李秋宇， 金醒昉

(昆明市延安醫(yī)院重癥醫(yī)學科，云南昆明 650051)

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紅花黃色素A對膿毒癥大鼠血清TNF-α、TF及TFPI的調控和凝血機能的影響

李秋宇， 金醒昉

(昆明市延安醫(yī)院重癥醫(yī)學科，云南昆明 650051)

[摘要]目的：探討紅花黃色素A對盲腸結扎穿孔(cecalligation-perforation，CLP)模型誘導的大鼠早期凝血功能及炎癥反應的作用。方法：健康SD大鼠120只分4組：對照組、假手術組、CLP組(模型組)、CLP+紅花黃色素A組，觀察紅花黃色素A對CLP模型誘導的大鼠膿毒癥時凝血功能的影響及血清中組織因子(tissue factor，TF)及組織因子途徑抑制物(tissue factorpathway inhibitor，TFPI)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-a，TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β)的變化。結果：CLP組與對照組、假手術組相比較，凝血酶原時間(prothrombin time，PT)、活化部分凝血激酶時間(activated partial thromboplastin time，APTT)水平均增加(P<0.05)，CLP+紅花黃色素A組PT及APTT水平較CLP組降低(P<0.05)。CLP組IL1-β、TNF-α、TF、TFPI水平相較于對照組、假手術組均升高(P<0.05)，CLP+紅花黃色素A組IL1-β、TNF-α、TF水平較CLP組增加，TFPI水平較CLP組降低(P<0.05)。結論：紅花黃色素A除了可以改善凝血異常也可以降低炎性反應，安全、有效、易獲取，可成為膿毒癥早期治療及緩解膿毒癥時的臨床輔助藥物。

[關鍵詞]膿毒癥；凝血；紅花黃色素A；TF；TFPI；TNF-α；白介素-1β

1材料與方法

1.1材料健康、雌雄不拘SD大鼠120只，體重140～224 g，購自昆明醫(yī)科大學實驗動物中心，平均體重182 g，于實驗室飼養(yǎng)(通風向陽，新鮮飼料，自由飲水，溫度20～22 ℃，濕度50 %～55 %)。

1.2方法

1.2.1動物模型制備清潔級雄性SD大鼠，適應性飼養(yǎng)1周后，按照Daniel R等[1]報告的方法行盲腸結扎穿孔(cecalligation-perforation，CLP)，復制嚴重腹腔感染致膿毒癥模型。術前禁食12 h，自由飲水。以3 %戊巴比妥腹腔注射(0.12 mL/kg體重)麻醉，麻醉后大鼠，腹正中線切口，暴露盲腸并結扎根部(避免結扎回腸及盲腸系膜血管)，用16號穿刺針貫通穿刺盲腸2次形成腸瘺，并輕輕擠壓，讓小量大便進入腹腔。將盲腸還納腹腔，逐層縫合腹壁切口，術畢立即皮下注射10 mL生理鹽水抗休克，自由飲水。假手術組僅開腹翻動盲腸后關腹。

1.2.2動物的分組及處理健康SD大鼠120只，雌雄各半，按隨機數(shù)字法分成4組：對照組、假手術組、CLP組(模型組)、CLP+紅花黃色素A(20 mg/kg)組。紅花黃色素A于CLP后立即經(jīng)腹腔注射，對照組給予等量生理鹽水。

1.2.3檢測指標及方法TF、TFPI、TNF-α、IL-1β用酶聯(lián)免疫法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒(江萊化學科技(上海)有限公司)測定；凝血功能采用YSMEX凝血分析儀進行分析。

1.3統(tǒng)計學分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料以均數(shù)±標準差表示，多組比較采用方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1紅花黃色素A對膿毒癥大鼠血清PT、APTT水平的影響CLP組與對照組、假手術組相比較，PT、APTT水平均增加(P<0.05)。CLP+紅花黃色素A組PT及APTT水平較CLP組降低(P<0.05)，見表1。

表1　紅花黃色素A對膿毒癥大鼠血清PT、APTT水平的影響

a為與對照組、假手術組相比較P<0.05；b為與CLP組相比較P<0.05

2.2各組大鼠血清IL-1β、TNF-α、TF、TFPI水平的變化CLP組IL1-β、TNF-α、TF、TFPI水平相較于對照組、假手術組均升高(P<0.05)，CLP+紅花黃色素A組IL1-β、TNF-α、TF水平較CLP組增加，TFPI水平較CLP組降低(P<0.05)，見表2。

表2　各組大鼠血清IL-1β、TNF-α、TF、TFPI水平的變化

a為與對照組、假手術組相比較P<0.05；b為與CLP組相比較P<0.05

3討論

膿毒癥病情兇險，病死率高，因此深入研究膿毒癥的發(fā)病機制，尋求新的治療手段是重中之重。膿毒癥病情惡化、造成膿毒性休克、多器官功能障礙綜合征的根本原因是炎癥、凝血與纖溶失衡共同構成內(nèi)環(huán)境紊亂。炎癥和凝血之間錯綜復雜的關系在膿毒癥發(fā)病以及微循環(huán)衰竭和多臟器功能障礙形成巾起到重要作用[2]。在膿毒癥的治療中既要控制促炎反應又要控制促凝反應。紅花是中醫(yī)應用最多的抗凝藥物之一，紅花的主要提取物為紅花黃色素A，紅花黃色素A為一血小板激活因子(platelet activating factor，PAF)受體拮抗劑[3]，可抑制PAF誘發(fā)的家兔血小板黏附、5-羥色胺釋放及血小板內(nèi)游離Ca2+濃度升高，還可抑制ADP誘導的家兔血小板聚集，是紅花黃色素抗血栓機理之一。

本實驗CLP組與其他各組大鼠PT及APTT時間相比均延長，CLP+紅花黃色素A組大鼠PT及APTT時間較CLP組大鼠縮短；CLP+紅花黃色素A組血清TF水平下降，TFPI水平升高，因此紅花黃色素A的應用改善了膿毒癥大鼠的凝血異常，CLP+紅花黃色素A組大鼠血清炎癥因子TNF-α,IL-1β的含量較CLP組大鼠降低，表明在凝血異常改善的同時促炎因子的水平也有所下調。因此，紅花黃色素A的應用可以減緩凝血系統(tǒng)與炎癥系統(tǒng)的相互促進，并且減少多器官功能障礙綜合征的發(fā)生，對膿毒癥時的各臟器損傷有保護作用[4]。

目前對于膿毒癥的研究，炎癥系統(tǒng)與凝血系統(tǒng)的相互作用是最主要的方面，紅花黃色素A除了可以改善凝血異常也可以降低炎性反應，安全、有效、易獲取，可成為膿毒癥早期治療及緩解膿毒癥時的臨床輔助藥物。

參考文獻

[1]Daniel R,L Marco H,Ward P A.The disconnect between animal models of sepsis and human sepsis[J].Journal of Leukocyte Biology,2007,81(1):137-143.

[2]高原，呂長俊.膿毒癥與凝血—炎癥網(wǎng)絡研究進展[J].濱州醫(yī)學院學報，2010，33(1)：60-62.

[3]梁勇，曹書華，王勇強，等.加味涼隔散對膿毒癥患者血小板活化及凝血功能影響的臨床研究[J].遼寧中醫(yī)雜志，2010，37(7)：1289-1291.

[4]潘婭靜,徐敏.血必凈注射液對膿毒血癥患者的臟器保護作用[J].浙江中醫(yī)雜志,2010,45(4):306-307.

(收稿日期：2014-10-14)