朱唯芳 顧道蘭 顧娟 楊宇

【摘要】目的：利用小鼠支氣管哮喘模型探討中藥芪味理肺湯方劑（簡(jiǎn)稱芪肺湯）的療效及其與糖皮質(zhì)激素聯(lián)用的協(xié)同作用機(jī)制。方法：雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分組后建立支氣管哮喘模型，分別采用地塞米松、芪肺湯、地塞米松+芪肺湯聯(lián)用進(jìn)行胃飼給藥治療，并設(shè)立相關(guān)對(duì)照組。處理1周后，通過(guò)肺組織病理染色、支氣管肺泡灌洗液（BALF）細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)評(píng)價(jià)炎癥治療效果，通過(guò)ELISA檢測(cè)BALF細(xì)胞因子的表達(dá)。結(jié)果：對(duì)比哮喘對(duì)照組，三個(gè)治療組均出現(xiàn)肺部炎癥部分減輕及BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)的減少，其中聯(lián)用組表現(xiàn)為中性粒細(xì)胞及嗜酸性細(xì)胞計(jì)數(shù)的共同下降。結(jié)論：芪味理肺湯方劑與糖皮質(zhì)激素聯(lián)合運(yùn)用能協(xié)同抑制嗜酸性細(xì)胞及中性粒細(xì)胞激活，對(duì)激素非敏感哮喘治療可能具有較大意義。

【關(guān)鍵詞】芪味理肺湯；哮喘；氣道炎癥；中性粒細(xì)胞；糖皮質(zhì)激素

Abstract：Objective： To investigate the synergistic therapeutic effect of Qiweileifeitang （Qi） with glucocorticoid for allergic inflammation in bronchial asthma mouse models. Methods： 50 mice were randomly divided into for 5 groups for dexamethasone or Qi or combined treatment，the pathological changes of lung tissue and cell counts in bronchoalveolar lavage fluid （BALF） were used to evaluate the therapeutic efficacy. Results： The lung pathological changes and cell counts in BALF most significantly decreased in the combined group comparing to other control groups. Conclusion： Combination of Qi and glucocorticoid may be a better strategy for glucocorticoid insensitive asthma therapy as it can both inhibit neutrophils and eosinophils activation.

Keywords：Qiweilifeitang；asthma；airway inflammation；neutrophils；glucocorticoid

【中圖分類(lèi)號(hào)】R4 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1671-8801（2016）03-0005-02

支氣管哮喘（asthma，簡(jiǎn)稱哮喘）形成的經(jīng)典病理機(jī)制是由氣道的炎性因子和炎性細(xì)胞的活化 [1]。目前研究證實(shí)，糖皮質(zhì)激素可以有效地影響Th2相關(guān)的嗜酸性細(xì)胞的分化及功能，但是仍然存在部分患者對(duì)糖皮質(zhì)激素治療不敏感，影響臨床療效[2]。近期研究證實(shí)了Th17細(xì)胞及中性粒細(xì)胞相關(guān)的炎癥反應(yīng)在哮喘氣道炎癥中具有重要作用，并可能是部分哮喘患者糖皮質(zhì)激素不敏感的重要機(jī)制[3]。圍繞Th17細(xì)胞調(diào)控進(jìn)行的哮喘治療可能是當(dāng)前糖皮質(zhì)激素療法的有益補(bǔ)充。芪味理肺湯方劑是依據(jù)多年哮喘治療臨床經(jīng)驗(yàn)形成的中藥復(fù)方，此前研究報(bào)道，芪味理肺湯對(duì)支氣管哮喘模型大鼠血清清除氧自由基能力具有較大影響 [4]，但其機(jī)制尚未完全闡明，尤其是其對(duì)于糖皮質(zhì)激素非敏感性哮喘的作用尚未明確報(bào)道。

1. 材料和方法

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)雄性BALB/c小鼠50只，6-8周齡，將小鼠隨機(jī)分成5組， 每組10只， 分別為正常對(duì)照組（A組）、哮喘造模+鹽水胃飼組（B組）、地塞米松治療組（C組）、芪肺湯治療組（D組）及地塞米松+芪肺湯治療組（E組），第二軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物中心提供，SPF級(jí)常規(guī)喂養(yǎng)。

1.2 藥品試劑 卵蛋白干粉（OVA），Alfa公司，批號(hào)：A16951；氫氧化鋁，美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：A4682；芪味理肺湯；地塞米松粉劑，Sigma公司，批號(hào)：D4902。

1.3 哮喘動(dòng)物模型制備及給藥 根據(jù)文獻(xiàn)制備支氣管哮喘模型小鼠[2] 。芪肺湯按20ml/kg體重每天1次胃飼，每ml含有1g生藥，其他組給予胃飼等量生理鹽水作為對(duì)照。地塞米松給藥為胃飼，藥物濃度為150μg/mL，3mL/d。各組均為造模成功后連續(xù)給藥7天。

1.4 取材 第29天放血處死小鼠，切開(kāi)氣管， 用生理鹽水1ml灌洗小鼠肺組織， 收集支氣管肺泡灌洗液（BALF）， 分離的上清液-80℃保存待測(cè)。取4%多聚甲醛固定的右肺中葉進(jìn)行病理切片觀察。

1.5 病理切片觀察 采用石蠟包埋及HE染色法進(jìn)行組織切片，并行圖像觀察。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)用（ x±s）表示， 采用SPSS19.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，所有定量數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)方差齊性檢驗(yàn)和正態(tài)性檢驗(yàn)后，對(duì)多組數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，對(duì)兩組比較采用t檢驗(yàn)， 以P<0.01為差異有顯著性。

2. 結(jié)果

2.1 一般情況 正常組無(wú)陽(yáng)性癥狀，哮喘造模+鹽水胃飼組（以下簡(jiǎn)稱哮喘組）小鼠外觀可出現(xiàn)呼吸急促、咳嗽喘息、排尿排便增多、煩躁不安等癥狀，嚴(yán)重者反應(yīng)遲鈍、可聞及痰鳴音。各治療組哮喘癥狀均有所改善，尤其呼吸急促改善明顯，地塞米松+芪肺湯組改善最為明顯。

2.2 肺組織病理結(jié)果 如圖1，正常組未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡、支氣管黏膜上皮結(jié)構(gòu)完整清晰，支氣管無(wú)痙攣；與正常組比較，哮喘組肺組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管黏膜上皮細(xì)胞排列紊亂，肺泡間隔增厚等典型支氣管哮喘病理表現(xiàn)，治療后芪肺湯組和地塞米松組與哮喘組比較，支氣管黏膜上皮細(xì)胞排列較為整齊，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減輕，地塞米松+芪肺湯組明顯優(yōu)于其他治療組。

2.3 BALF細(xì)胞總數(shù)及分類(lèi)計(jì)數(shù)結(jié)果 如圖2所示，與正常組相比，哮喘組BALF涂片細(xì)胞總計(jì)數(shù)及淋巴細(xì)胞（Lym）總數(shù)顯著升高（P<0.01）；而三種治療組中相比哮喘組均出現(xiàn)明顯降低。與正常組相比，哮喘組BALF涂片嗜酸性粒細(xì)胞（Eos）計(jì)數(shù)顯著升高（P<0.01）；而三種治療方案中，地塞米松治療組及地塞米松+芪肺湯聯(lián)合治療組Eos均明顯低于哮喘組（P<0.01），芪肺湯下降較為不明顯。與正常組相比，哮喘組BALF涂片中性粒細(xì)胞（Neu）計(jì)數(shù)顯著升高（P<0.01）；而相對(duì)哮喘組，地塞米松治療組Neu變化不顯著，而芪肺湯治療組BALF中Neu計(jì)數(shù)顯著低于哮喘組（P<0.01），而且，地塞米松+芪肺湯聯(lián)合治療組中Neu計(jì)數(shù)顯著低于地塞米松治療組（P<0.01）。

3. 討論

此前哮喘常用的糖皮質(zhì)激素療法主要針對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞相關(guān)反應(yīng)進(jìn)行改善，但是對(duì)中性粒細(xì)胞干預(yù)不明顯，這也是文獻(xiàn)中報(bào)道的糖皮質(zhì)激素難治性哮喘的主要病理原因之一。本研究證實(shí)了芪味理肺湯可以改善支氣管哮喘的氣道炎癥和中性粒細(xì)胞激活，減低了相關(guān)的炎癥反應(yīng)。而芪味理肺湯與糖皮質(zhì)激素聯(lián)合應(yīng)用可以同時(shí)抑制嗜酸性粒細(xì)胞及中性粒細(xì)胞激活，從而更好地消除和調(diào)控氣道炎癥反應(yīng)，因此可能在治療機(jī)理上具有協(xié)同作用，其臨床價(jià)值值得在實(shí)踐中進(jìn)行深入研究。

參考文獻(xiàn)

[1] 于宗學(xué)， 李強(qiáng)， 胡東明. 中醫(yī)治療在支氣管哮喘治療中的應(yīng)用概述[J]. 中國(guó)中醫(yī)急癥， 2014， 23（3）：489-490.

[2] 彭芬， 黃華， 錢(qián)煒. 糖皮質(zhì)激素對(duì)哮喘患兒的臨床療效及作用機(jī)制研究[J]. 中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志， 2016， 32（1）：3-5.

[3] 王彥， 王斌， 陳華萍，等. 中性粒細(xì)胞性哮喘臨床特征分析[J]. 中國(guó)呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志， 2011， 10（4）：317-320.

[4] 李春雷， 史琦， 閻玥， 李四維， 張玲，孔艷華等.芪味理肺湯對(duì)哮喘大鼠血清清除氧自由基能力的影響[J]. 中華中醫(yī)藥雜志， 2015（5）：1644-1647.

通訊作者：朱唯芳