白秋野　閻秀林

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Sema3A在正畸牙移動免疫組化中作用的研究

白秋野閻秀林

【摘要】目的 探討正畸牙移動骨改建過程中Sema3A表達(dá)的規(guī)律性。方法 將36只wildtype小鼠成功建立正畸牙移動模型后，在上頜左側(cè)施加機(jī)械力（加力組）；上頜右側(cè)未作其他處理（對照組），在建模后第1 d、7 d以及14 d分別處死12只小鼠，制作石蠟組織切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色觀察牙周組織的組織形態(tài)改變。結(jié)果 在建模后第1 d，兩組間牙周組織形態(tài)、OB細(xì)胞數(shù)目無明顯差異；第7 d，加力組牙周組織形態(tài)排列紊亂，OB細(xì)胞數(shù)目高于對照組；在第14 d，兩組間各項(xiàng)觀察指標(biāo)相近，無明顯差異。結(jié)論 Sema3A對于正畸牙移動骨改建過程中重要調(diào)節(jié)作用，其表達(dá)水平具有時空規(guī)律性，建議臨床深入研究。

【關(guān)鍵詞】正畸牙移動；牙周組織改建；骨改建；骨保護(hù)素；Sema3A

作者單位：中國醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院正畸科，遼寧 沈陽 110002

正畸牙移動過程實(shí)質(zhì)為牙槽骨改建過程，在此過程中新骨形成和破骨吸收應(yīng)始終保持動態(tài)平衡。分泌性蛋白Sema3A不僅能夠影響神經(jīng)系統(tǒng)功能，而且被證實(shí)具有介導(dǎo)免疫調(diào)控、參與心血管內(nèi)皮形成、調(diào)節(jié)骨組織改建等多種作用效果［1-3］。本研究通過建立小鼠正畸牙移動模型，旨在明確牙周組織Sema3A表達(dá)變化和規(guī)律性。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物

36只清潔級wildtype（C57BL/6）小鼠，體重18～22 g，鼠齡4～8 W，動物皮毛光澤度佳，反應(yīng)迅速，飲食、二便均正常，且排除疾病鼠。在上頜左側(cè)第一磨牙和切牙間用鎳鈦拉簧施加10～15克力，加力的上頜左側(cè)為加力組，未接受干預(yù)的右側(cè)為對照組。

1.2主要試劑和儀器

水合氯醛、透明二甲苯、兔抗Sema3A多克隆抗體、鎳鈦拉簧、硬組織切片機(jī)、HRP標(biāo)記羊抗兔抗體、正畸專用測力計(jì)、免疫組化試劑盒、防脫玻片以及光學(xué)顯微鏡等。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1建立移動動物模型 wildtype鼠腹腔注射麻醉成功后，將上頜切牙作為支抗，在上頜兩切牙牙槽骨間放一結(jié)扎絲，連接鎳鈦拉簧結(jié)扎剪斷。另選一根結(jié)扎絲在上頜第一、第二磨牙牙槽骨間穿過，順牙頸部繞住第一磨牙，旋緊結(jié)扎絲，把鎳鈦拉簧與上頜第一磨牙固位結(jié)扎絲與連接裝置相連接，保持拉簧力量。每個飼養(yǎng)籠放5只，飼養(yǎng)溫度20℃～25℃，每日換飼料并觀察矯治器情況。

1.3.2觀察指標(biāo) 在建模后第1 d、7 d和第14 d分別處死動物（12只），應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測牙周組織的形態(tài)變化，OB數(shù)目和Sema3A陽性情況（陽性：細(xì)胞內(nèi)現(xiàn)棕黃色顆粒）。顯微鏡下重點(diǎn)觀察牙周纖維排列方式、牙槽骨形態(tài)以及OB數(shù)目。

2　結(jié)果

對照組牙周膜纖維整齊、規(guī)則，在牙槽骨邊緣無骨吸收，偶爾可見成骨細(xì)胞；加力組第1 d，形態(tài)特點(diǎn)、成骨細(xì)胞分布和數(shù)目、Sema3A陽性細(xì)胞數(shù)和對照組幾乎一致；第7 d，膜纖維排列紊亂，膜腔變窄，牙槽骨邊緣可見骨吸收陷窩，成骨細(xì)胞極為豐富，Sema3A陽性細(xì)胞分布廣泛，各指標(biāo)高于對照組（見圖1～2）；在第14 d，加力組牙周膜纖維排列方式、骨吸收陷窩范圍、成骨細(xì)胞數(shù)目、Sema3A陽性細(xì)胞數(shù)再次恢復(fù)至對照組相近水平，不具有顯著性差異。

圖1　7 d對照組　圖2　7 d實(shí)驗(yàn)組

3　討論

由于牙齒移動速度、骨吸收速度以及骨形成情況均能夠影響骨改建治療效果，因此，改善正畸牙移動速度、防止牙槽骨喪失等對于改善正畸牙治療效果極為重要。Sema3A對于骨組織的保護(hù)調(diào)節(jié)作用已經(jīng)得到臨床廣泛認(rèn)可［4-6］，其能夠產(chǎn)生類似于骨保護(hù)素一樣的作用，不僅能夠有效調(diào)控OB分化及其生物學(xué)功能，而且對于OC分化成熟均有重要調(diào)控作用，因此，Sema3A是骨代謝過程中最為重要的調(diào)控因子之一［7-8］，對于骨自穩(wěn)態(tài)和骨重塑具有重要影響。在本實(shí)驗(yàn)中，對照組的牙周組織形態(tài)一直未見明顯改變，雖然細(xì)胞內(nèi)可檢測到OB和Sema3A存在，但是一直為穩(wěn)定低水平；加力組在第1 d時各項(xiàng)指標(biāo)均未見明顯異常，說明在此階段，骨改建尚未開始；在第7 d時，牙槽骨邊緣出現(xiàn)骨吸收，OB數(shù)目和Sema3A陽性表達(dá)大量增多，區(qū)別于對照組，說明此時骨改建活動最為活躍，骨吸收和骨形成同步活躍進(jìn)行，此時是骨重塑的峰值階段；在第14 d，加力組各項(xiàng)指標(biāo)與對照組相近，說明骨改建已經(jīng)基本完成。綜上所述，Sema3A能夠參與調(diào)節(jié)正畸牙骨形態(tài)結(jié)構(gòu)的改建過程，其作為保護(hù)因子，能夠促進(jìn)OB和骨吸收，在骨改建過程中的表達(dá)水平具有時間規(guī)律性，可以作為評價骨改建的標(biāo)記物。

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·護(hù)理研究·

Study on the Effect of Sema3A on the Immunohistochemistry During Orthodontic Tooth Movement

BAI Qiuye YAN Xiulin Orthodontic Department， The affiliated Oral Hospital of China Medical University， Shenyang Liaoning 110002， China

［Abstract］Objective To discuss the regularity of Sema3A expression in bone remodeling of orthodontic tooth movement. Methods 36 wildtype mice were made successful orthodontic tooth movement model， the mechanical stress was applied in the left upper jaw （stress group）， there was no other treatment in right upper jaw （control group）. After modeling in 1 d， 7 d and 14 d， 12 mice were sacrificed， the immunohistochemical staining was used in paraffin tissue sections， the changes of periodontal tissue morphology were observed. Results After modeling for 1 d， there were no significant difference between the two groups in the periodontal tissue morphology and OB cells number. On the 7thday， in stress group，the periodontal tissue morphological disorder， the number of OB cells was significant than control group. On the 14thday， two groups of observed indicators were similar， there was no significant difference. Conclusion Sema3A plays an important regulatory role in orthodontic tooth movement during the process of bone remodeling. The level of expression shows a temporal and spatial regularity. It is recommended to further study.

［Key words］Orthodontic tooth movement， Periodontal tissue remodeling，Bone remodeling， Bone protection element， Sema3A

【中圖分類號】R392

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1674-9308（2016）12-0187-02

doi：10．3969/j．issn．1674-9308．2016．12．134

通訊作者：閻秀林，E-mail：wang_dianming@163．com