劉金鑫　項(xiàng)珍珍　徐晶晶　白辰光③

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胃腺癌內(nèi)鏡活檢和術(shù)后標(biāo)本HER-2表達(dá)的一致性分析

劉金鑫①項(xiàng)珍珍②徐晶晶②白辰光②③

摘要目的：分析胃腺癌內(nèi)鏡活檢和術(shù)后標(biāo)本HER-2蛋白表達(dá)狀態(tài)的一致性，探討胃腺癌內(nèi)鏡活檢標(biāo)本HER-2檢測(cè)結(jié)果對(duì)應(yīng)用曲妥珠單抗治療的指導(dǎo)價(jià)值。方法：選取2013年3月至2014年2月上海長(zhǎng)海醫(yī)院病理科診斷明確的胃腺癌內(nèi)鏡活檢標(biāo)本及相應(yīng)的腫瘤根治手術(shù)切除標(biāo)本167例，并收集相關(guān)臨床病理資料。采用免疫組織化學(xué)（immuno histochemistry，IHC）方法檢測(cè)內(nèi)鏡活檢標(biāo)本的HER-2蛋白表達(dá)情況，用IHC及原位熒光雜交（fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）方法檢測(cè)相應(yīng)腫瘤手術(shù)切除標(biāo)本的HER-2蛋白表達(dá)和基因擴(kuò)增狀況，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，并結(jié)合臨床病理特征進(jìn)行分析。結(jié)果：167例根治標(biāo)本中，共有18例（10.8%）HER-2檢測(cè)呈陽(yáng)性，其中包含10例IHC 3+與8例IHC 2+且FISH+的病例。相對(duì)應(yīng)的內(nèi)鏡活檢標(biāo)本與根治手術(shù)標(biāo)本的IHC檢測(cè)結(jié)果的一致率為82.0%，剔除IHC 2+的樣本后，真陽(yáng)性率和真陰性率分別為73.3%和97.0%。結(jié)論：內(nèi)鏡活檢標(biāo)本HER-2蛋白IHC檢測(cè)具有較好預(yù)測(cè)價(jià)值，根治與活檢標(biāo)本不一致的主要原因是腫瘤表達(dá)的異質(zhì)性。通過(guò)提高內(nèi)鏡活檢標(biāo)本取材數(shù)，并結(jié)合FISH檢測(cè)結(jié)果，可以減少誤判。

關(guān)鍵詞胃腺癌HER-2內(nèi)鏡活檢根治手術(shù)免疫組織化學(xué)熒光原位雜交

作者單位：①第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)員隊(duì)（上海市200433）；②上海長(zhǎng)海醫(yī)院病理科；③第二軍醫(yī)大學(xué)病理學(xué)教研室

胃癌是當(dāng)前威脅人類生存最嚴(yán)重的疾病之一，我國(guó)是胃癌的高發(fā)地區(qū)，發(fā)病率高于歐美，略低于日韓，總例數(shù)居全球第一［1］，且發(fā)現(xiàn)時(shí)多已至晚期，難以行手術(shù)切除，目前尚無(wú)更好的治療手段，生存率較低［2］。研究證實(shí)，酪氨酸激酶受體（RTKs），如HER-1、 HER-2、HER-3等的過(guò)表達(dá)預(yù)示更差的預(yù)后［3］。國(guó)內(nèi)外ToGA研究證實(shí)曲妥珠單抗聯(lián)合化療可改善HER-2陽(yáng)性晚期胃癌患者的生存［4-7］，這項(xiàng)成果已逐步應(yīng)用于臨床。然而，對(duì)于HER-2基因的檢測(cè)，晚期患者只能用內(nèi)鏡活檢標(biāo)本評(píng)估，因此活檢標(biāo)本對(duì)于腫瘤整體HER-2表達(dá)情況評(píng)估的一致性，對(duì)于用藥有重要指導(dǎo)意義。

本研究對(duì)2013年3月至2014年2月上海長(zhǎng)海醫(yī)院收治的167例胃腺癌患者的臨床病理特征、HER-2表達(dá)情況及異質(zhì)性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)估，分析活檢標(biāo)本與術(shù)后標(biāo)本HER-2表達(dá)狀況的一致性，為僅能行內(nèi)鏡活檢而不能行手術(shù)切除的患者提供用藥指導(dǎo)。

1　材料與方法

1.1材料

收集2013年3月至2014年2月上海長(zhǎng)海醫(yī)院病理科診斷明確的胃腺癌內(nèi)鏡活檢標(biāo)本及相應(yīng)的腫瘤根治手術(shù)切除標(biāo)本167例，所有患者術(shù)前未經(jīng)放化療及免疫治療，其中男性104例、女性63例，年齡23～81歲。所有標(biāo)本均經(jīng)10%的中性福爾馬林液固定，石蠟包埋，常規(guī)H&E染色。所有H&E切片均由2名病理醫(yī)生在光鏡下觀察，進(jìn)行病理診斷及分型。

1.2方法

1.2.1免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC）檢測(cè)內(nèi)鏡活檢和根治術(shù)標(biāo)本均使用Leica BONDMAX全自動(dòng)免疫組織化學(xué)儀進(jìn)行HER-2蛋白檢測(cè)，HER-2抗體采用丹麥DAKO公司的A0485（1：400），采用pH=6.0檸檬酸緩沖液熱修復(fù)20 min進(jìn)行抗原修復(fù)。結(jié)果評(píng)價(jià)依照《胃癌HER-2檢測(cè)指南》［8］進(jìn)行。1.2.2熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridiza?tion，F(xiàn)ISH）檢測(cè)根治手術(shù)標(biāo)本使用北京金菩嘉公司的HER-2基因擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒，F(xiàn)ISH檢測(cè)HER-2基因擴(kuò)增狀態(tài)，評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)依照《胃癌HER-2檢測(cè)指南》［8］。

1.3結(jié)果處理及分析

首先，統(tǒng)計(jì)分析根治手術(shù)標(biāo)本IHC與FISH檢測(cè)的HER-2表達(dá)情況，明確最終表達(dá)狀態(tài)，將根治標(biāo)本中IHC 3+或者IHC 2+且FISH+的病例定義為真陽(yáng)性病例。然后分析內(nèi)鏡活檢標(biāo)本與根治手術(shù)標(biāo)本HER-2表達(dá)狀況的差異，以評(píng)估活檢標(biāo)本HER-2表達(dá)狀況與整體HER-2表達(dá)狀態(tài)的一致性。最后，篩選出根治手術(shù)標(biāo)本與內(nèi)鏡活檢標(biāo)本表達(dá)不一致的病例，分析相關(guān)病理信息，查找原因和解決辦法。

2　結(jié)果

2.1根治手術(shù)標(biāo)本HER-2表達(dá)情況

167例患者的根治手術(shù)標(biāo)本HER-2表達(dá)情況，共有10.8%（18/167）HER-2呈陽(yáng)性，其中包含10例IHC 3+與8例IHC 2+且FISH+的病例。根治手術(shù)標(biāo)本FISH與IHC法檢測(cè)的HER-2表達(dá)情況基本一致，F(xiàn)ISH陰性的143例中IHC 0/1+的137例，IHC 2+的6例；FISH陽(yáng)性的21例中只有2例IHC 0/1+，其余病例均為IHC 2+/3+，；FISH可疑的3例被剔除（表1）。

2.2內(nèi)鏡活檢與根治手術(shù)標(biāo)本HER-2評(píng)判結(jié)果的比較

根治手術(shù)標(biāo)本與內(nèi)鏡活檢標(biāo)本的IHC檢測(cè)HER-2表達(dá)差異（表2），一致的病例共計(jì)137例（82.0%），其中包括IHC 0/1+的124例、IHC 2+的4例和IHC 3+的9例。由于活檢標(biāo)本未行FISH檢測(cè)，于是剔除IHC 2+的樣本，將IHC 3+計(jì)為HER-2陽(yáng)性，IHC 0/1+計(jì)為HER-2陰性，計(jì)算結(jié)果顯示內(nèi)鏡活檢標(biāo)本HER-2 IHC檢測(cè)的真陽(yáng)性率為73.3%（11/15），真陰性率為97%（128/132），其陰性評(píng)價(jià)的準(zhǔn)確度優(yōu)于陽(yáng)性評(píng)價(jià)的準(zhǔn)確度。而內(nèi)鏡活檢標(biāo)本IHC 2+共20例，其中根治手術(shù)標(biāo)本HER-2陽(yáng)性的3例，且均為腸型腺癌。

表1　根治標(biāo)本IHC與FISH對(duì)于HER-2檢測(cè)情況的差異　例Table 2　Radical specimen differences during HER-2 detection by IHC and FISH　n

表2　活檢與根治標(biāo)本IHC檢測(cè)情況差異　例Table 3 Biopsy and radical specimen differences during IHC testing n

3　討論

胃癌作為常見(jiàn)惡性腫瘤，對(duì)健康危害極大，我國(guó)胃癌發(fā)病率高，且發(fā)現(xiàn)時(shí)多為進(jìn)展期，難以行手術(shù)切除［9］，因此通過(guò)藥物治療可延長(zhǎng)生存期。近年來(lái)研究表明，曲妥單抗類藥物能顯著延長(zhǎng)HER-2陽(yáng)性胃癌患者的生存時(shí)間［10-12］，但我國(guó)胃癌發(fā)現(xiàn)時(shí)多處于進(jìn)展期，眾多患者只有內(nèi)鏡活檢標(biāo)本，無(wú)法行根治手術(shù)取出完整的腫瘤標(biāo)本評(píng)估。本研究目的是評(píng)估內(nèi)鏡活檢標(biāo)本與根治手術(shù)標(biāo)本HER-2表達(dá)的一致性，并以此指導(dǎo)臨床藥物使用。

本研究首先分析手術(shù)標(biāo)本的陽(yáng)性率與表達(dá)情況，術(shù)后標(biāo)本IHC與FISH法檢測(cè)HER-2表達(dá)結(jié)果基本一致。167例患者共有10.8%（18/167）的根治標(biāo)本HER-2呈陽(yáng)性，略低于ToGA實(shí)驗(yàn)［4］，可能是本研究病例中進(jìn)展期患者較多，略高于國(guó)外實(shí)驗(yàn)［6］，可能與其例數(shù)較少有關(guān)。FISH陰性的143例中IHC 0/1+137例，IHC 2+ 6例，而FISH陽(yáng)性的20例中，只有2例IH 0/1+。所以在對(duì)根治標(biāo)本進(jìn)行最終HER-2結(jié)果評(píng)估時(shí)，F(xiàn)ISH作為IHC 2+病例的輔助判斷標(biāo)準(zhǔn)來(lái)使用，這與國(guó)內(nèi)類似研究一致［13］。

本研究分析內(nèi)鏡活檢標(biāo)本HER-2表達(dá)與根治手術(shù)標(biāo)本HER-2的差異。結(jié)果顯示，IHC方法總的一致性為82.0%（137/167），由于活檢標(biāo)本缺少FISH數(shù)據(jù)，剔除IHC 2+樣本后的真陽(yáng)性率為73.3%（11/15），真陰性率為97.0%（128/132），20例內(nèi)鏡活檢IHC 2+標(biāo)本所對(duì)應(yīng)的根治手術(shù)標(biāo)本HER-2陽(yáng)性為3例。內(nèi)鏡活檢標(biāo)本與根治手術(shù)標(biāo)本HER-2檢測(cè)結(jié)果具有較高的一致性，但真陽(yáng)性率略低，這與國(guó)外研究結(jié)果類似［14］，內(nèi)鏡活檢HER-2陽(yáng)性的患者還需要進(jìn)一步分析，相關(guān)原因可能是胃腫瘤組織HER-2表達(dá)的異質(zhì)性［15］，淺表組織較深部組織HER-2表達(dá)更強(qiáng)。

本研究分析根治手術(shù)與內(nèi)鏡活檢標(biāo)本評(píng)估病例不一致的原因，最終可評(píng)估為8例，由于內(nèi)鏡活檢標(biāo)本取的只是腫瘤表面的一部分組織，腫瘤異質(zhì)性使內(nèi)鏡活檢組織難以反映整體狀況。針對(duì)此現(xiàn)象，國(guó)外學(xué)者建議取更多的（6～8塊）活檢標(biāo)本來(lái)提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度［15］，本研究的內(nèi)鏡活檢標(biāo)本取材塊數(shù)為2～7塊，判斷偏差較大的患者大部分活檢標(biāo)本數(shù)都較少，為2～4塊，這可能是不夠準(zhǔn)確的重要原因。

綜上所述，本研究整體分析胃腺癌內(nèi)鏡活檢標(biāo)本HER-2 IHC檢測(cè)結(jié)果與根治手術(shù)標(biāo)本HER-2檢測(cè)結(jié)果的一致性。內(nèi)鏡活檢標(biāo)本IHC檢測(cè)陰性對(duì)于HER-2陰性的鑒別準(zhǔn)確度較高，但若IHC檢測(cè)結(jié)果為IHC 3+或IHC 2+，由于存在腫瘤表達(dá)異質(zhì)性等原因，還需謹(jǐn)慎判斷。

參考文獻(xiàn)

［1］Jia SJ，F(xiàn)an HM，Liu W，et al.Level and trend of cancer mortality in China，2002～2011［J］.China Cancer，2014，23（12）：999-1004.［賈士杰，范慧敏，劉偉，等.2002～2011年中國(guó)惡性腫瘤死亡率水平及變化趨勢(shì)［J］.中國(guó)腫瘤，2014，23（12）：999-1004.］

［2］Dai ZJ.Researchprogress of HER-2intargetedtherapy of gastric cancer ［J］.Modern Women，2015（5）：276-277.［戴志堅(jiān).HER-2在胃癌靶向治療的研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代婦女：醫(yī)學(xué)前沿，2015（5）：276-277.］

［3］Huang D，Lu N，F(xiàn)an Q，et al.HER-2 status in gastric and gastroesophageal junction cancer assessed by local and central laboratories：Chinese results of the HER-EAGLE study［J］.PloS One，2013，8（11）：e80290.

［4］Shen L.Trastuzumabincombination with chemotherapy versus chemotherapy alone for first- line treatment of HER-2- positive advanced gastric or gastroesophageal junction cancer：a Phase HI，multi- center，randomized controlled trial［J］.Chin J Oncol，2013，35 （4）：295-300.［沈琳.曲妥珠單抗聯(lián)合化療一線治療人表皮生長(zhǎng)因子受體2陽(yáng)性無(wú)法手術(shù)的局部進(jìn)展期或轉(zhuǎn)移性胃或胃食管結(jié)合部腺癌的多中心隨機(jī)對(duì)照Ⅲ期臨床試驗(yàn)中國(guó)亞組報(bào)告［J］.中華腫瘤雜志，2013，35（4）：295-300.］

［5］De SN，Schulz L，Paterson A，et al.Molecular effects of lapatinib in the treatment of HER-2overexpressingoesophago-gastricadenocarcinoma ［J］.Brit Cancer，2015，113（9）：1305-1312.

［6］PARK SR，PARK YS，RYU MH，et al.Extra-gain of HER-2-positive cases through HER-2 reassessment in primary and metastatic sites in advanced gastric cancer with initially HER-2-negative primary tumours：Results of GASTric cancer HER-2 reassessment study 1（GASTHER-1）［J］.Euro J Cancer，2016，53：42-50.

［7］Jomrich G，Schoppmann SF.Targeting HER-2 and angiogenesis in gastric cancer［J］.Expert Revi Anticanc，2015，16（1）：1-54.

［8］Compilation group of "guide for the detection of HER-2 in gastric cancer".Guidelines for HER-2 detection in gastric cancer［J］.Chin J Pathol，2011，40（8）：553-557.［《胃癌HER-2檢測(cè)指南》編寫(xiě)組.胃癌HER-2檢測(cè)指南［J］.中華病理學(xué)雜志，2011，40（8）：553-557.］

［9］Xi LY.Comparative study of endoscopic biopsy and surgical pathology diagnosis of gastric cancer and HER-2 detection［J］.Medi Inno China，2014，11（21）：80-83.［冼麗英.胃鏡活檢與外科病理診斷胃癌及HER-2檢測(cè)的對(duì)比研究［J］.中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2014，11（21）：80-83.］

［10］Segami K，Sato T，Kawabe T，et al.A case of HER-2 positive advanced gastric cancer responding to capecitabine+cisplatin+trastuzumab chemotherapy［J］.Gan to Kagaku Ryoho Cancer & Chemotherapy，2015，42（10）：1295-1297.

［11］Ieni A，Barresi V，Rigoli L，et al.HER-2 Status in Premalignant，Early，and Advanced Neoplastic Lesions of the Stomach［J］.Disease Markers，2015，2015：234851.

［12］Meulendijks D，Beerepoot LV，Boot H，et al.Trastuzumab and bevacizumab combined with docetaxel，oxaliplatin and capecitabine as firstline treatment of advanced HER-2-positive gastric cancer：a multicenter phase II study［J］.Investigational New Drugs，2016，34：1-10.

［13］Zhu XF，Zhao YJ，Liu HF，et al.Combined detection of EGFR and HER-2 in gastric adenocarcinoma by CISH and IHC［J］.Mod Pract Med，2012，24（1）：26-28.［朱獻(xiàn)斐，趙亞娟，劉海芳，等.CISH、IHC聯(lián)合檢測(cè)胃腺癌EGFR、HER-2基因狀態(tài)及其臨床意義［J］.現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2012，24（1）：26-28.］

［14］Chao WR，Lee MY，Ruan A，et al.Assessment of HER-2 Status using immunohistochemistry（IHC）and fluorescence in situ hybridization （fish）techniques in mucinous epithelial ovarian cancer：a comprehensive comparison between ToGA biopsy method and ToGA surgical specimen method［J］.Plos One，2015，10（1）：29-36.

［15］Cappellesso R，F(xiàn)assan M，Hanspeter E，et al.HER-2 status in gastroesophageal cancer：a tissue microarray study of 1040 cases［J］.Human Pathol，2015，46（5）：665-672.

（2016-01-04收稿）

（2016-04-05修回）

（編輯：楊紅欣校對(duì)：孫喜佳）

劉金鑫專業(yè)方向?yàn)槟[瘤病理學(xué)診斷。E-mail：83791663@qq.com

·臨床研究與應(yīng)用·

Consistency analysis of gastric cancer HER-2 expression among endoscopic biopsy and radical operation specimens

Jinxin LIU1，Zhenzhen XIANG2，Jingjing XU2，Chenguang BAI2，3

1The Second Military Medical University，Shanghai 200433，China；2Department of Pathology，Shanghai Changhai Hospital，The Second Military Medical University，Shanghai 200433，China；3Department of Pathology，The Second Military Medical University，Shanghai 200433，China

Correspondence to：Chenguang BAI；E-mail：blk709@sina.com

AbstractObjective：To analyze the consistency of HER-2 expression among endoscopic biopsy and radical operation specimens of gastric adenocarcinoma and to investigate the clinical application value of HER-2 detection in trastuzumab treated patients.Methods：From March 2013 to February 2014，167 patients from Shanghai Changhai Hospital were diagnosed with gastric adenocarcinoma using endoscopic biopsy specimens.The corresponding surgical specimens were collected for pathological analysis.The relevant clinical and pathological data were collected.HER-2 protein expression of endoscopic biopsy specimens was detected by immunohistochemistry （IHC）.HER-2 protein expression and gene amplification status of the corresponding tumor resection specimens were detected by IHC and fluorescence in situ hybridization（FISH）.Results were analyzed for clinicopathological characteristics.Results：Among the 167 cases，18 cases（10.8%）were HER-2 positive，including 10 cases showing IHC3+ and 8 cases showing IHC2+ with FISH positive.The consistency rate result among endoscopic biopsy and surgical operation specimens was 82%.Excluding the cases showing IHC2+，the true positive rate and the true negative rate were 73.3%and 97.0%，respectively.Conclusion：HER-2 detection of endoscopic biopsy specimen by IHC shows great predictive value.The main reason for the difference of surgery and biopsy specimens is the heterogeneity of tumor expression.Increasing the number of specimens and combined testing with FISH are important methods to reduce misjudgement.

Keywords：gastric adenocarcinoma，HER-2，endoscopic biopsy，radical operation，immunohistochemistry，fluorescence in situ hybridization

doi：10.3969/j.issn.1000-8179.2016.10.013

通信作者：白辰光blk709@sina.com

作者簡(jiǎn)介