蒲澤晏，胥國強(qiáng)，李祥坤，李　鳳，黃雪梅

(遂寧市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川遂寧 629000)

·論著·

2 513例抗核抗體與抗核抗體譜檢測結(jié)果對比分析

蒲澤晏，胥國強(qiáng)，李祥坤，李鳳，黃雪梅

(遂寧市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川遂寧 629000)

摘要:目的分析本實(shí)驗(yàn)室抗核抗體(ANA)與抗核抗體譜(ANAs)15項(xiàng)聯(lián)合檢測的結(jié)果，并探討兩者之間的關(guān)系。方法分別用間接免疫熒光法(IIF)和免疫印跡法(IBT)檢測患者ANA和ANAs，判斷其ANA滴度、熒光模型和ANAs結(jié)果，并對ANA和ANAs檢測結(jié)果進(jìn)行對比分析。結(jié)果471例ANA陽性患者標(biāo)本中，顆粒型161例，均質(zhì)型110例，胞質(zhì)型96例、核仁型37例、著絲點(diǎn)型28例，其他型合計(jì)39例；滴度為1∶100者196例，占41.61%(196/471)，其中ANAs陽性53例，占27.04%(53/196)；滴度為1∶320者123例，占26.11%(123/471)，其中ANAs陽性67例，占54.47%(67/123)；滴度為1∶1 000者152例，占32.27%(152/471)，其中ANAs陽性132例，占86.84%(132/152)；2 042例ANA陰性標(biāo)本中45例ANAs檢測陽性，陽性率為2.2%(45/2042)；高滴度ANA患者血清中ANAs的陽性率高于低滴度(χ2=123.132,P<0.05)。結(jié)論不同滴度的ANA與ANAs之間有一定的關(guān)系，如果以ANA進(jìn)行過篩，陽性再做ANAs會(huì)漏檢部分患者，建議IIF和IBT聯(lián)合應(yīng)用，防止風(fēng)濕病的漏診。

關(guān)鍵詞:抗核抗體；抗核抗體譜；間接免疫熒光法；免疫印跡法

抗核抗體(ANA)是抗細(xì)胞核內(nèi)成分的抗體，因?yàn)榧?xì)胞核包含多種成分，所以有抗核內(nèi)多種物質(zhì)的抗體譜即抗核抗體譜(ANAs)，ANA屬于自身抗體。自身抗體的檢測對風(fēng)濕病的診斷和鑒別診斷具有重要價(jià)值，尤其是結(jié)締組織病(CTD)的早期診斷至為重要[1]。目前國內(nèi)外檢測ANA的方法主要有間接免疫熒光法(IIF)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，廣泛用于風(fēng)濕病的篩查[2-4]。國內(nèi)外很多實(shí)驗(yàn)室為了節(jié)省檢測成本，只將ANA陽性的標(biāo)本才做特異性ANAs檢測。還有一些實(shí)驗(yàn)室僅用自動(dòng)化儀器檢測特異性的ANAs、不作ANA的IIF或免疫印跡法(IBT)篩查。本文通過對2 513例ANA與15種抗體的對比分析，探討ANA與ANAs的關(guān)系，明確ANA與ANAs檢測的意義及能否相互代替。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2014年10月1日至2015年1月22日本院門診及住院患者2 513例，其中男849例，年齡1～94歲，平均48.94歲；女1 664例，年齡10個(gè)月至89歲，平均45.80歲。

1.2標(biāo)本采集抽取清晨空腹靜脈血3 mL，靜置30 min后，離心分離血清(3 000 r/min離心10 min)。當(dāng)日不能及時(shí)檢測的標(biāo)本置于-20 ℃冰箱保存。

1.3檢測方法ANA采用IIF法檢測，試劑盒為歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷有限公司生產(chǎn)，每次試驗(yàn)均設(shè)陰、陽對照，操作嚴(yán)格按照試劑盒提供的說明書進(jìn)行，熒光顯微鏡觀察結(jié)果，細(xì)胞或組織內(nèi)出現(xiàn)特異性熒光判為陽性。測定3個(gè)滴度，1∶100、1∶320、1∶1 000;抗體滴度大于等于1∶100為陽性。ANAs采用IBT法檢測，試劑盒為歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司生產(chǎn)，可檢測抗-nRNP、Sm、SS-A、Ro-52、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小體、組蛋白、核糖體P蛋白和AMA M2等15種不同抗原IgG類抗體。嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作及判定結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1ANA陽性標(biāo)本的核型分析2 513份血樣中ANA 陽性共471例，陽性率為18.74%(471/2 513)。熒光模式顆粒型占34.18%(161/471)，均質(zhì)型占23.35%(110/471)，胞質(zhì)型占20.38%(96/471)，核仁型占7.86%(37/471)，著絲點(diǎn)型5.94%(28/471)，其他核型占8.28%(39/471)，具有兩種或兩種以上核型的占6.16%(29/471)。見表1。

表1　　471例ANA陽性標(biāo)本中不同熒光核型的比例

2.2不同熒光滴度ANA標(biāo)本中ANAs的陽性率比較471例ANA陽性，滴度為1∶100者占41.61%(196/471)，其中ANAs陽性53例，占27.04%；滴度為1∶320者占26.11%(123/471)，其中ANAs陽性67例，占54.47%；滴度為1∶1 000者占32.27%(152/471)，其中ANAs陽性132例，占86.84%(132/152)。高滴度ANA患者血清中ANAs的陽性率高于低滴度，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=123.132,P<0.05)。

2.32 513例標(biāo)本中ANAs陽性結(jié)果分析2 513份血樣ANAs 檢測陽性297例，陽性率為11.82%(297/2 513)。2 042例ANA陰性標(biāo)本中45例ANAs檢測陽性，陽性率為2.20%，其中44例為單項(xiàng)陽性，1例為2項(xiàng)陽性。

3討論

ANA是CTD 重要的血清學(xué)標(biāo)志，IIF是檢測ANA的金標(biāo)準(zhǔn)[5],是篩查自身抗體的主要方法[6-7]，是目前應(yīng)用最廣泛的自身抗體篩查試驗(yàn)。本組資料IIF法檢測的 2 513 份血樣中ANA陽性471例，陽性率為18.74%(471/2 513)，低于郭大文等[6]報(bào)道的52.00%，但高于高仕萍等[4]報(bào)道的6.25%，可能與受檢查人群、地區(qū)、醫(yī)生對風(fēng)濕病的認(rèn)知度有關(guān)。ANA 熒光模式本組以顆粒型占34.18%(161/471)，均質(zhì)型占23.35%(110/471)，胞質(zhì)型占20.38%(96/471)，這3型占77.91%，與郭大文等[6]和陳燚瓊等[8]報(bào)道存在一定的差異，郭大文等[6]報(bào)道顆粒型占43.48%，陳燚瓊等[8]報(bào)道顆粒型占62.94%，ANA 熒光模式的差異可能與ANA成分復(fù)雜、檢查對象差異、人為分型誤差等因素有關(guān)。本研究471例陽性中ANA滴度與ANAs的陽性率有一定的關(guān)系，本組ANAs/ANA 的比值隨ANA 滴度的升高而增大，與郭大文等[6]報(bào)道的“ANAs 的陽性率隨ANA 滴度增大而升高”一致。

本組資料顯示ANA陽性率高于ANAs,與相關(guān)報(bào)道一致[2-4,8]。ANA陰性標(biāo)本中ANAs 檢測陽性率為2.20%，低于胡朝軍等[3]報(bào)道的10.17%,高于郭大文等[6]報(bào)道的0.50%。高仕萍等[4]報(bào)道2 207份血樣中ANAs陽性、ANA陰性者僅3例。賴永才等[9]報(bào)道132例抗ENA抗體陽性病例ANA的陽性率為93.90%，有6.10%的ANA陰性患者抗ENA抗體陽性。從文獻(xiàn)上看各家報(bào)道結(jié)果差異較大，分析原因可能與選取病例的數(shù)量和診斷的可靠程度、醫(yī)院的?？铺厣⑨t(yī)生和檢驗(yàn)人員的技術(shù)水平、使用儀器試劑的廠家等的差異有關(guān)。由于ANA檢測的IIF方法是手工實(shí)驗(yàn)，檢測過程中影響因素較多，檢測結(jié)果最顯著的問題是重復(fù)性差[10]，這可能也是各實(shí)驗(yàn)室報(bào)道差異較大的原因，因此，人員教育、素質(zhì)提高和質(zhì)量控制是保障質(zhì)量工作的核心[11-12]。

筆者認(rèn)為ANA與ANAs的檢測各家報(bào)道結(jié)果差異較大，目前尚缺乏多中心大樣本的研究，沒有形成“專家共識(shí)”，期望今后有“專家共識(shí)”或其他相關(guān)規(guī)范性文件或操作出臺(tái)。根據(jù)作者對2 513份血樣的對比分析認(rèn)為：由于ANA與ANAs敏感性、特異性有差異,如果ANA陰性標(biāo)本不做ANAs會(huì)導(dǎo)致部分患者漏診,兩者聯(lián)合檢測在CTD 診斷中具有一定互補(bǔ)性，可減少漏診或誤診。

參考文獻(xiàn)

[1]陸再英，鐘南山．內(nèi)科學(xué)[M]．7版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2008．

[2]申靜，黃博．ANA檢測在自身免疫性疾病中的應(yīng)用評價(jià)[J]．山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，14(6)：51-52．

[3]胡朝軍，李俊，張道強(qiáng)，等．間接免疫熒光法篩查抗核抗體與特異性抗體檢測的相互關(guān)系[J]．中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志，2011，5(3)：179-185．

[4]高仕萍，楊文勇，資云菊，等．抗核抗體和抗核抗體譜聯(lián)合檢測在自身免疫性疾病診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2014，11(2)：222-223．

[5]Peterson LK,Wells D,Shaw L,et al.Novel method for quantitative ANA measurement using near-infrared imaging[J].J Immunol Methods,2009,349(1/2):1-8.

[6]郭大文，張英輝，單娜，等．抗核抗體核型與條帶免疫抗體譜相關(guān)性分析[J]．中華實(shí)用診斷與治療雜志，2012，26(6)：560-562．

[7]Hoffman IE,Peene I,Veys EM,et al.Detection of specific antinuclear reactivities in patients with negative anti-nuclear antibody immunofluorescence screening tests[J].Clin Chem,2002,48(12):2171-2176.

[8]陳燚瓊，趙迪，鄧曉剛，等．抗核抗體核型與抗核抗體譜檢測結(jié)果對比分析[J]．國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35(14)：1859-1860．

[9]賴永才，毛煒．自身免疫性疾病中抗核抗體與抗ENA抗體的相關(guān)性分析[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8(7)：815-816．

[10]王蘭蘭．自身抗體檢測的應(yīng)用與質(zhì)量保障原則[J]．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005，28(10)：17-20．

[11]陳良瓊，吉飛躍，崔益祥．自身抗體臨界值質(zhì)控血清的制備及評價(jià)[J]．國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35(10)：1326-1328．

[12]萬本愿，李勝遠(yuǎn)，姜青龍．自身抗體檢測的臨床應(yīng)用與質(zhì)量控制[J]．實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2013，31(1)：52-55．

Comparative analysis of antinuclear antibody and antinuclear antibody spectrum for 2 513 samples

PuZeyan,XuGuoqiang,LiXiangkun,LiFeng,HuangXuemei

(DepartmentofClinicalLaboratory,SuiningCentralHospital,Suining,Sichuan629000，China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the results of combined detection of the 15 indexes of antinuclear antibodies (ANA) and antinuclear antibody spectrum (ANAs) in our laboratory and to investigate the correlation between them.MethodsThe ANA fluorescence pattern and the ANA titer were detected by the indirect immunofluorescence(IIF) and the ANAs was detected by immunoblotting(IBT).The results of the ANA and ANAs were analyzed.ResultsAmong the 471 samples of ANA positive,161 cases were speckled pattern,110 cases were homogeneous pattern,96 cases were cytoplasmic pattern,37 cases were nucleolar pattern,28 cases were centromere pattern,and 39 cases were the other pattern.The positive rate of ANA titer of 1∶100 was 41.61%(196/471) and positive rate of ANAs was 27.04%(53/196).The positive rate of ANA titer of 1∶320 was 26.11%(123/471) and positive rate of ANAs was 54.47%(67/123).The positive rate of ANA titer of 1∶1 000 was 32.27%(152/471) and positive rate of ANAs was 86.84%(132/152).45 cases were detected with the ANAs positive of in 2 042 ANA negative samples,the positive rate were 2.2%(45/2 042).The positive rate of ANAs in high ANA titer samples was higher than that in low ANA titer samples(χ2=123.132,P<0.05).ConclusionThe ANA titer and ANAs has certain relationship.If ANA is regarded as positive to test ANAs,a small proportion of patients will miss detection.Thus,the combination detection of IIF and IBT is suggested to avoid the misdiagnosis of rheumatic.

Key words:antinuclear antibody;antinuclear antibodies spectrum;indirect immunofluorescence;immunoblotting

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.10.018

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)10-1346-02

(收稿日期：2015-11-15)

作者簡介：劉藝，男，檢驗(yàn)技師，主要從事臨床檢驗(yàn)方向的研究?！魍ㄓ嵶髡撸珽-mail：zxm18@sohu.com。