楊娟娟

(臨汾市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山西臨汾 041000)

·臨床研究·

美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特IMMAGE800特種蛋白儀性能評(píng)價(jià)

楊娟娟

(臨汾市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山西臨汾 041000)

摘要:目的通過(guò)評(píng)價(jià)美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特IMMAGE800特種蛋白儀的性能，提高實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力和效率，為醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可提供可靠試驗(yàn)數(shù)據(jù)。方法參照CLSI對(duì)IMMAGE800特種蛋白儀的精密度、準(zhǔn)確度、線性試驗(yàn)、攜帶污染率及參考范圍進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果IMMAGE800特種蛋白儀8個(gè)項(xiàng)目的批內(nèi)精密度變異系數(shù)、總不精密度變異系數(shù)小于評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，準(zhǔn)確度驗(yàn)證小于廠家聲明，抗鏈O(ASO)、類風(fēng)濕因子(RF)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、IgA、IgG、IgM呈線性而C3、C4呈非線性。各測(cè)定項(xiàng)目的攜帶污染率均小于0.05%，屬于可接受范圍，參考范圍驗(yàn)證通過(guò)。結(jié)論IMMAGE800特種蛋白儀具有良好的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、攜帶污染率小，參考范圍符合本實(shí)驗(yàn)室，完全可以滿足臨床實(shí)驗(yàn)室要求。

關(guān)鍵詞:精密度；準(zhǔn)確性；線性試驗(yàn)；攜帶污染率；參考范圍

IMMAGE800特種蛋白儀是一款自動(dòng)化程度高、操作簡(jiǎn)便且故障率較低的儀器，通過(guò)速率散射比濁法進(jìn)行測(cè)量,根據(jù)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)，需進(jìn)行IMMAGE800的檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行性能評(píng)價(jià)。檢測(cè)系統(tǒng)性能評(píng)價(jià)是醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的重要內(nèi)容，檢測(cè)系統(tǒng)未經(jīng)評(píng)價(jià)和驗(yàn)證直接應(yīng)用有可能會(huì)降低其性能的可靠性和有效性[1]。儀器的分析性能達(dá)到臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)后才可用于患者的檢測(cè)[2]。

1資料與方法

1.1儀器美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特IMMAGE800特種蛋白儀。

1.2試劑IMMAGE800特種蛋白儀所用試劑為配套試劑，試劑批號(hào)為：抗鏈O(ASO)，M408008；類風(fēng)濕因子(RF)，M501021；C反應(yīng)蛋白(CRP)，M410280；IgA，M409246；IgG，M408071；IgM， M404011；C3，M309352；C4，M409210；血清學(xué)質(zhì)控品批號(hào)為M407012；蛋白質(zhì)控品批號(hào)為M407012；定標(biāo)液CAL1批號(hào)為M312002，定標(biāo)液CAL5 批號(hào)為M402019。

1.3標(biāo)本標(biāo)本為本院門診和住院患者的新鮮靜脈血清(無(wú)抗凝劑負(fù)壓管3～5 mL)，離心3 000 r/min離心5 min，標(biāo)本無(wú)溶血、黃疸和脂血，含相應(yīng)檢測(cè)項(xiàng)目高、中、低3個(gè)水平。BECKMAN原裝質(zhì)控及定標(biāo)液。對(duì)儀器進(jìn)行常規(guī)維護(hù)保養(yǎng)，每日室內(nèi)質(zhì)控均在控。

1.4方法

1.4.1精密度驗(yàn)證取新鮮患者血清包含高、中、低值的混合血清，每天重復(fù)測(cè)定4次，連續(xù)測(cè)定5 d，計(jì)算均值(M)、批內(nèi)和批間總不精密度[3]。按照衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心全國(guó)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)計(jì)劃特種蛋白項(xiàng)目25%的可接受范圍，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室的自身情況，以批內(nèi)和批間均小于1/4總可允許范圍為判斷標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)IMMAGE800特種蛋白儀8個(gè)項(xiàng)目的精密度[4-5]。

1.4.2準(zhǔn)確性驗(yàn)證按照CLSI EP15-A2文件要求，使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確性驗(yàn)證[6]。每天重復(fù)測(cè)定2次，連續(xù)測(cè)定5 d。根據(jù)10次測(cè)量值計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差及相對(duì)偏差的絕對(duì)值。與廠家聲明比較，校準(zhǔn)品測(cè)定均值與標(biāo)示值比較，相對(duì)偏差小于或等于10%，則認(rèn)為試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以證實(shí)準(zhǔn)確度，否則不能夠證實(shí)。

1.4.3線性試驗(yàn)分別取ASO、RF、CRP、IgM、IgA、IgG、C3、C4測(cè)定接近預(yù)期上限的高值血清各一份，分別按100%、80%、60%、40%、20%的比例進(jìn)行稀釋，每個(gè)稀釋度重復(fù)測(cè)定4次，將實(shí)測(cè)與理論值比較(偏離小于10%)，實(shí)測(cè)值作為Y值，理論值作為X值，作X-Y坐標(biāo)圖，對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多項(xiàng)式回歸分析處理，利用擬合的二次多項(xiàng)式系數(shù)b2，和3次多項(xiàng)式模型系數(shù)b2、b3與0比較，P>0.05時(shí)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明線性良好，P<0.05時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，屬于非線性。

1.4.4攜帶污染率試驗(yàn)高值標(biāo)本對(duì)低值標(biāo)本的污染，取RF為1 180 U/mL的高濃度標(biāo)本，及低濃度標(biāo)本RF為24 U/mL，制備成5份標(biāo)本。按照低高交叉的順序重復(fù)測(cè)定3次(H1、L1、H2、L2、H3、L3、H4、L4、H5、L5)，按下面公式計(jì)算污染率：Ki=(CiL-C0)/3×CH，標(biāo)本針攜帶污染率為K1到K5的平均值，C0為低值標(biāo)本測(cè)定5次的均值，CH為高值標(biāo)本測(cè)定5次的均值，CiL為低濃度標(biāo)本序號(hào)。以低于0.05%為符合要求。

1.4.5參考范圍驗(yàn)證參照CLSI C28-A2文件中提供的方法，選擇20例正常健康成人標(biāo)本，在保證儀器運(yùn)行良好的情況下隨機(jī)測(cè)量ASO、RF、CRP、IgM、IgA、IgG、C3、C4[7]，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)算r值(落在參考范圍內(nèi)的標(biāo)本數(shù)/總的試驗(yàn)標(biāo)本數(shù))，要求r>0.9，若r<0.9，重新選擇20例參考人體，計(jì)算r值，r>0.9則可以接受，若r<0.9重新檢查操作系統(tǒng)，如果操作沒(méi)有問(wèn)題，則認(rèn)為該參考區(qū)間不適合于本實(shí)驗(yàn)室，需要重新建立參考區(qū)間。

2結(jié)果

2.1精密度驗(yàn)證ASO、RF、CRP、IgM、IgA、IgG、C3、C4批內(nèi)精密度與總不精密度均小于1/4總可允許范圍，按照衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心全國(guó)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)計(jì)劃特種蛋白項(xiàng)目25%的可接受范圍(即實(shí)驗(yàn)室的判斷標(biāo)準(zhǔn)為1/4×25%=6.25%)，8個(gè)項(xiàng)目均符合要求。見(jiàn)表1。

表1　　不同標(biāo)本精密度驗(yàn)證結(jié)果

2.2準(zhǔn)確性驗(yàn)證校準(zhǔn)品CAL1測(cè)定的IgM、IgA、IgG、C3、C4的相對(duì)偏差分別為1.03%、1.14%、1.89%、1.50%、1.03%，小于廠家聲明(小于10%)，校準(zhǔn)品CAL5測(cè)定ASO、RF、CRP的相對(duì)偏差分別為1.58%、1.00%、2.87%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于廠家聲明。所以準(zhǔn)確度通過(guò)驗(yàn)證。見(jiàn)表2。

2.3線性范圍驗(yàn)證患者高值血清ASO 為5 420 U/mL，進(jìn)行100%、80%、60%、40%、20%稀釋，重復(fù)測(cè)定四次，測(cè)定值(Y)與計(jì)算值(X)作圖，計(jì)算r2值為0.9 943，b2為-0.198，三次多項(xiàng)式模型系數(shù)b2、b3分別為0.034、-0.018，與0比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；方法同上，患者高值血清RF為3 312 U/mL ，r2值為0.9 938；患者高值血清CRP為204 mg/L，r2值為0.991 2；IgA高值29.40 g/L，r2值為0.990 9；IgG高值為68.7 g/L，r2值為0.991 8 ；IgM高值為6.77 g/Lr2值為0.979；二次多項(xiàng)式系數(shù)b2，三次多項(xiàng)式模型系數(shù)b2，b3與0比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；判斷以上項(xiàng)目檢測(cè)系統(tǒng)均呈線性。C3高值為2.54 g/L，r2值為0.930 9；C4高值為0.87 g/L，r2值為0.879；C3、C4項(xiàng)目r2<0.95，呈非線性。見(jiàn)表3。

表2　　各標(biāo)本準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果

表3　　各標(biāo)本線性范圍驗(yàn)證結(jié)果

2.4攜帶污染驗(yàn)證取高濃度標(biāo)本及低濃度標(biāo)本進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算高濃度標(biāo)本對(duì)低濃度標(biāo)本的污染率。高濃度標(biāo)本濃度為1 180 U/mL，低濃度標(biāo)本的濃度為24 U/mL，按照低高交叉的順序進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算攜帶污染率。高值測(cè)定的平均值為1 208 U/mL，低值測(cè)定的平均值為24 U/mL。按照公式計(jì)算污染率：Ki=(CiL-C0)/3×CH。加樣針的攜帶污染率為0.025%，小于0.05%為符合要求。

2.5參考范圍驗(yàn)證隨機(jī)抽取健康成人20例，進(jìn)行ASO、RF、CRP、IgA、IgG、IgM、C3、C4測(cè)定，測(cè)定結(jié)果與成人參考范圍進(jìn)行對(duì)比，計(jì)算R值(R值為落在參考范圍內(nèi)的標(biāo)本數(shù)/總的試驗(yàn)標(biāo)本數(shù))ASO、RF、CRP、IgA、IgG、IgM測(cè)定的20組數(shù)據(jù)均落在參考值范圍內(nèi)R值均為1.0；而C3有2組數(shù)據(jù)低于參考值范圍，R值為0.9；C4有1組數(shù)據(jù)低于參考值范圍，R值為0.95，所有結(jié)果均符合要求。見(jiàn)表4。

表4　　成人參考范圍結(jié)果驗(yàn)證

3討論

隨著檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展、項(xiàng)目的不斷增加、儀器及試劑品種繁多，檢驗(yàn)質(zhì)量的控制變得越來(lái)越重要。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)于醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理要求主要是以美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)法案修正案(CLIA′88)、美國(guó)病理學(xué)家協(xié)會(huì)(CAP)的實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可計(jì)劃以及國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織制定的標(biāo)準(zhǔn)ISO15189醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可為主[8]。醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可管理強(qiáng)調(diào)臨床實(shí)驗(yàn)室必須有計(jì)劃地定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的檢測(cè)系統(tǒng)參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證[9]。本實(shí)驗(yàn)按照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織ISO15189質(zhì)量體系認(rèn)可要求，通過(guò)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)已使用8年的IMMAGE800特種蛋白儀進(jìn)行驗(yàn)證。

檢測(cè)系統(tǒng)中最主要、最基礎(chǔ)的分析性是精密度和準(zhǔn)確度。精密度是首先完成的評(píng)價(jià)，在重復(fù)性良好的情況下完成其他試驗(yàn)，否則評(píng)價(jià)缺乏基本保證[10]。CLIS為檢測(cè)系統(tǒng)的不同分析性能提供了各種評(píng)價(jià)驗(yàn)證方案，EP15主要用于評(píng)價(jià)與驗(yàn)證臨床實(shí)驗(yàn)室定量分析方法的精密度和準(zhǔn)確度，方法簡(jiǎn)單、方便，適用于日常和單個(gè)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的驗(yàn)證評(píng)價(jià)[11]。參照CLIS EP15-A2文件，對(duì)IMMAGE800特種蛋白儀測(cè)試的8個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行精密度性能分析，結(jié)合試驗(yàn)室自身?xiàng)l件，將評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)按照衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)特種蛋白項(xiàng)目的可接受范圍1/4標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。試驗(yàn)結(jié)果，8個(gè)項(xiàng)目的批內(nèi)精密度和總不精密度均小于評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，精密度符合臨床要求。

準(zhǔn)確度是檢測(cè)系統(tǒng)中另一項(xiàng)非常重要的性能評(píng)價(jià)指標(biāo)，是其他性能評(píng)估試驗(yàn)的基礎(chǔ)。按照CLSI EP15-A2文件要求，使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確性驗(yàn)證。結(jié)果顯示，IMMAGE800特種蛋白儀上的8個(gè)項(xiàng)目的相對(duì)偏差遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于廠家聲明，準(zhǔn)確度性能完全符合臨床要求。

按照EP6-A方案，采用多項(xiàng)式回歸方法評(píng)價(jià)儀器的線性，結(jié)果顯示ASO、RF、CRP、IgG、IgM、IgA 6個(gè)項(xiàng)目在給定的范圍內(nèi)呈線性。而C3、C4呈非線性，原因可能為：C3、C4的檢測(cè)范圍較小，稀釋增加了基質(zhì)效應(yīng)，故在日常工作中，C3、C4稀釋后的結(jié)果是不可靠的。

在臨床工作中，高值標(biāo)本對(duì)低值標(biāo)本的攜帶污染不容小覷，IMMAGE800特種蛋白儀標(biāo)本針攜帶污染率為0.025%，小于0.05%，可滿足臨床需求，不影響加樣順序。

由于種族不同、區(qū)域不同、人群分布不同、人群生活習(xí)慣不同，故應(yīng)建立適合本實(shí)驗(yàn)室的參考值范圍；首先根據(jù)說(shuō)明書的健康成人參考值范圍進(jìn)行驗(yàn)證，隨機(jī)選擇20位健康成人，驗(yàn)證參考值范圍；經(jīng)驗(yàn)證，參考值符合要求。故認(rèn)為可以使用廠家的參考值范圍。

通常一個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)用到臨床之前，實(shí)驗(yàn)室必須對(duì)其進(jìn)行性能驗(yàn)證，最主要的性能指標(biāo)包括精密度、準(zhǔn)確度、檢測(cè)線性范圍以及參考范圍是否符合當(dāng)?shù)厝巳篬12]。IMMAGE800雖然不屬于新的檢測(cè)系統(tǒng)，但因?yàn)槭褂媚晗揲L(zhǎng)達(dá)8年，故也需要進(jìn)行性能驗(yàn)證。根據(jù)驗(yàn)證結(jié)果，證明該儀器在按時(shí)按需進(jìn)行保養(yǎng)情況下，可保持良好的工作狀態(tài)。

參考文獻(xiàn)

[1]Ledue TB,Collins MF,Ritchie RF.Development of immunoturbidimetric assays for fourteen human serum proteins on the Hitachi 912[J].Clin Chem Lab Med,2002,40(5):520-528.

[2]National Committee for Clinical Laboratory Standards.Method comparison and bias estimation using patient sample;approved guideline[S].EP9-A,NCCLS,1986.

[3]Füzéry AK,Levin J,Chan MM,et al.Translation of proteomic biomarkers into FDA approved cancer diagnostics:issues and challenges[J].Clin Proteomics,2012,10(1):1-14.

[4]馮仁豐．臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)[M]．5版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2003．

[5]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜．全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M]．3版．南京：東南大學(xué)出版社，2006．

[6]魏昊，叢玉隆，中國(guó)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)技術(shù)委員會(huì)醫(yī)學(xué)分委會(huì)．醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理與認(rèn)可指南[M]．北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2004．

[7]程文琴，章復(fù)湘，張如.醫(yī)院傳染病信息管理系統(tǒng)的應(yīng)用研究[J]．中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2012，22(14)：3107-3109．

[8]李萍．臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力要求[J]．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，30(8)：958-960．

[9]郭擁軍，李大為，文江平，等．羅氏Modular P-800生化分析儀檢測(cè)6種血清特種蛋白性能評(píng)價(jià)[J]．國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，32(11)：1220-1221．

[10]韓靜，胡梅，楊桂花，等．BNⅡ特種蛋白儀測(cè)定IgG、IgA和IgM性能評(píng)價(jià)[J]．國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(10)：1292-1294．

[11]張莉，吳炯，郭瑋，等．醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)用前的性能評(píng)價(jià)[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2006，21(6)：560-563．

[12]張葵．定量檢測(cè)系統(tǒng)方法學(xué)性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的基本方法[J]．臨床檢驗(yàn)雜志，2009，27(5)：321-323．

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.10.044

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)10-1402-03

(收稿日期：2016-01-27)