金衍健, 鄒德云, 嚴忠雍, 方 益

(1.浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江省海水增養(yǎng)殖重點實驗室，浙江舟山 316021；2.浙江省杭州中一檢測研究院有限公司，浙江杭州 310052)

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超高液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定養(yǎng)殖水體中三唑磷

金衍健1, 鄒德云2, 嚴忠雍1, 方 益1

(1.浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江省海水增養(yǎng)殖重點實驗室，浙江舟山 316021；2.浙江省杭州中一檢測研究院有限公司，浙江杭州 310052)

摘要[目的]研究超高液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定養(yǎng)殖水體中三唑磷的可行性。[方法]建立了超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定養(yǎng)殖水體中三唑磷的分離方法。采用二氯甲烷和正己烷分次提取合并，用堿性氧化鋁柱凈化樣品，以外標法定量。分別對淡水和海水進行低、中、高(1.0 、5.0、25.0 ng)3個梯度濃度進行加標，并測定其回收率。[結果]超高液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法的標準液濃度為1.0～60.0 μg/L 時，線性良好(R2=0.999 0)，回收率為78.3%～88.3%，RSD為4.39%～7.56%，方法檢出限在0.002 μg /L。[結論]超高液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法靈敏度高，檢測速度快的特點，可用于養(yǎng)殖水體中三唑磷的檢測分析。

關鍵詞高液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜；三唑磷；養(yǎng)殖水體

三唑磷(Triazophos)是一種廣譜有機磷殺蟲劑、殺螨劑、殺線蟲劑，主要用于防治果樹、棉花、糧食類作物的鱗翅目害蟲、害螨、蠅類幼蟲及地下害蟲等, 具有強烈的觸殺、胃毒作用和兼具一定內(nèi)吸作用[1]。隨著大多數(shù)有機氯和有機磷高毒農(nóng)藥的禁用,三唑磷在環(huán)境中能較快速降解，因此對其需求越來越大,且在短時間內(nèi)難以被其他品種農(nóng)藥取代[2]。石利利等[3]研究了三唑磷在土壤中的降解特性，結果表明，降解半衰期分別為28.30、3.75和3.28 d，且不易向下滲漏[3]，三唑磷在大規(guī)模使用后可通過遷移、擴散和轉(zhuǎn)化進入食物鏈和食物網(wǎng)，可對生態(tài)系統(tǒng)的結構和功能產(chǎn)生不良影響。由于三唑磷對水生生物具有毒性，國內(nèi)外學者對其毒理學進行了多方面的研究[4-8]。水環(huán)境作為三唑磷的收納體，勢必會對養(yǎng)殖水體產(chǎn)生影響。目前對三唑磷的檢測分析一般以GC和GC-MS為主[9-11]，而對超高液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS)測定養(yǎng)殖水體中三唑磷卻鮮見報道。UPLC-MS/MS法穩(wěn)定快速,操作簡單,分離完全,結果重現(xiàn)性好,是一種實用的檢測方法。筆者采用UPLC-MS/MS測定了養(yǎng)殖水體中的三唑磷，旨在為提高養(yǎng)殖水體中農(nóng)藥測定的準確度和精確性提供科學依據(jù)。

1材料與方法

1.1供試儀器儀器：ACQUITY 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國Waters 公司)，配電噴霧離子源； R-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海精勝科學儀器有限公司)；高速離心機(Centrifuge5810，Eppendorf 公司)；渦旋振蕩器；氮吹儀。

1.2供試試劑主要試劑為堿性氧化鋁柱(1∶3)，乙腈(色譜純)，正己烷(色譜純)，甲酸(色譜純)，丙酮(色譜純)，純水，濾紙。

1%甲酸水溶液：取500.00 mL水，向其中加入0.50 mL色譜純甲酸；初始流動：取1%甲酸水溶液80.00 mL，加入120.00 mL乙腈；三唑磷標準工作液配制(100 μg/L)：三唑磷標準溶液購買于農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護部科研檢測所，其濃度為(100±0.19)mg/L，溶于1.00 mL甲醇，取標準溶液0.10 mL用100.00 mL初始流動相定容至100.00 mL，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3樣品處理取500.00 mL水樣，用濾紙過濾其中大顆粒固體雜質(zhì)，然后置于500 mL分液漏斗中，加入20.00 mL二氯甲烷溶劑，充分震蕩搖勻后，靜置5 min，取下層二氯甲烷有機相層過無水硫酸鈉，收集于100 mL雞型瓶內(nèi)，再向水相中加入20.00 mL正己烷，充分震蕩搖勻靜置3 min，棄去水相層，收集正己烷過無水硫酸鈉合并于100 mL雞型瓶中，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。向雞型瓶中加入2.00 mL正己烷丙酮溶液(9∶1，V/V)置于渦旋震蕩器上充分溶解，待測。

堿性氧化鋁活化：用正己烷丙酮溶液(9∶1，V/V)3.00 mL淋洗活化，再向柱子中加入濃縮萃取液，緩慢過柱，收集有機相于10.00 mL玻璃離心管中，繼續(xù)向雞型瓶加入2.00 mL正己烷丙酮溶液(9∶1，V/V)洗脫后繼續(xù)過堿性氧化鋁柱，最后用1.00 mL正己烷丙酮溶液(9∶1，V/V)洗脫后，置玻璃管于氮吹儀上氮吹至干，用1%甲酸-乙腈(4∶6，V/V)溶液1.00 mL洗脫，經(jīng)0.22 μm 濾膜過濾后，供色譜分析。

1.4色譜條件 色譜柱: ACQUITY UPLC BEH C18 柱2.1 mm×50.0 mm，粒徑1.7 μm，柱溫40 ℃，樣品溫度10 ℃，進樣量10 μL，流速0.3 mL / min，流動相A 為1%甲酸水溶液，B為乙腈(色譜純)。梯度洗脫。梯度洗脫設置見表1。

表1　流動相洗脫梯度

1.5質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源，使用正離子掃描； 檢測方式：多反應監(jiān)測；毛細管電壓：3.0 kV；離子源溫度：110 ℃；錐孔氣流量：45 L/h；脫溶劑氣流量：550 L/h；脫溶劑氣溫度：300 ℃[12]。

采用1.7 μm 填料的ACQUITY UPLC BEHC18 (2.1 mm×50.0 mm)色譜柱，在表1的洗脫條件下，以20.0 μg/L的三唑磷標準溶液通過調(diào)諧毛細管電壓、錐孔電壓和碰撞電壓等條件獲得最佳質(zhì)譜條件，對質(zhì)譜參數(shù)進行優(yōu)化，優(yōu)化后質(zhì)譜多反應監(jiān)測試驗條件見表2。MRM色譜見圖1，得出三唑磷保留時間在1.61 min左右出峰，相對GC-NPD、GC-MS和GC-MS/MS能更加快速地分析樣品。

表2　質(zhì)譜多反應監(jiān)測質(zhì)譜參數(shù)

圖1　三唑磷標準溶液的MRM色譜Fig.1　MRM chromatogram of triazophos standard solution

2結果與分析

2.1線性范圍檢出限用三唑磷標準使用液配制濃度分別為1.0、5.0、10.0、20.0、40.0、60.0 μg /L的標準工作溶液，進樣后制作標準曲線，結果以響應值為縱坐標，三唑磷標準溶液濃度值為橫坐標，以Excel線性擬合。從圖2可見，在1.000～60.000 μg /L 范圍內(nèi)方法線性良好，R2為0.999 0。以0.500 μg /L樣品中測定信噪比，最終按照10倍信噪比確定該方法的定量檢出限為0.002 μg/L。

圖2　三唑磷的標準曲線Fig.2　Standard curve of triazophos

2.2精密度與回收率在三唑磷本底值未檢出的養(yǎng)殖淡水和海水中分別加入三唑磷低、中、高(1.0、5.0、25.0 ng)3個水平的樣品加標，每批加標樣重復測定6次，以外標法定量，計算其回收率和精密度。

由表3可知，淡水水體和海水水體的平均回收率分別為78.30%～88.30%和80.50%～87.30%,RSD分別為5.44%～7.56%和4.39%～7.26%。

3小結

該研究建立了超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定養(yǎng)殖水體中三唑磷的分析方法，采用堿性氧化鋁柱凈化樣品，并對其檢出限、精密度進行評估。結果表明：在1.0～ 60.0 μg/L 范圍內(nèi)方法線性良好，該方法具有靈敏度高，檢測速度快，可用于養(yǎng)殖水體中三唑磷的檢測分析。

表3　樣品加標回收率和精密度

參考文獻

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基金項目浙江省科技廳院所專項(2016F30021)。

作者簡介金衍健(1988- )，男，浙江永嘉人，助理工程師，從事漁業(yè)環(huán)境監(jiān)測研究。

收稿日期2016-04-03

中圖分類號S 912

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2016)13-097-02

Determination of Triazophos in Aquaculture Water by UPLC-MS/MS

JIN Yan-jian1, ZOU De-yun2, YAN Zhong-yong1et al

(1.Key Laboratory of Mariculture & Enhancement of Zhejiang Province, Marine Fisheries Research Institute of Zhejiang Province, Zhoushan, Zhejiang 316021; 2.Hangzhou Zhongyi Testing Institute Co., Ltd., Hangzhou, Zhejiang 310052)

Abstract[Objective] To research determination feasibility of triazophos in aquaculture water by UPLC-MS/MS.[Method] Isolation method for triazophos determination in aquaculture water was established by UPLC-MS/MS.Dichloromethane and hexane were used to extract samples, respectively.Then, we combined the extracted liquid and purified the samples by basic alumina column.External standard method was used for quantification.Standard was added in three gradient concentrations (1.0, 5.0, 25.0 ng) in freshwater and seawater.And the recovery rate was detected.[Conclusion] When the concentration of standard solution was 1.0-60.0 μg /L, the linearity was good (R2 = 0.999 0) and the recovery rate was 78.3%-88.3% and RSD was 4.39% -7.56%.Method detection limit was 0.002 μg/L.[Conclusion] UPLC-MS/MS has the characteristics of high sensitivity and fast detection speed, which can be used to detect the triazophos in aquaculture water.

Key wordsUPLC-MS / MS; Triazophos; Aquaculture water