何怡寧 李仲林 唐寧 王海勇 曹艷杰 范文勝 朱雷 吳陽開 韋平 韋天超 磨美蘭

摘要：【目的】評(píng)價(jià)桔百顆粒（樂康寧）對(duì)雞傳染性支氣管炎（IB）的臨床防治效果，為利用中藥防治IB提供新思路?！痉椒ā繉?30羽1日齡非免疫雛雞隨機(jī)分為桔百顆粒預(yù)防組、治療組、藥物對(duì)照組、免疫組、模型對(duì)照組和健康對(duì)照組，免疫組30羽，其他組均為20羽。除健康對(duì)照組外，其他組均于15日齡時(shí)滴鼻點(diǎn)眼感染雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）M41毒株，預(yù)防組在感染前5 d（10日齡）飲水給藥；治療組和藥物對(duì)照組均在發(fā)病超過半數(shù)時(shí)給藥治療；免疫組則在7 日齡免疫H120疫苗（免疫后一部分給藥，另一部分不給藥）。統(tǒng)計(jì)感染后各組雛雞的發(fā)病率、保護(hù)率、治愈率及呼吸道癥狀評(píng)分，同時(shí)統(tǒng)計(jì)感染后其體重增長(zhǎng)及免疫器官指數(shù)，并測(cè)定血清IBV特異性抗體?！窘Y(jié)果】感染IBV后第8 d（23日齡）統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，預(yù)防組的保護(hù)率為50.00%，免疫不給藥組的保護(hù)率為45.00%；治療組的治愈率為66.67%，藥物對(duì)照組為58.82%；免疫不給藥組的呼吸道癥狀評(píng)分最低，預(yù)防組和治療組次之。停藥后第12 d（36日齡），治療組雛雞的脾臟指數(shù)顯著高于其他組（P<0.05，下同）；感染IBV后第14 d（29日齡），治療組雛雞的IBV抗體水平達(dá)峰值，感染IBV后第21 d（36日齡）仍維持在較高水平，免疫并給藥組的抗體水平顯著高于免疫不給藥組?！窘Y(jié)論】桔百顆粒有效降低IB發(fā)病率及治愈患病雛雞，是通過促進(jìn)脾臟等免疫器官發(fā)育，進(jìn)而促使機(jī)體抗體生成、延長(zhǎng)抗體維持時(shí)間、增強(qiáng)機(jī)體免疫力來實(shí)現(xiàn)，尤其對(duì)于呼吸型IB具有良好的臨床預(yù)防和治療效果。

關(guān)鍵詞： 桔百顆粒（樂康寧）；雞傳染性支氣管炎；防治效果；免疫應(yīng)答

中圖分類號(hào)： S858.31 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2016）09-1602-06

Abstract：【Objective】The clinical prevention and treatment effects of Jiebai granule（trade name Lekangning） on avian infectious bronchitis（IB） were evaluated， in order to provide a new idea for using traditional Chinese medicine to prevent and cure IB. 【Method】A total of 130 1-day-old non-immunized chicks were randomly divided into 6 group（Jiebai granule prevention group， treatment group， drug control group， vaccine group， model control group and healthy control group）. Thirty chicks were in vaccine group and twenty chicks in other groups. Except for healthy control group， the chicks in other groups were challenged oculonasally with avian infectious bronchitis virus（IBV） M41 strain at 15-day old， and Jiebai granule was added into drinking water before 5 days（at 10-day old） of challenge in prevention group. In Jiebai granule treatment group and Yinhuang oral solution treatment control group， Jiebai granule and Yinhuang oral solution were added into drinking water， respectively when more than half of the chicks were sick. In vaccine group， chicks were vaccinated with H120 vaccine at 7-day old， and partial vaccinated chicks drank water with Jiebai granule， other vaccinated chicks were treated without Jiebai granule. After IBV infection， the incidence， protection rate， cure rate and respiratory symptom scores of each group were counted. The weight gain and immune organ index， the levels of IBV antibodies in serum were analyzed. 【Result】At 8 d after being infected with IBV（at 23-day old）， the protection rate was 50.00% in prevention group and 45.00% in vaccine without drug group. The cure rates were 66.67%， and 58.82% in treatment group and treatment without drug group， respectively. The clinical symptoms score was the lowest in vaccine without drug group， followed by prevention and treatment groups. The spleen in treatment group were significantly higher than those in other groups at the 12 d after drug withdrawal（at 36-day old）（P<0.05， the same below）. The antibody titers of prevention and treatment group were reach the peak at the 14 d post infection（dpi）（at 29-day old）， and still kept at high level at 21 dpi（at 36-day old）. The antibody titer of the vaccine with drug group was significantly higher than that of vaccine without drug group. 【Conclusion】The Jiebai granule can reduce the incidence of IB and cure the sick chickens. At the same time， Jiebai granule can enhance immunity by promoting the development of spleen and other immune organs， promoting antibody production and increasing the maintenance time of antibody. The Jiebai granule has a better clinical prevention and treatment effect on IB.

Key words： Jiebai granule（Lekangning）； avian infectious bronchitis； prevention and treatment effect； immune response

0 引言

【研究意義】雞傳染性支氣管炎（Infectious bronchitis，IB）是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）及我國(guó)規(guī)定的家禽B類傳染病之一，嚴(yán)重危害現(xiàn)代養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展。IB是由雞傳染性支氣管炎病毒（Infectious bronchitis virus，IBV）引起的一種雞的急性、高度接觸性傳染病，可感染任何日齡的雞群，主要臨床癥狀表現(xiàn)為噴嚏、咳嗽、氣管啰音、拉白色水樣稀便等（Cavanagh，2007）。雛雞感染后生長(zhǎng)緩慢、飼料報(bào)酬率低，產(chǎn)蛋雞感染后會(huì)出現(xiàn)產(chǎn)蛋下降、產(chǎn)畸形蛋、軟殼蛋等癥狀。目前，針對(duì)IB的防控主要通過接種疫苗，但I(xiàn)BV基因組極易發(fā)生變異和重組，致使其產(chǎn)生存在多種基因型和血清型，不同血清型間交叉保護(hù)效果差，導(dǎo)致免疫失敗時(shí)常發(fā)生（Mo et al.，2013；張麗華等，2016）。中藥是我國(guó)醫(yī)學(xué)界的瑰寶，越來越多研究證實(shí)許多中藥成分具有抑菌、抗病毒和增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用，且殘留量小、不易產(chǎn)生耐藥性（蔣春茂等，2015），若能將中藥制劑推廣應(yīng)用到家禽養(yǎng)殖業(yè)中，勢(shì)必對(duì)有效防控IB等禽病及促進(jìn)家禽養(yǎng)殖業(yè)健康持續(xù)發(fā)展具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】至今，我國(guó)獸醫(yī)學(xué)工作者已在中獸藥防治IBV方面開展了大量研究，并取得了長(zhǎng)足進(jìn)展。劉玉芹等（2009）研究發(fā)現(xiàn)，單味中藥黃芩、貫眾、板藍(lán)根、魚腥草及復(fù)方中藥均能明顯抑制IBV繁殖，尤其是復(fù)方中藥應(yīng)用于人工感染試驗(yàn)時(shí)具有良好的預(yù)防和治療作用。劉興金等（2009）選用板藍(lán)根、黃芩、山豆根、甘草、芩黃、桔梗等一系列抗炎、抗病毒藥物組合成中藥方劑芩黃顆粒，并將其用于進(jìn)行IB臨床預(yù)防試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)中、高劑量的岑黃顆粒對(duì)IB具有良好的預(yù)防效果。另有研究證實(shí)，雙黃連可溶性粉、柴黃顆粒、黃連清瘟散及用黃連、木香、蒼術(shù)、麻黃、苦杏仁、甘草、石膏、黃芩、板藍(lán)根中藥組成的“傳支散”等中藥制劑對(duì)防治IBV均表現(xiàn)出良好的治療效果（周翠珍等，2008；崔小七等，2013；王?；ǖ龋?013；東彥新等，2014）。此外，胡國(guó)明等（2014a， 2014b）研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)方天門冬多糖注射液是一種有效的免疫增強(qiáng)劑，能夠明顯增加雞的免疫器官指數(shù)，促進(jìn)其生長(zhǎng)發(fā)育，將復(fù)方天門冬多糖注射液用于治療人工感染IB患病雞，也能取得顯著的臨床治療效果。【本研究切入點(diǎn)】桔百顆粒（商品名：樂康寧）的主要成分為桔梗、黃芩、連翹、金銀花、陳皮、百部、遠(yuǎn)志、桑白皮、甘草等純中藥提取物，富含黃芩苷、綠原酸、金絲桃素、連翹酯苷、連翹酚、桔梗皂苷、生物堿等抗病毒活性成分，具有清熱解毒、止咳平喘、抑菌抗病毒之功效，但目前有關(guān)桔百顆粒治療禽病的研究鮮見報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】通過桔百顆粒對(duì)人工感染呼吸型IB雛雞的預(yù)治試驗(yàn)，評(píng)價(jià)其對(duì)IBV的臨床防治效果，以期為利用中藥防治IB提供新思路。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

桔百顆粒（樂康寧）由廣東容大生物股份有限公司生產(chǎn)提供，對(duì)照藥物銀黃口服液由山東誼源動(dòng)物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)提供；IBV M41標(biāo)準(zhǔn)毒株（AV1511）購自中國(guó)獸藥監(jiān)察所，IBV耐熱保護(hù)劑活疫苗（H120株）購自廣東大華農(nóng)動(dòng)物保健品股份有限公司；1日齡非免疫雛雞（雌雄各半）購自廣西南寧市華桂源種禽有限公司；IBV抗體檢測(cè)試劑盒（IDEXX）購自北京愛得士元亨生物技術(shù)有限公司。

1. 2 最佳攻毒劑量確定試驗(yàn)

1日齡健康非免疫雛雞20羽，飼養(yǎng)至15日齡，隨機(jī)分成4組，每組5羽，經(jīng)點(diǎn)眼滴鼻分別接種106 EID50的IBV M41尿囊液0.1、0.2、0.3和0.4 mL/羽。以半數(shù)發(fā)病組攻毒劑量的2倍劑量為試驗(yàn)攻毒劑量。

1. 3 試驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥處理

挑選1日齡健康非免疫雛雞130羽，飼養(yǎng)至7日齡時(shí)隨機(jī)選取30羽作免疫組，經(jīng)點(diǎn)眼滴鼻接種H120疫苗，其中免疫不給藥組20羽、免疫并給藥組10羽[免疫后第1 d（8日齡）飲水給藥]；飼養(yǎng)至10日齡時(shí)隨機(jī)選取20羽作預(yù)防組，飲水給藥預(yù)防；飼養(yǎng)至15日齡時(shí)將剩余80羽隨機(jī)分為4組，每組20羽，除健康對(duì)照組外，其余各組均經(jīng)點(diǎn)眼滴鼻接種最佳攻毒劑量的IBV M41病毒液，感染后當(dāng)半數(shù)以上雛雞表現(xiàn)出明顯臨床癥狀時(shí)，治療組和藥物對(duì)照組開始飲水給藥治療。具體分組及處理方式見表1。

1. 4 臨床觀察及治療效果統(tǒng)計(jì)

IBV感染試驗(yàn)期間，每天觀察并記錄試驗(yàn)雞的臨床表現(xiàn)及數(shù)量，包括精神、食欲、呼吸道癥狀、是否咳嗽、打噴嚏、頻繁甩頭、張口呼吸、氣管啰音及口腔流黏液，并記錄飲水量等，統(tǒng)計(jì)各組的發(fā)病率、保護(hù)率及治愈率。

發(fā)病率（%）=各組發(fā)病雞總數(shù)/各組試驗(yàn)雞總數(shù)×100

保護(hù)率（%）=各組未發(fā)病雞數(shù)/各組試驗(yàn)雞總數(shù)×100

治/自愈率：在治療組停藥后，即攻毒后第10 d統(tǒng)計(jì)各組雞群發(fā)病情況及發(fā)病數(shù)量，病雞在給藥后的精神狀態(tài)、食欲恢復(fù)正常，不再出現(xiàn)臨床癥狀者均判定為治/自愈。

治/自愈率（%）=治（自）愈病雞數(shù)/該組發(fā)病雞總數(shù)×100

呼吸道癥狀評(píng)分：于感染后第3、5、8和10 d觀察雞只的臨床癥狀并計(jì)分，計(jì)算每組的呼吸道癥狀百分比。無臨床癥狀記為0分，出現(xiàn)噴嚏咳嗽記為1分，噴嚏咳嗽伴有啰音記為2分，張口呼吸、呼吸困難記為3分，最終統(tǒng)計(jì)呼吸道癥狀評(píng)分。

癥狀評(píng)分百分比（%）=每組癥狀評(píng)分總和/每組中最大可能的癥狀評(píng)分總和×100

1. 5 體重增長(zhǎng)及免疫器官指數(shù)測(cè)定

在停藥1 d（25日齡）后各組隨機(jī)剖殺5羽雛雞，停藥5 d（29日齡）后各組剖殺10羽雛雞，停藥12 d（36日齡）后剖殺其余雛雞，觀察大體病變后采集試驗(yàn)雞的胸腺、脾臟和法氏囊并稱重，用于計(jì)算各組每羽雞對(duì)應(yīng)的免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)=免疫器官重量/雞體重量

1. 6 血清IBV特異性抗體測(cè)定

感染后7、14、21日齡每組分別隨機(jī)抽取5羽雛雞，經(jīng)翅下靜脈采血分離血清，參照IBV抗體檢測(cè)試劑盒（IDEXX）使用說明進(jìn)行檢測(cè)。

1. 7 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 17.0分析處理數(shù)據(jù)，其中，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行卡方檢驗(yàn)、計(jì)量資料進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 IBV最佳攻毒劑量測(cè)定結(jié)果

感染IBV后第1 d（16日齡）開始出現(xiàn)精神沉郁、羽毛松亂、甩頭現(xiàn)象，第2 d（17日齡）出現(xiàn)噴嚏和咳嗽癥狀，第4 d（19日齡）開始出現(xiàn)流眼淚、喘咳、嚴(yán)重的張口呼吸和氣管啰音等癥狀，第8 d（23日齡）為發(fā)病高峰期，剖檢病雞發(fā)現(xiàn)其氣管、支氣管內(nèi)有黏液，氣管充血；第14 d（29日齡）臨床癥狀基本消失。接種0.1 mL的106 EID50 IBV M41病毒液后雛雞發(fā)病率為60%～80%，表現(xiàn)出明顯的呼吸道癥狀，接種0.3～0.4 mL的雞群發(fā)病率為100%，表現(xiàn)出嚴(yán)重的呼吸道癥狀，故確定106 EID50 IBV M41病毒液的最佳攻毒劑量為0.2 mL。

2. 2 IBV感染后的發(fā)病率及治愈率統(tǒng)計(jì)結(jié)果

感染IBV后第3 d（18日齡）雛雞發(fā)病均超過半數(shù)，此時(shí)對(duì)治療組和藥物對(duì)照組進(jìn)行給藥治療。感染IBV后第8 d（23日齡）各組發(fā)病率達(dá)到高峰，其中模型對(duì)照組發(fā)病率達(dá)100.00%，臨床癥狀明顯；預(yù)防組和免疫不給藥組的發(fā)病率分別為50.00%和55.00%，保護(hù)率分別為50.00%和45.00%。給藥7 d（25日齡）后，治療組和藥物對(duì)照組雛雞癥狀逐漸減輕，治療組治愈率為66.67%（表2），略高于藥物對(duì)照組（58.82%），此時(shí)模型對(duì)照組仍表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀。

2. 3 呼吸道癥狀評(píng)分結(jié)果

感染IBV后第3、5、8和10 d分別觀察并統(tǒng)計(jì)各組雛雞呼吸癥狀評(píng)分（健康對(duì)照組雛雞的呼吸道癥狀評(píng)分均為0，未參與制圖），結(jié)果（圖1）發(fā)現(xiàn)以免疫不給藥組雛雞的呼吸道癥狀評(píng)分最低，且呈下降趨勢(shì)；預(yù)防組雛雞的呼吸道癥狀評(píng)分次之，其癥狀評(píng)分均低于模型對(duì)照組，且在感染IBV后第5 d（20日齡）立即下降；治療組雛雞的呼吸道癥狀評(píng)分略高于預(yù)防組，但低于模型對(duì)照組；藥物對(duì)照組雛雞的呼吸癥狀評(píng)分在感染IBV后第5 d高于模型對(duì)照組，隨后立即下降，至第10 d（25日齡）有所回升?？梢姡捎靡呙缑庖吆徒郯兕w粒給藥預(yù)防及治療均能在一定程度保護(hù)雛雞遭受嚴(yán)重的呼吸道癥狀。

2. 4 桔百顆粒對(duì)雛雞免疫器官指數(shù)及體重增長(zhǎng)的影響

由表3可以看出，感染IBV后預(yù)防組和免疫不給藥組雛雞的相對(duì)增重較穩(wěn)定，且高于健康對(duì)照組，治療組與健康對(duì)照組接近，藥物對(duì)照組和模型對(duì)照組則低于健康對(duì)照組。在免疫器官指數(shù)方面，停藥后第1 d（25日齡）各組差異不顯著（P>0.05，下同），至停藥后第5 d（29日齡）各IBV感染組的胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)均顯著高于健康對(duì)照組（P<0.05，下同），此時(shí)治療組的脾臟指數(shù)顯著高于其他組；停藥后第12 d（36日齡）各組間的胸腺指數(shù)差異不顯著，治療組的脾臟指數(shù)顯著高于其他組，除免疫不給藥組外，各IBV感染組的法氏囊指數(shù)均顯著高于健康對(duì)照組。感染IBV后雛雞的胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)明顯升高，表明機(jī)體的胸腺和法氏囊等免疫器官發(fā)生活化以清除病毒感染，而感染后給予桔百顆粒治療能明顯提高脾臟指數(shù)，說明桔百顆粒治療能有效促進(jìn)脾臟免疫器官發(fā)育，增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能以抵抗IBV感染。

2. 5 血清特異性抗體水平監(jiān)測(cè)結(jié)果

由圖2可知，感染IBV（15日齡）前雛雞血清中存在一定母源抗體，但抗體滴度為陰性（log10小于2.50）。感染IBV后第14 d（29日齡）健康對(duì)照組雛雞的母源抗體消失，除預(yù)防組和免疫不給藥組外其他攻毒感染組雛雞的抗體水平均上升到峰值，且免疫不給藥組此時(shí)顯著低于其他感染組。感染IBV后第21 d（36日齡）預(yù)防組和免疫不給藥組雛雞的抗體水平上升到峰值，藥物對(duì)照組和模型對(duì)照組抗體水平則明顯下降，治療組抗體滴度仍維持在較高水平，且高于其他感染組，表明采用桔百顆粒預(yù)防或治療能有效將IBV感染后的特異性抗體維持在較高水平。經(jīng)疫苗免疫后，免疫不給藥組與免疫并給藥組在感染IBV后第7 d的抗體滴度差異不明顯，但顯著高于健康對(duì)照組；至第14 d免疫并給藥組抗體滴度明顯高于免疫不給藥組，二者間存在顯著差異，表明經(jīng)疫苗免疫后再進(jìn)行桔百顆粒治療能有效促進(jìn)機(jī)體抗體生成。

3 討論

IBV廣泛分布于全球，嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展，而且因其血清型眾多并不斷發(fā)生變異和重組，即使采取疫苗進(jìn)行預(yù)防也難以得到有效防控（吳翠蘭等，2015）。IBV主要侵害雛雞的氣管，通過呼吸道感染，尤其是呼吸型IBV如Mass和Conn毒株引起咳嗽、噴嚏、氣管啰音等呼吸道癥狀，造成氣管出現(xiàn)大量黏液及充血等（磨美蘭等，2006）。依據(jù)中醫(yī)理論，IBV感染為邪疫由表入里，肺主肅降、通調(diào)水道之功能受阻，肺氣上逆，水濕不得及時(shí)下瀉，郁而化痰，就會(huì)出現(xiàn)氣喘、痰鳴，邪在肺則應(yīng)清熱解毒（亓麗紅等，2013）。桔百顆粒含有多味清熱解毒藥如黃芩、連翹、金銀花及桑白皮等，止咳化痰平喘藥如桔梗、百部及遠(yuǎn)志等，還有理氣健脾藥陳皮和補(bǔ)虛藥甘草，組方后具有良好的清熱解毒、宣肺止咳平喘功效。黃芩和金銀花具有抑制IBV引起細(xì)胞病變的作用，而連翹含有的連翹酯苷能誘生IFN-α達(dá)到抗病毒的效果（白挨泉等，2003；張羽璐等，2011）。本研究結(jié)果表明，將桔百顆粒經(jīng)飲水給藥進(jìn)行IB預(yù)防，其臨床保護(hù)率達(dá)50.00%，高于疫苗對(duì)照組的45.00%；治療組的自/治愈率高達(dá)66.67%，明顯高于藥物對(duì)照組。此外，對(duì)感染組進(jìn)行呼吸道癥狀評(píng)分，詳細(xì)判斷感染雞的病情，結(jié)果發(fā)現(xiàn)桔百顆粒預(yù)防組和治療組雛雞的呼吸道癥狀評(píng)分均低于藥物對(duì)照組和模型對(duì)照組，但略高于免疫不給藥組，表明桔百顆粒對(duì)IB具有良好的臨床預(yù)防和治療效果。

由于單一的IBV感染很少出現(xiàn)死亡，若僅憑臨床癥狀咳嗽、打噴嚏、張口呼吸等作為標(biāo)準(zhǔn)，難以準(zhǔn)確判斷發(fā)病率及發(fā)病嚴(yán)重程度，而以此來確定防治效果亦不夠科學(xué)（亓麗紅等，2013）。本研究通過統(tǒng)計(jì)IBV感染后各組的免疫器官指數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)停藥后第5 d（29日齡）至停藥后第12 d（36日齡）治療組的脾臟指數(shù)顯著高于其他感染組及健康對(duì)照組，表明使用桔百顆粒給藥治療能夠顯著增加脾臟指數(shù)，促進(jìn)感染雞脾臟等免疫器官發(fā)育，增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能以抵抗IBV感染。這與胡國(guó)明等（2014b）以復(fù)方天門冬多糖注射液臨床給藥治療IB能有效提高免疫器官指數(shù)及增強(qiáng)雞免疫功能的結(jié)果一致。此外，本研究檢測(cè)了IBV感染后各組血清特異性抗體水平，發(fā)現(xiàn)治療組的抗體水平在感染IBV后第14 d（29日齡）達(dá)峰值，至第21 d（36日齡）仍維持在較高水平，而免疫并給藥組在感染IBV后第14 d的抗體水平顯著高于免疫不給藥組，說明以桔百顆粒預(yù)防或治療IBV感染能有效促進(jìn)機(jī)體抗體生成，并維持在較高水平，與崔小七等（2013）、楊楷等（2014）的研究結(jié)果一致。

4 結(jié)論

桔百顆粒有效降低IB發(fā)病率及治愈患病雛雞，是通過促進(jìn)脾臟等免疫器官發(fā)育，進(jìn)而促使機(jī)體抗體生成、延長(zhǎng)抗體維持時(shí)間、增強(qiáng)機(jī)體免疫力來實(shí)現(xiàn)，尤其對(duì)于呼吸型IB具有良好的臨床預(yù)防和治療效果。

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（責(zé)任編輯 蘭宗寶）