胡立磊，郭永剛，樊克鋒

（1河南醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南鄭州451191；2河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院,河南鄭州450011）

金銀花提取物對大腸桿菌體外抑菌試驗

胡立磊1，郭永剛2，樊克鋒2

（1河南醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南鄭州451191；2河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院,河南鄭州450011）

根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論，選用金銀花提取物為試驗對象，利用試管二倍稀釋法測定其對標準株和臨床分離株大腸桿菌的最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）。結(jié)果顯示，金銀花提取物對標準株和2株臨床分離株大腸桿菌的MIC值分別為15.7mg/mL、62.5mg/mL和31.3mg/mL，MBC值分別為31.3mg/mL、62.5mg/mL和62.5mg/mL。說明本試驗所制金銀花提取物對大腸桿菌有較好的抗菌作用。

金銀花提取物；MIC；MBC

金銀花是中醫(yī)常用的具有代表性的清熱解毒中藥，具有抗菌、消炎、解熱、免疫調(diào)節(jié)等多方面的藥理學(xué)作用。大腸桿菌病是臨床常見病，多表現(xiàn)為急性腹瀉、腸道外感染等，目前對該病的防治還主要使用抗生素以及化學(xué)合成抗菌藥物，隨著目前這些藥物耐藥性問題的突顯，研究應(yīng)用中藥治療大腸桿菌病有重要的現(xiàn)實意義[1-3]。本研究根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論，進行金銀花提取物對大腸桿菌的體外抑菌試驗，旨在為臨床合理使用中藥防治大腸桿菌病提供參考。

1 材料與方法

1.1 菌種 大腸桿菌標準菌株ATCC25922，臨床分離株大腸桿菌2株，由新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院微生物實驗室分離鑒定保存。

1.2 藥物 金銀花（購自安徽亳州中藥材市場）。

1.3 培養(yǎng)基 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 （加入微量酚紅）、普通瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基。

1.4 金銀花提取物的制備 取金銀花至于恒溫干燥箱50℃干燥24h，取干燥后金銀花粉碎后過60目標準篩，準確稱量粉碎后金銀花20g，加入70%乙醇 50mL，60℃水浴 4h；600W超聲提取 10min，加入200mL沸騰的蒸餾水，攪拌提取10min后過濾，收集濾液，重復(fù)過濾一次，合并濾液；60℃水浴、索氏回流提取器回流提取2h，60℃水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至20mL，所得提取物1mL相當(dāng)于1g生藥。115℃、15min高壓滅菌，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 菌液制備 將分離保存的大腸桿菌接種于伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)20h，選擇典型菌落接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h后，采用平板計數(shù)法進行菌落計數(shù)，將菌液稀釋至濁度為1x108cfu/mL備用。

1.6 MIC、MBC測定 采用試管二倍稀釋法，向滅菌試管中加入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基1mL，依次編號，在第1管中加入藥液1mL，混勻后吸取1mL至第2管，依次類推至第9管，棄去最后吸取的1mL，然后于每管中加入0.1mL濃度稀釋至1x106cfu/mL菌液，第10管加入菌液不含藥液作為陽性對照，第11管只加營養(yǎng)肉湯作為陰性對照，標準菌株和臨床分離株依次分別測定最小抑菌濃度。第1至9管藥物濃度分別為500、250、125、62.5、31.3、15.7、7.8、3.9、1.5mg/mL，37℃培 養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。以培養(yǎng)物透明，不顯紅色的藥物濃度為本藥物的MIC。從該試管中取培養(yǎng)物0.01mL接種到普通瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h，以菌落數(shù)少于5個視為無細菌生長，以無細菌生長的藥物最低濃度作為本藥物的MBC。為減少誤差，本試驗重復(fù)3次，取2次結(jié)果相近的值作為最終值。

2 結(jié)果

金銀花提取物對標準菌株和臨床分離株大腸桿菌的最小抑菌濃度和最小殺菌濃度分別見表1和表2。

表1 受試藥物對大腸桿菌的MIC

表2 受試藥物對大腸桿菌的MBC

注：“+”表示有菌生長；“-”表示無菌生長

由表1可知，本試驗所用金銀花提取物對標準株和2株臨床分離株大腸桿菌的MIC值分別為 15.7mg/mL、62.5mg/mL和 31.3mg/mL；由表 2可知，金銀花提取物對標準株和2株臨床分離株大腸桿菌的MBC值分別為31.3mg/mL、62.5mg/mL和 62.5mg/mL。

3 討論

現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)研究表明金銀花中多種藥用成分均有抗菌作用，如黃酮類物質(zhì)和綠原酸等。本試驗結(jié)果也證實所制金銀花提取物對大腸桿菌有明顯的抗菌作用，這與其他學(xué)者的報道基本一致[4-6]。試驗中藥物對臨床分離株的MIC和MBC均大于標準菌株，這可能與臨床分離株對抗菌藥物已產(chǎn)生一定耐受作用有關(guān)。綜上所述，本研究可為臨床使用中藥治療大腸桿菌病提供參考。

[1]張白霞，周鳳琴，郭慶梅.金銀花中黃酮類化合物的研究進展[J]．中國實驗方劑學(xué)雜志，2012，18（23）：2013-2014．

[2]楊鵬．中藥金銀花的藥用成分和藥理作用[J]．中國社區(qū)醫(yī)師，2013，15(5)：367-368．

[3]陳明光，劉倩.中藥金銀花的藥用成分和藥理作用[J]．北方醫(yī)學(xué)，2013，15（10）：219-220．

[4]景恒翠，翟慶梅，曹倩.金銀花的藥用成分及藥理分析[J]．河南中醫(yī)，2014，34（9）：1839-1840．

[5]林丹，趙國玲，劉佳佳.中藥金銀花藥用成分的提取及抑菌實驗的研究[J]．天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2003，15（5）：436-437．

[6]宋海英，邱世翠，王志強，等.金銀花的體外抑菌作用研究[J]．時珍國醫(yī)國藥，2003，（5）：137．

S853.74

B

1003-8655（2016）05-0022-02

2014年河南省醫(yī)學(xué)教育教學(xué)改革與研究項目（WJLX2014041）