譚琪明 胡丹

摘 要：為了研究沙棘中異鼠李素的抗癌活性，分別采用了SRB法測(cè)試不同濃度異鼠李素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞的抑制率以及MTT法測(cè)試不同濃度異鼠李素對(duì)人白血病細(xì)胞株K562和HL60的抑制率。結(jié)果為不同濃度異鼠李素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞的抑制率達(dá)（59.42±4.40）% ～（69.55±3.17）%，其中0.063μmol/mL異鼠李素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞抑制率為（69.55±3.17）%，與0.3μmol/mL阿霉素相當(dāng)；不同濃度異鼠李素對(duì)人白血病細(xì)胞株K562的抑制率達(dá)（9.84±1.14）% ～（100±4.12）%，其中0.633μmol/mL異鼠李素對(duì)人白血病細(xì)胞株K562細(xì)胞抑制率為（100±4.12）%，與10μmol/mL阿霉素相當(dāng)；不同濃度異鼠李素對(duì)人白血病細(xì)胞株HL60的抑制率達(dá)（12.50±1.41）% ～（100±6.89）%，其中0.633μmol/mL異鼠李素對(duì)人白血病細(xì)胞株HL60細(xì)胞抑制率為（100±6.89）%，與10μmol/mL阿霉素相當(dāng)?？梢?jiàn)異鼠李素具有一定的抗癌活性。

關(guān) 鍵 詞：異鼠李素；抗癌；活性測(cè)定

中圖分類號(hào)：TQ 460 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 1671-0460（2016）04-0687-03

Abstract： The antitumor activity of isorhamnetin was studied. The human breast cancer cell line MCF7 treated with different concentrations of isorhamnetin were examined for cell inhibitory activity by using SRB assay and the human leukemia cell lines K562 and HL60 treated with different concentrations of isorhamnetin were examined for cell inhibitory activity by using MTT assay. The results showed that under the condition of different concentrations of isorhamnetin， the highest human breast cancer cell line MCF7 inhibition rate was （69.55±3.17）%， the lowest was （59.42±4.40）%. The human breast cancer cell line MCF7 inhibition rate of 0.3 μmol/mL adriamycin reached （76.08±3.32）%， there was no significant difference between it and 0.063μmol/mL isorhamnetin. And under the condition of different concentrations of isorhamnetin， the highest human leukemia cell line K562 inhibition rate was（100±4.12）%， the lowest was（9.84±1.14）%. The human leukemia cell line K562 inhibition rate of 10 μmol/mL adriamycin reached （87.59±1.38）%， there was no significant difference between it and 0.633μmol/mL isorhamnetin. And under the condition of different concentrations of isorhamnetin， the highest human leukemia cell line HL60 inhibition rate was （100±6.89）%， the lowest was （12.50±1.41）%. The human leukemia cell line HL60 inhibition rate of 10μmol/mL adriamycin reached （94.20±2.17）%， there was no significant difference between it and 0.633μmol/mL isorhamnetin. Isorhamnetin had a certain activity of antitumor.

Key words： Isorhamnetin； Antitumor activity； Determination of activity

癌癥又名惡性腫瘤，是由于機(jī)體細(xì)胞失去正常調(diào)控，過(guò)度增殖而引起的疾病。近年來(lái)，癌癥的發(fā)病率日益上升，還有年輕化的趨勢(shì)，讓各種年齡層次的人都感受到了它的威脅。化療是臨床治療癌癥的常用方法，但大多抗腫瘤藥物對(duì)癌細(xì)胞和人體正常細(xì)胞的選擇性差別不大，在應(yīng)用中不良反應(yīng)嚴(yán)重、廣泛，加之易產(chǎn)生耐藥性等，使癌癥的化療效果受到很大的影響。近年來(lái)，植物來(lái)源的抗腫瘤藥引起了人們的重視。植物來(lái)源的化合物不僅可為設(shè)計(jì)更理想的新藥提供新的化學(xué)結(jié)構(gòu)，還可作為新的抗癌藥物[1]。異鼠李素是一種黃酮類化合物，是沙棘黃酮中的主要單體之一[2]， 近年研究發(fā)現(xiàn)，異鼠李素可抑制腫瘤細(xì)胞增殖、干預(yù)腫瘤細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、增強(qiáng)抑癌基因的活性、抑制癌基因表達(dá)。本研究探討了異鼠李素的抗癌活性，為臨床研究抗癌藥物提供了參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

超凈工作臺(tái)：蘇州安泰凈化設(shè)備有限公司；高速離心機(jī)：長(zhǎng)沙平凡儀器儀表有限公司；超低溫冰箱（-85 ℃）：Thermo公司 ；CO2培養(yǎng)箱（Forma 3111型）：美國(guó)Thermo公司；倒置相差顯微鏡（Nikon TS100）：日本Nikon公司；96孔培養(yǎng)板：購(gòu)于美國(guó)Costar公司。

1.2 試劑與細(xì)胞株

異鼠李素：由本試驗(yàn)制得，純度為72.8%；SRB、噻唑藍(lán)（MTT）、二甲基亞砜：美國(guó)Sigma公司；RPMI1640培養(yǎng)基、1640培養(yǎng)基、DMEM高糖培養(yǎng)基：購(gòu)于Gibco公司；MEM/F培養(yǎng)基：購(gòu)自Hyclone公司；人白血病細(xì)胞株HL60、人白血病細(xì)胞株K562：購(gòu)于CCTCC；人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7：購(gòu)于上海細(xì)胞庫(kù)；其他試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

采用兩種方法即四氮唑鹽還原（MTT）和磺酰羅丹明B（Sulforhodamine B，SRB）比色法對(duì)異鼠李素抗癌活性進(jìn)行研究，一為測(cè)定異鼠李素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞的抑制率；二為測(cè)定異鼠李素對(duì)人白血病細(xì)胞株K562和HL60的抑制率。

2.1 異鼠李素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞抑制率的測(cè)定

2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)

將MCF-7細(xì)胞接種在含有10%的胎牛血清的MEM/F12培養(yǎng)基上并置于37 ℃，5%CO2，飽和濕度環(huán)境下培養(yǎng)，待長(zhǎng)滿瓶底80%～90% 后進(jìn)行傳代實(shí)驗(yàn)。

2.1.2 試驗(yàn)方法

將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MCF-7細(xì)胞，按每孔3×103個(gè)細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔加入100 ?L，培養(yǎng)24 h使細(xì)胞貼壁。給藥組加入濃度不同的異鼠李素，使其終濃度分別為0.006、0.063、0.633μmol/mL，陰性對(duì)照組則加等量的培養(yǎng)液，每一濃度設(shè)3個(gè)平行孔，每孔加藥100 ?L，繼續(xù)培養(yǎng)至試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)間。然后，終止培養(yǎng)，去除上清，輕柔地加入TCA100 ?L固定，接著，將培養(yǎng)板放置于4 ℃冰箱1 h，用去離子水洗5遍，空氣中干燥，然后，每孔加入50 ?L 0.4%SRB染色30 min，用1%醋酸沖洗5遍，空氣中干燥，最后，采用非緩沖液Tris液100 ?L溶解并將培養(yǎng)板置振蕩器上振蕩10min，在酶標(biāo)儀上以波長(zhǎng)490nm測(cè)OD值。結(jié)果見(jiàn)表1-2。

抑制率（%）=（對(duì)照組OD值—樣品組OD值）/對(duì)照組OD值×100

表1與表2測(cè)定結(jié)果對(duì)比表明，異鼠李素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞有一定地抑制作用。當(dāng)異鼠李素的濃度為0.063μmol/mL時(shí)，其抑制率達(dá)最大即為（69.55±3.17）%

2.2 異鼠李素對(duì)人白血病細(xì)胞株K562和HL60抑制率的測(cè)定

2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

將HL60、K562細(xì)胞接種在含有10%的小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基上并置于37 ℃，5% CO2，飽和濕度環(huán)境下培養(yǎng)，待長(zhǎng)滿瓶底80%～90%后進(jìn)行傳代實(shí)驗(yàn)。

2.2.2 試驗(yàn)方法

將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的K562及HL60細(xì)胞，按每孔5×104個(gè)細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔加入100 ?L，于37 ℃，5% CO2、飽和濕度環(huán)境下培養(yǎng)24 h后，加入終濃度為0.006 、0.063 、0.633μmol/mL的異鼠李素，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。在培養(yǎng)24 h后，每孔加入10 ?L MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，離心10 min，棄去上清，每孔加二甲基亞楓150 ?L，震蕩10 min，用酶標(biāo)儀測(cè)570 nm的OD值。結(jié)果見(jiàn)表3-6。

抑制率（%）=（對(duì)照組OD值—樣品組OD值）/對(duì)照組OD值×100

表3與表4結(jié)果對(duì)比表明異鼠李素對(duì)人白血病細(xì)胞株K562有一定地抑制作用，當(dāng)異鼠李素的濃度為0.633μmol/mL時(shí)，其抑制率達(dá)最大即為（100±4.12）% ；表5與表6結(jié)果對(duì)比表明異鼠李素對(duì)人白血病細(xì)胞株HL60有一定地抑制作用。當(dāng)異鼠李素的濃度為0.633μmol/mL時(shí)，其抑制率達(dá)最大即為（100±6.89）% 。

3 結(jié)論與討論

異鼠李素和槲皮素同屬黃酮類化合物，近年研究發(fā)現(xiàn)其有抗心肌缺氧缺血、抗心率失常、清除氧自由基和降低血清膽固醇等心血管保護(hù)作用[3]。不少研究組報(bào)道槲皮素具有良好抗腫瘤效應(yīng)；異鼠李素與槲皮素結(jié)構(gòu)相似，但作為單體對(duì)腫瘤的抑制作用還未見(jiàn)國(guó)內(nèi)外其他研究組的報(bào)道[4，5]。

本實(shí)驗(yàn)采用MTT及SRB法對(duì)異鼠李素抗癌活性進(jìn)行研究，結(jié)果表明異鼠李素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞，人白血病細(xì)胞株K562、HL60細(xì)胞均有一定的抑制作用，對(duì)比不同濃度的異鼠李素與阿霉素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞的抑制效果可知，0.063μmol/mL異鼠李素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞抑制率與0.3μmol/mL阿霉素相當(dāng)。對(duì)比不同濃度的異鼠李素與阿霉素對(duì)人白血病細(xì)胞株K562、HL60細(xì)胞的抑制效果可知，0.633μmol/mL異鼠李素對(duì)人白血病細(xì)胞株K562、HL60細(xì)胞抑制率與10μmol/mL阿霉素相當(dāng)。

參考文獻(xiàn)：

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