王耀榮內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院檢驗(yàn)科，內(nèi)蒙古包頭　014010

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氧化酶法肌酐測(cè)定的檢測(cè)方法改良

王耀榮
內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院檢驗(yàn)科，內(nèi)蒙古包頭014010

［摘要］目的通過(guò)調(diào)整方法學(xué)參數(shù)改進(jìn)現(xiàn)用肌酐試劑在日立7600-020生化分析儀上的測(cè)試性能。方法在日立7600-020生化分析儀上，將豪邁公司氧化酶法肌酐試劑進(jìn)行方法改良，然后參照CLSI方法學(xué)評(píng)價(jià)相關(guān)文件進(jìn)行評(píng)估，具體指標(biāo)有準(zhǔn)確度、精密度、干擾試驗(yàn)、線性范圍和參考區(qū)間。結(jié)果通過(guò)方法改良的肌酐測(cè)試系統(tǒng)性能指標(biāo)為：偏倚（bias）是2.51%；批內(nèi)不精密度（CVw）為2.43%；批間不精密度（CVb）為3.05%；線性范圍為33～9 105 umol/L；干擾試驗(yàn)，改良法優(yōu)于原法；參考區(qū)間兩種方法相符合。結(jié)論通過(guò)改良的肌酐測(cè)試系統(tǒng)優(yōu)于原方法學(xué)系統(tǒng)。

［關(guān)鍵詞］肌酐；檢測(cè)系統(tǒng)；性能評(píng)價(jià)

血清肌酐測(cè)定作為經(jīng)典的腎功檢查項(xiàng)目在臨床得到廣泛應(yīng)用，是最常見(jiàn)的生化檢測(cè)指標(biāo)之一，因此肌酐測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確與否對(duì)相關(guān)疾病的診療具有重要意義。我室的7600生化分析儀由于參數(shù)設(shè)置的局限，使得在測(cè)試一些溶血和乳糜標(biāo)本的肌酐時(shí)結(jié)果不盡如人意。為此我們對(duì)氧化酶法肌酐測(cè)定的方法學(xué)進(jìn)行了研究，并對(duì)反應(yīng)曲線的數(shù)據(jù)進(jìn)行反復(fù)測(cè)算，發(fā)現(xiàn)該反應(yīng)在反應(yīng)初期符合動(dòng)力學(xué)法的要求，于是將傳統(tǒng)的兩點(diǎn)終點(diǎn)法改為動(dòng)力學(xué)法，相關(guān)參數(shù)依據(jù)動(dòng)力學(xué)法設(shè)定，并進(jìn)行了相關(guān)評(píng)估。全部實(shí)驗(yàn)在2015年9月份完成。

1　材料與方法

1.1材料

國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委臨檢中心2015年第2次常規(guī)化學(xué)室間質(zhì)評(píng)物質(zhì)、混合人血清、正常對(duì)照血清。

1.2儀器和試劑

豪邁酶法肌酐測(cè)定試劑盒（批號(hào)：20160211）、伯樂(lè)復(fù)合校準(zhǔn)品（批號(hào)：201705）及自配血紅蛋白、脂肪乳、膽紅素干擾物，儀器為日立7600-020生化分析儀。

1.3方法

1.3.1測(cè)定參數(shù)調(diào)整將兩點(diǎn)終點(diǎn)法改為雙試劑動(dòng)力學(xué)法，讀點(diǎn)時(shí)間為16～20點(diǎn)，反應(yīng)時(shí)間為10 min，樣本：試劑1：試劑2比例為10：200：50，校準(zhǔn)方式為線性2點(diǎn)校準(zhǔn)，其它參數(shù)依據(jù)試劑說(shuō)明書設(shè)定。然后進(jìn)行校準(zhǔn)，測(cè)試伯樂(lè)質(zhì)控水平2和水平3，結(jié)果無(wú)失控。

1.3.2不精密度評(píng)價(jià)用調(diào)整前后的兩種方法在一個(gè)操作批次內(nèi)分別測(cè)定1份病人混合血清各20次，計(jì)算批內(nèi)不精密度（CVw%）；再制備1份病人混合血清，用兩種方法每天各測(cè)1次共測(cè)20次，計(jì)算批間不精密度（CVb%）［1］。

1.3.3準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)用調(diào)整前后的兩種方法分別測(cè)定衛(wèi)計(jì)委臨檢中心2015年第2次常規(guī)化學(xué)室間質(zhì)評(píng)物，各個(gè)水平重復(fù)2次，各取均值，與相應(yīng)靶值計(jì)算偏倚（bias%）［2］。

1.3.4干擾實(shí)驗(yàn)干擾物為濃度為425 umol/L的膽紅素校準(zhǔn)液、濃度為12 g/L的紅細(xì)胞溶解液、10%脂肪乳，將混合血清與以上干擾物分別按10：0、8：2、6：4、4：6、2：8、0：10的比例混均，各得到6份標(biāo)本，每份測(cè)定3次，計(jì)算每份標(biāo)本的平均值并與基礎(chǔ)結(jié)果比較，評(píng)價(jià)抗干擾能力［3］。

1.3.5線性范圍評(píng)價(jià)將一份肌酐值為32 umol/L的混合血清和肌酐值8 909 umol/L尿液標(biāo)本按不同比例混合，測(cè)定各濃度肌酐值，與各理論計(jì)算值作相關(guān)分析［4］。

1.3.6參考區(qū)間驗(yàn)證取正常體檢人群標(biāo)本20份，最多只允許一份標(biāo)本結(jié)果不在現(xiàn)用參考區(qū)間，符合率≥95%［5］。

2　結(jié)果

2.1不精密度評(píng)價(jià)

動(dòng)力學(xué)法的批內(nèi)（CVw）為2.43%，批間不精密度（CVb）為3.09%，動(dòng)力學(xué)法的不精密度明顯好于兩點(diǎn)終點(diǎn)法。見(jiàn)表1。

表1　兩種方法的不精密度結(jié)果比較

2.2準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)

準(zhǔn)確度方面，動(dòng)力學(xué)法的偏倚的絕對(duì)值均小于兩點(diǎn)終點(diǎn)法，也就是說(shuō)動(dòng)力學(xué)法要比兩點(diǎn)終點(diǎn)法準(zhǔn)確。見(jiàn)表2。

表2　兩種方法測(cè)定結(jié)果偏倚比較

2.3干擾試驗(yàn)

與兩點(diǎn)終點(diǎn)法相比，更高濃度的干擾物才能對(duì)動(dòng)力學(xué)法的結(jié)果產(chǎn)生干擾，動(dòng)力學(xué)法抗干擾能力好于兩點(diǎn)終點(diǎn)法。見(jiàn)表3。

表3　兩種方法干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

2.4線性范圍

兩點(diǎn)終點(diǎn)法線性范圍見(jiàn)圖1，動(dòng)力學(xué)法線性范圍見(jiàn)圖2。兩點(diǎn)終點(diǎn)法范圍不及動(dòng)力學(xué)法，而且動(dòng)力學(xué)法低值結(jié)果更準(zhǔn)確。

圖1　動(dòng)力學(xué)法肌酐線性范圍為33～9 105 ummol/L

圖2　兩點(diǎn)終點(diǎn)法肌酐線性范圍為35～8 810 ummol/L

2.5參考區(qū)間

20人份正常體檢標(biāo)本結(jié)果全部在現(xiàn)用參考區(qū)間44～97 ummol/L范圍內(nèi)，全部符合。

3　討論

血清肌酐測(cè)定是最常見(jiàn)的生化急診檢測(cè)指標(biāo)之一，因此肌酐測(cè)試的速度與結(jié)果的準(zhǔn)確性對(duì)相關(guān)疾病診療具有重要意義。肌酐目前主要檢測(cè)方法是氧化酶法。如果按廠家說(shuō)明的參數(shù)測(cè)定，測(cè)試速度和抗干擾能力并不太理想。通過(guò)對(duì)氧化酶法肌酐測(cè)定的方法參數(shù)進(jìn)行研究，并對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合計(jì)算，發(fā)現(xiàn)該反應(yīng)在反應(yīng)初期的一段時(shí)間符合動(dòng)力學(xué)法測(cè)定要求，于是對(duì)參數(shù)做出相應(yīng)調(diào)整，把兩點(diǎn)終點(diǎn)法改為動(dòng)力學(xué)法，并進(jìn)行驗(yàn)證評(píng)估。結(jié)果如下：不精密度，兩點(diǎn)終點(diǎn)法CVw為3.05%，CVb為3.77%；動(dòng)力學(xué)法的CVw為2.43%，CVb為3.09%，動(dòng)力學(xué)法比兩點(diǎn)終點(diǎn)法好。準(zhǔn)確度，動(dòng)力學(xué)法5個(gè)水平偏倚絕對(duì)值均高于兩點(diǎn)終點(diǎn)法?？垢蓴_能力，無(wú)論是抗溶血、抗高脂血還是抗黃疸的干擾，動(dòng)力學(xué)法還是更好一些；線性范圍的比較，動(dòng)力學(xué)法線性范圍為33～9 150 ummol/L，較兩點(diǎn)終點(diǎn)法的35～8 810 ummol/L要好，而且兩點(diǎn)終點(diǎn)法的截距較大，也就是說(shuō)在測(cè)定低值時(shí)結(jié)果較差。此外動(dòng)力學(xué)法的參考區(qū)間與現(xiàn)用范圍一致，也符合要求。從方法學(xué)角度講［6］，動(dòng)力學(xué)法的性能指標(biāo)本身就強(qiáng)于終點(diǎn)法，我們的一系列方法學(xué)評(píng)價(jià)也證實(shí)了這一點(diǎn)。

綜上所述，日常工作中通過(guò)細(xì)心觀察，對(duì)一些細(xì)節(jié)進(jìn)行思考，并不斷實(shí)踐，我們是能夠?qū)ΜF(xiàn)有方法進(jìn)行有效改進(jìn)的。如該試驗(yàn)通過(guò)方法學(xué)改進(jìn)，肌酐測(cè)定的性能指標(biāo)更加理想，測(cè)定速度也更快，也使我們能更好地滿足臨床，服務(wù)患者。

［參考文獻(xiàn)］

［1］Clinical and Laboratory Standards Institute.EP5-A2 Evaluation of PrecisionPerformance of Quantitative Measurement Methods；Approved Guideline［Z］.Wayne，PA，UAS：CLSI，2004.

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［5］Clinical and Laboratory Standards Institute.C28-A2 How to Define and Determine Reference Intervals in the Clinical Laboratory；Approved Guideline—Second Edition［Z］.Wayne，PA，UAS：CLSI，2003.

［6］葉應(yīng)嫵，王毓三.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［M］.3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：124-127.

An Improved Oxidase Method for Determining Creatinine in Blood and Urine

WANG Yao-rong
Clinical Laboratory，Baogang Hospital，Baotou，Inner Mongolia，014010 China

［Abstract］Objective To improve the test by adjusting the methodological parameters of the creatinine reagent in Hitachi 7600-020 biochemical analyzer. Methods To adjust the methodological parameters of the creatinine reagent and evaluate the oparation performance（including：accuracy，precision，interference test，linear range and reference interval）according to the method of CLSI. Results Improved oparation performance：The bias was 2.51%；Within（CVw）was 2.43% and between-batch precision（CVb）was 3.05%；the linear range was 33～9 105 umol/L；Interference test：the improved method is better than the original method；the reference interval is consistent with the original method. Conclusion The improved method is better than the original method.

［Key words］Creatinine；Detection system；Oparation performance evaluation

收稿日期：（2015-10-18）

［作者簡(jiǎn)介］王耀榮（1979.6-），男，蒙古族，內(nèi)蒙古包頭人，碩士，主管檢驗(yàn)師，主要從事臨床生化檢驗(yàn)工作。

DOI：10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.02.101

［中圖分類號(hào)］R446.1

［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A

［文章編號(hào)］1672-5654（2016）01（b）-0101-03