王東升+張世棟+苗小樓+董書偉+魏立琴+鄺曉嬌+那立冬+閆寶琪+嚴(yán)作廷

摘要：為了評價(jià)藿芪灌注液的刺激性，為臨床安全用藥提供依據(jù)，采用眼睛刺激性和陰道黏膜刺激性試驗(yàn)進(jìn)行局部刺激性研究。眼睛刺激性試驗(yàn)選擇家兔5只，以左眼為對照結(jié)膜囊內(nèi)滴入生理鹽水0.1 mL，右眼結(jié)膜囊內(nèi)滴入藿芪灌注液0.1 mL，給藥后觀察7 d，考察藿芪灌注液對家兔眼睛的刺激性。陰道黏膜刺激性試驗(yàn)選擇家兔10只，隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對照組，試驗(yàn)組家兔陰道灌注藿芪灌注液2 mL，對照組家兔陰道灌注生理鹽水2 mL，給藥后24 h處死家兔，對家兔陰道進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，評價(jià)其對家兔陰道黏膜的刺激性。結(jié)果表明，藿芪灌注液對家兔眼睛和陰道黏膜無刺激性，說明藿芪灌注液無刺激性。

關(guān)鍵詞：藿芪灌注液；刺激性；陰道；眼睛；家兔

中圖分類號： S858.237.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1002-1302（2016）04-0303-02

不孕癥是奶牛常見的四大疾病之一，由卵巢疾病引起的不孕癥占35%～55%[1]，有些地區(qū)高達(dá)78.5%，而且57.3%為持久黃體和卵巢靜止[2]。近年來，奶牛不孕癥尤其是由卵巢疾病引起的不孕癥的發(fā)病率呈上升趨勢[3-4]。奶牛卵巢疾病常引起奶牛受胎率下降，造成的經(jīng)濟(jì)損失巨大[5]。目前，治療奶牛卵巢疾病引起的不孕癥主要以激素為主，中藥具有療效確切、無殘留、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，對卵巢性不孕癥的療效好，值得開發(fā)利用[6]，雖然我國學(xué)者已研制出許多中藥制劑，但廣泛用于獸醫(yī)臨床的卻甚少[7-9]。藿芪灌注液，別稱催情助孕液，是由淫羊藿、陽起石、丹參等中藥組成的子宮灌注劑，臨床上主要用于治療奶牛卵巢靜止和持久黃體。研究表明，該制劑工藝穩(wěn)定[10]，能提高雌性小鼠機(jī)體雌激素水平和雌孕激素受體基因的表達(dá)量，能增強(qiáng)動物發(fā)情調(diào)節(jié)作用[11]。為了研究制劑的局部刺激性，進(jìn)行藿芪灌注液的家兔眼睛和陰道黏膜刺激性試驗(yàn)，為該制劑在臨床上的安全應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物

健康新西蘭家兔，15只，無任何眼部疾病，體質(zhì)量1.7～2.3 kg，由中牧實(shí)業(yè)股份有限公司蘭州生物制藥廠提供。

1.2 試驗(yàn)藥品

藿芪灌注液，北京中農(nóng)勁騰生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的中試產(chǎn)品，規(guī)格為1 mL相當(dāng)于原生藥1 g，批號為20121001。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 眼睛刺激性試驗(yàn) 選取眼睛無異常的家兔5只，右眼結(jié)膜囊內(nèi)滴入0.1 mL藿芪灌注液，左眼結(jié)膜囊內(nèi)滴入 0.1 mL 生理鹽水作為對照，輕輕拉動下眼瞼，使藥液與眼球充分接觸8～10 s，于滴眼前和滴眼后30、60、90、120 min，24、48 h和第7天，觀察記錄雙眼的局部反應(yīng)情況，主要觀察家兔雙眼角膜是否混濁，虹膜有無充血、出血和腫脹，瞳孔對光有無反應(yīng)，結(jié)膜有無充血、水腫和流分泌物等。按眼刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)對角膜、虹膜及結(jié)膜分別進(jìn)行評分，總和作為綜合評分，計(jì)算平均值，對家兔的左右眼評分進(jìn)行比較，按眼刺激性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)作出判定。即0～3.9分為無刺激性，4～8.9分為輕度刺激性，9～12.9分為中度刺激性，13～16分為強(qiáng)度刺激性[12]（表1）。

1.3.2 陰道黏膜刺激性試驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[13]方法。試驗(yàn)前先檢查家兔陰道口有無充血、水腫、炎癥、分泌物或其他損傷，選取陰道無異常雌性家兔10只，隨機(jī)分為2組，每組5只。試驗(yàn)組將2 mL藿芪灌注液輕輕注入家兔陰道內(nèi)，保持家兔倒立5 min，使藥液與陰道黏膜充分接觸；對照組同法灌注生理鹽水。24 h后處死家兔，取出陰道組織，觀察黏膜有無充血、出血、紅腫等現(xiàn)象，將陰道組織在10%福爾馬林中固定，做石蠟切片，HE染色，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

2 結(jié)果與分析

2.1 眼睛刺激性試驗(yàn)

從表1可見，給藥后30、60、90 min家兔眼刺激性反應(yīng)得分右眼分別為0.6、0.4、0.2，左眼分別為0.4、0.2、0，左、右眼分別在60、90 min內(nèi)結(jié)膜有輕微充血現(xiàn)象，120 min 內(nèi)恢復(fù)正常，按眼刺激性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，藿芪灌注液對家兔眼睛無刺激性。

2.2 陰道黏膜刺激性試驗(yàn)

24 h后處死家兔，取出陰道組織觀察，結(jié)果黏膜無充血、出血、紅腫等現(xiàn)象。陰道組織病理學(xué)檢查，黏膜上皮完整，黏膜層、肌層結(jié)構(gòu)清晰，上皮細(xì)胞形態(tài)正常，無炎性細(xì)胞浸潤，血管無充血和水腫，表明藿芪灌注液對家兔陰道黏膜無刺激性（圖1至圖4）。

3 結(jié)論與討論

藿芪灌注液對家兔眼睛刺激性和陰道黏膜刺激性試驗(yàn)表明，藿芪灌注液無刺激性。刺激性是非口服給藥制劑對給藥部位產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)或組織損傷。局部刺激性試驗(yàn)是考察動物的血管、肌肉、皮膚、黏膜等部位接觸受試物后是否引起紅腫、充血、滲出、變性或壞死等局部反應(yīng)。目前，國際上最常用的家兔眼刺激性試驗(yàn)為Draize眼部刺激試驗(yàn)法，常以此為基礎(chǔ)進(jìn)行單次、多次和持續(xù)性刺激試驗(yàn)，以便全面研究滴眼劑等制劑的刺激性[14]。為此，本試驗(yàn)先進(jìn)行了家兔的眼刺激性試驗(yàn)，通過對試驗(yàn)家兔7 d的觀察和綜合評分表明，藿芪灌注液對家兔眼睛無刺激性。陰道黏膜既是一道抵御病菌感染的天然屏障，又是長期與細(xì)菌、病毒等接觸而成為多種致病因素進(jìn)入體內(nèi)的部位，通過陰道刺激性試驗(yàn)，對與陰道黏膜接觸的物品進(jìn)行安全性檢驗(yàn)極其重要[15]。家兔陰道對刺激的敏感性高，符合安全性評價(jià)的試驗(yàn)?zāi)康?，也是美國食品藥品管理局確定的陰道刺激性試驗(yàn)的試驗(yàn)動物，而且操作相對簡便、經(jīng)濟(jì)。試驗(yàn)中應(yīng)以組織病理學(xué)檢查結(jié)果為主要診斷依據(jù)進(jìn)行綜合判斷。藿芪灌注液的給藥方式是子宮灌注，子宮內(nèi)膜是由黏膜組織構(gòu)成的。因此，本試驗(yàn)在對家兔眼睛刺激性試驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，利用陰道黏膜刺激性試驗(yàn)進(jìn)一步評價(jià)藿芪灌注液的刺激性，考察陰道黏膜接觸藿芪灌注液后黏膜的充血、炎癥反應(yīng)等情況，結(jié)果藿芪灌注液對家兔陰道黏膜無刺激性，這為該制劑的臨床安全應(yīng)用提供了依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]張俊秀. 奶牛的繁殖障礙及對策[J]. 北方牧業(yè)：奶牛，2007（9）：42-43.

[2]羅瑞卿，谷新利. 促孕散治療奶牛卵巢疾病性不孕癥的研究[J]. 石河子大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2009，27（4）：455-457.

[3]Walsh S W，Williams E J，Evans A C O. A review of the causes of poor fertility in high milk producing dairy cows[J]. Animal Reproduction Science，2011，123（3/4）：127-138.

[4]Lucy M C. Reproductive loss in high-producing dairy cattle：where will it end？[J]. Journal of Dairy Science，2001，84（6）：1277-1293.

[5]López-Gatius F. Is fertility declining in dairy cattle？ a retrospective study in northeastern Spain[J]. Theriogenology，2003，60（1）：89-99.

[6]梁光華，鄧 敏，劉賢俠，等. 促孕散對持久黃體和卵巢靜止奶牛血清生殖激素的影響[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，45（15）：3182-3188.

[7]羅瑞卿，谷新利. 中藥治療奶牛不孕癥[J]. 中國奶牛，2008

（10）：67-69.

[8]楊炳杰，張盼鋒，蘇惠龍，等. 奶牛卵泡囊腫病因及診療研究進(jìn)展[J]. 動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008，29（10）：90-93.

[9]王東升，嚴(yán)作廷，李世宏，等. 治療奶牛卵巢疾病性不孕癥中藥制劑研究進(jìn)展[J]. 中國奶牛，2011（22）：35-38.

[10]王東升，張世棟，李世宏，等. 正交試驗(yàn)法優(yōu)化催情助孕液制備工藝[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2012，28（29）：75-78.

[11]張世棟，王旭榮，楊 峰，等. 催情助孕液對小鼠雌、孕激素水平及其受體mRNA表達(dá)的影響[J]. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，33（7）：1127-1131.

[12]中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局. 中藥新藥研究指南[M]. 北京：中華人民共和國衛(wèi)生部，1994.

[13]呂秋軍. 新藥藥理學(xué)研究方法[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2007.

[14]劉 洋，李 志，郭新紅，等. 阿奇霉素滴眼劑的制備及質(zhì)量控制[J]. 中國藥房，2014，25（33）：3131-3133.

[15]金 毅，王 平，王曉煒，等. 陰道刺激性試驗(yàn)的動物實(shí)驗(yàn)研究[J]. 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，46（3）：235-237.何 蕾，王 璐，惠秀娟，等. 鹽酸小檗堿對小鼠肝、脾、腎細(xì)胞DNA損傷的比較研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，44（4）：305-307.