譚玉嫻，馮靜，易圖永，，（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院，長沙408；植物病蟲害生物學(xué)與防控湖南省重點實驗室，長沙408；湖南省生物農(nóng)藥與制劑加工工程技術(shù)研究中心，長沙408）

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嘧菌酯與烯酰嗎啉對葡萄霜霉病菌的毒力測定

譚玉嫻1，馮靜1，易圖永1，2，3
（1湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院，長沙410128；2植物病蟲害生物學(xué)與防控湖南省重點實驗室，長沙410128；3湖南省生物農(nóng)藥與制劑加工工程技術(shù)研究中心，長沙410128）

摘要：化學(xué)藥劑長期連續(xù)使用會使葡萄霜霉病菌對部分藥劑產(chǎn)生抗藥性。通過采用離體葉盤法，測定嘧菌酯和烯酰嗎啉及兩者的混用對葡萄霜霉病菌的毒力作用。結(jié)果表明，95%嘧菌酯、98%烯酰嗎啉及兩者的5個配比（1:1、1:2、2:1、1:4、4:1）對葡萄霜霉病菌的EC50值分別為7.9003、1.7656、1.454、1.685、1.0117、1.9688、3.2009μg/mL。其中嘧菌酯:烯酰嗎啉為2:1時對葡萄霜霉病菌生長的抑制作用較強，可以用于防治葡萄霜霉病的田間試驗。

關(guān)鍵詞：葡萄霜霉病菌；嘧菌酯；烯酰嗎啉；農(nóng)藥混用；毒力測定

0　引言

葡萄霜霉?。╣rape downy mildew）是葡萄的重要病害之一，是由葡萄生單軸霉（Plasmopara viticola）引起的卵菌病害，它主要危害葉片、嫩梢、花序、幼果等幼嫩組織，會對葡萄的質(zhì)量和產(chǎn)量有影響［1-3］，造成經(jīng)濟上的損失。

使用化學(xué)藥劑是防治葡萄霜霉病的常用方法，經(jīng)常使用的藥劑有波爾多液、百菌清、甲霜靈、霜脲氰、代森錳鋅、嘧菌酯、霜霉威、烯酰嗎啉、吡唑醚菌酯等［4-7］?；瘜W(xué)藥劑長期連續(xù)使用會使葡萄霜霉病菌對部分藥劑產(chǎn)生抗藥性，達(dá)不到預(yù)期的防治效果［8-9］。如長期單獨使用甲霜靈，葡萄霜霉病菌對其普遍產(chǎn)生抗藥性［10］。因此解決或延緩病菌抗藥性的有效方法是將不同作用位點和不同作用機理的殺菌劑進行復(fù)配［11］。朱呂會等［12］選取烯酰嗎啉和嘧菌酯2種單劑對番茄早疫病菌進行抑菌試驗研究，發(fā)現(xiàn)復(fù)配后的藥劑降低了烯酰嗎啉的抗性風(fēng)險。齊永志等［13］測定烯酰嗎啉與百菌清復(fù)配對辣椒疫霉病菌的增效作用，發(fā)現(xiàn)復(fù)配不僅可以提高藥效，還可以延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生。張蕊蕊等［14］針對烯酰嗎啉和嘧菌酯不同配比對黃瓜霜霉病的聯(lián)合毒力進行測定，發(fā)現(xiàn)通過合適比例的藥劑混配可以有效延緩黃瓜霜霉病對嘧菌酯及烯酰嗎啉抗藥性的產(chǎn)生。烯酰嗎啉和嘧菌酯對葡萄霜霉病都有很好的防效，目前未發(fā)現(xiàn)兩者復(fù)配對葡萄霜霉病作用的報道，因此筆者采用離體葉盤法測定嘧菌酯和烯酰嗎啉對葡萄霜霉病菌的毒力，并在此基礎(chǔ)上進行不同比例的混用，以尋找能夠增效的配比，為生產(chǎn)上使用提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試藥劑95%嘧菌酯原藥，中國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)資料集團公司提供；98%烯酰嗎啉原藥，中國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)資料集團公司提供；嘧菌酯與烯酰嗎啉分別以1:1、1:2、2:1、1:4、4:1進行混合。

1.1.2供試病原菌葡萄霜霉病葉采自湖南省衡山縣農(nóng)

業(yè)科技示范園苗圃基地‘夏黑’上。

1.2試驗方法

1.2.1藥劑配制根據(jù)預(yù)備試驗，設(shè)置6個濃度梯度，稱取一定量的嘧菌酯和烯酰嗎啉原藥，分別按照嘧菌酯與烯酰嗎啉的比例為1:1、1:2、2:1、1:4、4:1的配比，溶于適量丙酮中，再用無菌水稀釋到所需要的濃度。

1.2.2試驗方法用滅菌水洗凈采集的感染葡萄霜霉病菌的病葉，用脫脂棉包扎葉柄后置于鋪有濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中，放入培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)。待其重新產(chǎn)生孢子囊后，用小刀將孢子囊輕輕刮到裝有無菌水的培養(yǎng)皿中，配成濃度為1.7×106個/mL孢子囊懸浮液備用。

試驗選擇使用葉盤接種方法進行［15-22］，將生長健康的葡萄葉片制成直徑1.5cm的葉盤，將葉盤在不同濃度的藥液中浸10 s，取出陰干，葉盤背面朝上置于濕潤的濾紙上，每個葉盤上接種10 μL的葡萄霜霉病菌孢子囊懸浮液，置于光照培養(yǎng)箱（光照12 h，黑暗12 h，20℃）中6～8天，每個濃度處理15個葉盤，3個重復(fù)，以無菌水處理作空白對照。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

待對照葉盤發(fā)病均勻后進行分級調(diào)查發(fā)病情況。葡萄霜霉病分級標(biāo)準(zhǔn)［23］（以葉片為單位）為：0級，無病斑；1級，病斑面積占整個葉面積的5%以下；3級，病斑面積占整個葉面積的6%～25%；5級，病斑面積占整個葉面積的26%～50%；7級，病斑面積占整個葉面積的51%～75%；9級，病斑面積占整個葉面積的76%以上?！?）………………………………………………………（2）

用Excel軟件分析數(shù)據(jù)，獲得毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)R2，計算出EC50值。藥劑EC50值是用來衡量藥劑間毒力大小的重要指標(biāo)［24］。根據(jù)孫云沛［25］的方法計算出共毒系數(shù)（CTC）。共毒系數(shù)在120以上為增效作用，80～120之間為相加作用，小于80為拮抗作用。

理論毒力指數(shù)（TTI）=A的毒力指數(shù)×A在混用中的含量+B的毒力指數(shù)×B在混用中的含量…………（4）

共毒系數(shù)（CTC）=（ATI/TTI）×100………………（5）

2　結(jié)果與分析

根據(jù)嘧菌酯與烯酰嗎啉不同配比的各濃度梯度防治效果查詢生物統(tǒng)計幾率值換算表，用Excel軟件分析數(shù)據(jù)，算出殺菌劑相應(yīng)的EC50。由表1可知，嘧菌酯、烯酰嗎啉及它們的5個配比（1:1、1:2、2:1、1:4、4:1）對葡萄霜霉病的EC50值分別為7.9003、1.7656、1.454、1.685、1.0117、1.9688、3.2009μg/mL。

表1　嘧菌酯、烯酰嗎啉混用對葡萄霜霉病菌的毒力測定結(jié)果

由表2可知，嘧菌酯與烯酰嗎啉復(fù)配的共毒系數(shù)在106.17～361.85之間，當(dāng)嘧菌酯與烯酰嗎啉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)比為2:1時增效作用最佳。

3　結(jié)論與討論

葡萄霜霉病是葡萄的重要病害，在國內(nèi)發(fā)生普遍，目前化學(xué)防治仍是葡萄霜霉病防治的有效手段。烯酰嗎啉為高效內(nèi)吸性殺菌劑，其主要作用機制是影響細(xì)胞壁分子結(jié)構(gòu)的重排，干擾病菌細(xì)胞壁聚合體的組裝，從而干擾細(xì)胞壁的形成［26］。嘧菌酯為甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，主要作用機制是抑制線粒體呼吸鏈中細(xì)胞色素間的電子轉(zhuǎn)移，從而抑制ATP的產(chǎn)生，抑制孢子萌發(fā)、菌絲生長和孢子形成［27］，與目前已有殺菌劑無交互抗性。法國科學(xué)家［28］1994年在田間檢測到葡萄霜霉病對烯酰嗎啉的抗性菌株，羅彥平等［29］也證明通過測定新疆葡萄霜霉病菌對殺菌劑的敏感性，發(fā)現(xiàn)烯酰嗎啉、嘧菌酯可以作為霜霉病發(fā)生期的主要治療劑，但不要連續(xù)使用，因此依靠單一藥劑防治葡萄霜霉病很難適應(yīng)葡萄生產(chǎn)的需求。

表2　嘧菌酯和烯酰嗎啉混用對葡萄霜霉病菌的聯(lián)合毒力

將2種作用機理不同的藥劑嘧菌酯和烯酰嗎啉進行最佳配比篩選研究，通過室內(nèi)毒力測定檢測對葡萄霜霉病的防治效果。根據(jù)試驗結(jié)果，嘧菌酯與烯酰嗎啉質(zhì)量分?jǐn)?shù)比為2:1時對葡萄霜霉病菌生長的抑制作用較強。這表明嘧菌酯和烯酰嗎啉通過合適比例的混配可以有效延緩葡萄霜霉病菌對2種藥劑的抗性發(fā)展。本研究只在室內(nèi)比較單一用藥和混配用藥對病菌的毒力，其機理、作用方式和田間藥效等還需進一步研究驗證。

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Toxicity Determination of Azoxystrobin and Dimethomorph Against Plasmopara viticola

Tan Yuxian1，F(xiàn)eng Jing1，Yi Tuyong1，2，3
（1College of Plant Protection，Hunan Agricultural University，Changsha 410128，Hunan，China；2Hunan Provincial Key Laboratory for Biology and Control of Plant Diseases and Plant Pests，Changsha 410128，Hunan，China；
3Hunan Provincial Engineering&Technology Research Center for
Biopesticide and Formulation Processing，Changsha 410128，Hunan，China）

Abstract：Long-term continuous use of chemicals will cause drug resistance of Plasmopare viticola.By using leaf disc method，the toxicity of azoxystrobin，dimethomorph and their mixtures against Plasmopare viticola were tested.The results showed that the EC50of 95%azoxystrobin，98%dimethomorph and their five ratios（1：1，1：2，2：1，1：4，4：1）was respectively 7.9003，1.7656，1.454，1.685，1.0117，1.9688，3.2009 μg/mL.The mixture of azoxystrobin and dimethomorph at the ratio of 2：1 had very strong inhibiting effect on Plasmopare viticola and could be used to control grape downy mildew in field experiment.

Key words：Plasmopare viticola；Azoxystrobin；Dimethomorph；Pesticides Mixture；Toxicity Determination

中圖分類號：S482.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A論文編號：cjas16030027

基金項目：農(nóng)業(yè)部公益行業(yè)計劃“果樹霜霉病綜合防控技術(shù)研究與示范”（201203035）。

第一作者簡介：譚玉嫻，女，1990年出生，湖南衡山人，在讀研究生，研究方向：植物病理學(xué)。

通信地址：410128湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院，Tel：0731-84617025，E-mail：359201781@qq.com。 410128湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院，Tel：0731-84617025，E-mail：yituyong@hunau.net。

通訊作者：易圖永，男，1971年出生，湖南懷化人，教授，博士，研究方向：植物病理學(xué)。

收稿日期：2016-03-30，修回日期：2016-04-13。