積的測(cè)定。見(jiàn)圖3。

平均峰面積分別為椴樹(shù)苷2388.4，山奈酚2188.2。

樣品測(cè)定：取德興覆盆子粉末，過(guò)60目篩。取約1.5g，精密稱(chēng)定。置于圓底燒瓶中，精密加入已配制好的80%的甲醇30ml，稱(chēng)定質(zhì)量，回流提取1h。放冷后稱(chēng)定質(zhì)量，用80%的甲醇補(bǔ)充減少的質(zhì)量，混勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品的溶液。見(jiàn)圖4。

由此看出：平均峰面積分別為椴樹(shù)苷493.8，山奈酚141.5。得出：德興覆盆子中椴樹(shù)苷和山奈酚的含量分別為0.4933mg/g，0.0302mg/g。

3 討論

本次研究中，采用甲醇-0.1%的磷酸水（55：45）時(shí)，分離度并不是很好，所以嘗試減小甲醇的比例，發(fā)現(xiàn)當(dāng)甲醇-0.1%的磷酸水（52：48）時(shí)，椴樹(shù)苷和山奈酚的分離度都較好，故選用甲醇-0.1%的磷酸水（52：48）作為流動(dòng)相。通過(guò)全波長(zhǎng)掃描確定最佳波長(zhǎng)366nm。由上述單因素實(shí)驗(yàn)選定，覆盆子的提取條件為：30ml80%甲醇在80℃條件下回流提取1h[3]。通過(guò)上述研究測(cè)定，最終得出以下結(jié)果：德興覆盆子中椴樹(shù)苷和山奈酚的含量分別為0.4933mg/g，0.0302mg/g。

參考文獻(xiàn)：

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[3]何建明，孫楠，吳文丹，等.HPLC測(cè)定覆盆子中鞣花酸、黃酮和覆盆子苷-F5的含量[J].中國(guó)中藥雜志，2013，38（24）：4351-4356.

編輯/趙恒德