張兆峰+孫麗美+張現(xiàn)峰

摘 要：控制溶解氧，使其最大限度地發(fā)揮作用，保障氨基酸發(fā)酵工程的質(zhì)量，已經(jīng)成為業(yè)內(nèi)人士探討的共同課題。對氨基酸發(fā)酵及其他酸類的發(fā)酵具有戰(zhàn)略性意義。L-色氨酸作為8種基本氨基酸之一，具有普遍性。從氧在氨基酸好氧發(fā)酵過程中發(fā)揮的作用入手，引出溶氧對氨基酸發(fā)酵的影響分析實驗。以大腸桿菌為培養(yǎng)菌群，以L-色氨酸為對象進行了實驗，取得了一些成果，以期對業(yè)內(nèi)相關(guān)研究起到一定的指導作用。

關(guān)鍵詞：溶氧；氨基酸；大腸桿菌；L-色氨酸

中圖分類號：TQ922 文獻標識碼：A DOI：10.15913/j.cnki.kjycx.2016.10.098

利用菌群產(chǎn)生氨基酸的技術(shù)已經(jīng)發(fā)展了50多年，并且取得了顯著的成效。當前，氨基酸發(fā)酵仍然是十分實用的，是很多企業(yè)常用的發(fā)酵技術(shù)。在發(fā)酵過程中，溶解氧起著十分重要的作用，其濃度直接影響著氨基酸發(fā)酵的質(zhì)量——濃度過低或者過高都有可能直接破壞菌群的生長和培育，影響產(chǎn)酸過程。

1 氧在氨基酸好氧發(fā)酵中發(fā)揮的作用

我們知道，需要氧氣的菌類和兼性厭氧的菌類是氨基酸發(fā)酵過程中最為常見的兩種菌種，發(fā)酵過程離不開溶氧的參與。氨基酸的發(fā)酵首先是生產(chǎn)菌種的充分生長，然后才是菌類代謝物的聚集。無論哪一個環(huán)節(jié)，都要以溶氧的輔助為前提，溶氧的濃度一定要適宜，否則適得其反。以谷氨酸為例，在菌種的發(fā)育成長階段，如果溶氧濃度過高，高氧會阻礙氨基酸發(fā)酵菌種的生長，使之難以消耗糖原，加速菌類的老化，進而使菌種無法將糖轉(zhuǎn)化為所需的養(yǎng)分；相反，如果溶氧的濃度過低，氨基酸的合成速度將會受到影響，會產(chǎn)生很多代謝廢物，不利于其成長?？偟膩碚f，不適宜的濃度會嚴重阻礙培養(yǎng)菌的健康生長，甚至還會使整個氨基酸的質(zhì)量受到破壞。在菌種代謝物的產(chǎn)生過程中，溶氧的濃度也很重要。在菌類產(chǎn)酸的合成期，需要大量的溶氧，溶氧量要充足，這樣才能夠配合菌類充分發(fā)酵產(chǎn)酸；如果溶氧量剛剛好，氨基酸生產(chǎn)可以達到最大量；如果溶氧量不足，不僅代謝物的產(chǎn)生會受到阻礙，還有可能產(chǎn)生其他的副產(chǎn)物，給氨基酸的培養(yǎng)生產(chǎn)帶來麻煩。

那么，如何有效地控制溶氧量呢？下面以L-色氨酸為對象，以大腸桿菌為菌種進行溶氧量控制實驗。

2 溶氧量控制實驗

2.1 實驗基本材料和實驗方法

培養(yǎng)基：蛋白陳、牛肉膏、酵母膏、氯化鈉、瓊脂、硫化鈉溶液、硫化鎂溶液、玉米漿等。

實驗條件：無菌工作室。

實驗設(shè)備：搖瓶4只、鼓風器、烘干機、干燥劑、精細儀表盤、高速離心機、滅菌儀器、發(fā)酵儀器、恒溫箱等。

2.2 培植方法

實驗前，將大腸桿菌接種在活化菌斜面，放于恒溫箱中，恒溫保存，24 h后取出。將活化斜面上一塊正常的大腸桿菌菌群取下放入搖瓶中，將搖瓶密封，再用不透光的衛(wèi)生布將搖瓶層層包裹，完全密封；將包裹好的搖瓶放于恒溫的搖床之中，調(diào)至常溫，轉(zhuǎn)速為200 r/min，培養(yǎng)1 d。將所有的細菌種子放到發(fā)酵箱中，溫度保持在28 ℃左右，酸堿度為中性，通風量保持在200 L/h。用種子液浸泡15 min。

2.3 分析方法

用無菌水洗滌大腸桿菌菌種，之后要在高溫下烘干。測定方法采用比色法，溶氧量測定采用動態(tài)測定法。

2.4 實驗結(jié)果和實驗分析

2.4.1 供氧速率對L-色氨酸發(fā)酵的影響

供氧速率會影響L-色氨酸發(fā)酵過程中的供氧量。實驗顯示，攪拌速度越快，通氣量越大，供氧效率越高，供氧量就越大，溶氧量也就越大。當通氣量為200 L/h時，溶氧量最合理，L-色氨酸的培養(yǎng)數(shù)量最多；當攪拌速度為300 r/h左右時，菌體的生長最為健康，產(chǎn)酸量最大。

2.4.2 DO值對L-色氨酸發(fā)酵的影響

實驗可得，當DO值分別為10%，20%，30%，40%時，L-色氨酸的質(zhì)量濃度分別為8 g/L、10 g/L、9 g/L、6 g/L，菌體的質(zhì)量濃度分別為11 g/L、13 g/L、15 g/L、14 g/L。從實驗結(jié)果可以看出，當DO值為20%時，L-色氨酸的產(chǎn)量達到最大，但是對菌體卻沒有明顯的影響。由此可見，相對穩(wěn)定的DO值對大腸桿菌和L-色氨酸的培養(yǎng)更為有益。

2.4.3 應(yīng)用正交設(shè)計進行分階段供養(yǎng)研究

我們將氨基酸的發(fā)酵過程分解為3個時間階段，分別為0～24 h、24～48 h、48～72 h。保持3個時間段中其他因素不變，分別得出4次實驗的成果，其正交水平分別為0～24 h：10 302 040，24～48 h：40 301 020，48～72 h：20 403 010.其中，在24～48 h的時間段，正交水平最高，DO值可達到20%，大腸桿菌質(zhì)量最為穩(wěn)定，產(chǎn)酸效果最好，L-色氨酸質(zhì)量最好。

3 結(jié)束語

通過以L-色氨酸為對象，以大腸桿菌為菌種的溶氧量控制實驗我們可以得出以下結(jié)論：①供氧速率對溶氧量起著重要的作用，二者是正比例關(guān)系。②通風量和攪拌速度是供氧速率的兩個決定因素。當通風量達到200 L/h，攪拌速度在300 r/h左右時，大腸桿菌菌體和L-色氨酸質(zhì)量最好。③DO值對發(fā)酵結(jié)果有極大的影響，對L-色氨酸的影響較大，對大腸桿菌菌群的影響不是很明顯。當DO值達到20%時，L-色氨酸產(chǎn)酸量達到最大值。正交設(shè)計分階段供養(yǎng)證明，發(fā)酵時間不同，溶氧對氨基酸發(fā)酵的影響也不同。當發(fā)酵時間為24～48 h時，不論是大腸桿菌，還是L-色氨酸，其質(zhì)量都是最穩(wěn)定的。

參考文獻

[1]王健，陳寧.色氨酸生產(chǎn)菌的選育及其發(fā)酵條件的研究[J].氨基酸和生物資源，2013（5）：43-44.

[2]盧志洪，劉志成，鄭穗平.不同溶氧條件下谷氨酸棒桿菌發(fā)酵過程代謝物及關(guān)鍵酶酶活分析[J].中國釀造，2010（2）：21.

[3]郭智成.對美國L-色氨酸事件的回顧和思考[J].醫(yī)學與哲學，2011（8）：60-61.

〔編輯：劉曉芳〕