祝艷華，張登輝，鄭紅星，車清明，張 忠*（. 甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，甘肅 武威　733006；. 陜西理工學(xué)院，陜西 漢中　73399）

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復(fù)方中藥-益生菌制劑對(duì)雛雞大腸桿菌、沙門氏菌抑制作用的研究

祝艷華1*，張登輝1，鄭紅星2，車清明1，張 忠1**
（1. 甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，甘肅 武威733006；2. 陜西理工學(xué)院，陜西 漢中723399）

摘要：將200羽雛雞，隨機(jī)分入4個(gè)試驗(yàn)組（紅白各半）：復(fù)方中藥制劑組（Ⅰ組）、復(fù)方益生菌制劑組（Ⅱ組）、復(fù)方中藥-益生菌制劑組（Ⅲ組）、對(duì)照組（Ⅳ組），進(jìn)行為期42 d的試驗(yàn)，比較各處理方法對(duì)雛雞腸道大腸桿菌及沙門氏菌的影響。結(jié)果表明：試驗(yàn)初期復(fù)方益生菌制劑單獨(dú)應(yīng)用對(duì)雞腸道大腸桿菌及沙門氏菌抑制作用優(yōu)于復(fù)方中藥制劑組及復(fù)方中藥-益生菌制劑組；試驗(yàn)后期復(fù)方中藥與從健康白牦牛腸道內(nèi)分離純化得到的枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌復(fù)方益生菌制劑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)雞腸道大腸桿菌及沙門氏菌有極明顯的抑制作用。

關(guān)鍵詞：雛雞；大腸桿菌；沙門氏菌；復(fù)方制劑

**通信作者：張忠（1979- ），男，甘肅古浪縣人，碩士，主要從事畜牧獸醫(yī)教學(xué)及研究工作。

隨著生活水平的逐步提高，人類對(duì)畜禽產(chǎn)品的需求已經(jīng)不僅僅是數(shù)量上的滿足，而對(duì)其品質(zhì)提出了更多更高的要求。然而在目前集約化養(yǎng)殖模式中，環(huán)境污染嚴(yán)重，同時(shí)疾病防治上大量使用抗生素，由此引發(fā)了一系列社會(huì)危害［1］。如何調(diào)節(jié)好養(yǎng)殖環(huán)境、解決并提高畜禽的抗病能力，改善群體免疫力及提高畜禽的生產(chǎn)性能成為研究的熱點(diǎn)。中藥含有豐富的氨基酸、礦物質(zhì)和維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，能平衡和完善畜禽日糧，所含的生物活性物質(zhì)具有抗菌、抗應(yīng)激、抗氧化和增強(qiáng)免疫的作用。益生素可提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能，提高飼料轉(zhuǎn)化率，增強(qiáng)動(dòng)物抗病能力［2］。本文研究了復(fù)方中藥制劑與微生態(tài)制劑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)雛雞腸道有害菌的抑制作用，以期為中藥-益生菌制劑在臨床用于防治生態(tài)雞常見細(xì)菌性疾病的推廣應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1益生菌制劑

復(fù)方益生菌制劑系從天祝健康白牦牛腸道內(nèi)提取并進(jìn)行分離純化，并由本院動(dòng)物微生物實(shí)驗(yàn)室自制。主要由枯草芽孢桿菌及嗜酸乳桿菌（活菌含量≥30×108cfu/g）組成。

1.2復(fù)方中藥制劑

采用傳統(tǒng)水煎法，將白頭翁、黃連、黃柏、秦皮、黃芪、淫羊藿、山楂用蒸餾水洗凈，浸泡，加8～10倍量蒸餾水煎煮30 min，然后再加8～10倍量蒸餾水煎煮30 min，合并濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀75 ℃濃縮至1 g/mL，滅菌，4 ℃保存［3］。

1.3試驗(yàn)動(dòng)物

1日齡肉雜雛雞200羽，其中白肉雜（父本為艾維茵父母代肉種雞，母本為商品代海蘭褐蛋雞）100羽，紅肉雜（父本為安卡紅父母代肉種雞，母本為商品代海蘭褐蛋雞）100羽，由甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院種雞場(chǎng)提供。

1.4培養(yǎng)基

伊紅美藍(lán)（EMB）培養(yǎng)基、麥康凱（MCA）培養(yǎng)基由本研究室按常規(guī)方法制備，培養(yǎng)基滅菌后置4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5試驗(yàn)雞分組與處理

1日齡肉雜健康雛雞200羽，隨機(jī)分為4組（紅白各半），分別為復(fù)方中藥制劑組（Ⅰ組）、復(fù)方益生菌制劑預(yù)防組（Ⅱ組）、復(fù)方中藥-益生菌制劑組（Ⅲ組）及對(duì)照組（Ⅳ組），每組50羽。各組雞自由采食和飲水，且嚴(yán)格按照蛋雛雞（0～6周齡）飼養(yǎng)管理辦法進(jìn)行，試驗(yàn)期為42 d。從1日齡開始，Ⅰ組在雞飼料中添加預(yù)防量的復(fù)方中藥制劑，按1.5 mL/（羽?d）濃縮液（按1.2制備）混于飼料中飼喂；Ⅱ組在雞飼料中添加0.25 %的復(fù)方益生菌制劑（活菌總數(shù)≥3.0×108cfu/g）；Ⅲ組在雞飼料中添加1.5 mL中藥濃縮液及0.25 %的復(fù)方益生菌制劑（活菌總數(shù)≥3.0×108cfu/g）。

1.6樣品采集與處理

分別于試驗(yàn)的第7、21和42天采集試驗(yàn)雞糞便。取新鮮糞便1.0 g 放于盛有10 mL滅菌水的試管內(nèi)，振搖成均勻的菌懸液，制成1∶10的稀釋液，10倍遞增稀釋。根據(jù)要求或?qū)颖镜墓烙?jì)，選擇2～3個(gè)適宜稀釋度（以長(zhǎng)30～100個(gè)菌落為宜）吸取該稀釋度0.2 mL稀釋液分別置于EMB培養(yǎng)基、MCA培養(yǎng)基內(nèi)，每個(gè)稀釋度作3個(gè)平皿。用無(wú)菌玻璃棒將稀釋液均勻涂布于整個(gè)培養(yǎng)基上，翻轉(zhuǎn)平板，置于（36±1） ℃的溫箱內(nèi)培養(yǎng)（24±2） h后取出，分別計(jì)算平板內(nèi)大腸桿菌數(shù)和沙門氏菌落數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)，即得每克樣品所含活菌數(shù)（結(jié)果以對(duì)數(shù)均值log10cfu/g內(nèi)容物表示）。

1.7細(xì)菌的判定

細(xì)菌的判定方法參考《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》。

1.8數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Microsoft Excel軟件整理，SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，并進(jìn)行LSD法多重比較，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2　結(jié)果與分析

2.1結(jié)果

由表1可見，與對(duì)照組相比，不同處理組不同程度地影響了雞各階段腸道的微生物菌群數(shù)。（1）給藥7 d后，復(fù)方中藥制劑組的大腸桿菌數(shù)與對(duì)照組比較無(wú)明顯變化，復(fù)方益生菌制劑組、復(fù)方中藥-益生菌制劑組與對(duì)照組比較，大腸桿菌數(shù)有一定的減少，但差異不顯著；與對(duì)照組比較，各試驗(yàn)組的沙門氏菌數(shù)與對(duì)照組比較差異不顯著。（2）給藥21 d后，與對(duì)照組比較，復(fù)方中藥制劑組的大腸桿菌數(shù)與對(duì)照組比較有減少的趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05），復(fù)方中藥-益生菌制劑組的大腸桿菌數(shù)顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），復(fù)方益生菌制劑組的大腸桿菌數(shù)與對(duì)照組比較差異極顯著（P＜0.01）；與對(duì)照組比較，復(fù)方中藥制劑組的沙門氏菌數(shù)與對(duì)照組比較有減少的趨勢(shì)，差異不顯著（P＞0.05），復(fù)方益生菌制劑組、復(fù)方中藥-益生菌制劑組的沙門氏菌數(shù)顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。（3）給藥42 d后，與對(duì)照組比較，復(fù)方中藥制劑組、復(fù)方益生菌制劑組的大腸桿菌數(shù)與對(duì)照組比較差異顯著（P＜0.05），復(fù)方中藥-益生菌制劑組的大腸桿菌數(shù)顯著低于對(duì)照組，差異極顯著（P＜0.01）；與對(duì)照組比較，復(fù)方中藥制劑組、復(fù)方益生菌制劑組的沙門氏菌數(shù)與對(duì)照組比較差異顯著（P＜0.05），復(fù)方中藥-益生菌制劑組的沙門氏菌數(shù)與對(duì)照組比較差異極顯著（P＜0.01）。

綜上可見，飼料中添加中藥及益生菌的復(fù)方制劑，可在不同時(shí)間段、不同程度抑制雞腸道中大腸桿菌和沙門氏菌生長(zhǎng)。

2.2分析與討論

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)雛雞從1日齡開始在飼料中添加復(fù)方中藥、復(fù)方益生菌制劑、復(fù)方中藥-益生菌制劑，并進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)隨著日齡的增長(zhǎng)復(fù)方中藥與益生菌制劑的協(xié)同作用越明顯，21日齡單純使用復(fù)方益生菌制劑對(duì)雞腸道內(nèi)大腸桿菌和沙門氏菌的抑制作用明顯，42日齡復(fù)方中藥與益生菌制劑聯(lián)合應(yīng)用，對(duì)雞腸道大腸桿菌及沙門氏菌有抑制作用明顯。這主要是因?yàn)榧仪菽c道菌的組成和結(jié)構(gòu)具有其明顯的特點(diǎn)，剛出殼的雛雞腸道內(nèi)無(wú)菌，隨著攝食的開始細(xì)菌總數(shù)也呈急劇增加，7日齡時(shí)小腸部位的菌群已基本形成，到25日齡時(shí)盲腸內(nèi)菌群才能建立。正常菌群在雛雞消化道完成定植過(guò)程需要30 d左右［4，5］。本試驗(yàn)選擇雛雞作為研究對(duì)象，因其腸道菌群尚未穩(wěn)定，內(nèi)服有益菌能顯著提高腸道中的優(yōu)勢(shì)菌群數(shù)量，抑制有害菌的生長(zhǎng)，改善菌群結(jié)構(gòu)。

復(fù)方中藥選用加味白頭翁湯，其中白頭翁具有清熱、解毒、涼血作用，對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏桿菌等都有抑制作用；秦皮澀腸清熱，對(duì)痢疾桿菌、傷寒桿菌等都有較強(qiáng)的抑制作用［6，7］；黃柏、黃連清熱燥濕、解毒，是廣譜抗菌藥物，黃芪、淫羊藿能提高免疫功能，增強(qiáng)體質(zhì)；山楂有助于改善消化機(jī)能、促進(jìn)食欲?！酢?/p>

參考文獻(xiàn)：（7篇，略）

中圖分類號(hào)：S855.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1001-0769(2016)05-0084-02

基金項(xiàng)目：甘肅省青年科技基金計(jì)劃（1308RJYH084）；甘肅省教育廳2013年甘肅省高等學(xué)校第二批科研項(xiàng)目（2013B-120）；甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院院列專項(xiàng)基金項(xiàng)目（2012GMGY008）。

*作者簡(jiǎn)介：祝艷華（1977- ），女，內(nèi)蒙古赤峰人，碩士，講師，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，主要從事畜牧獸醫(yī)教學(xué)及研究工作。