程遠 吳冷 趙蕾

口腔疾病研究國家重點實驗室 華西口腔醫(yī)院牙周病科（四川大學），成都 610041

?

齦溝產(chǎn)線菌檢出率與牙周健康狀況的相關性分析

程遠 吳冷 趙蕾

口腔疾病研究國家重點實驗室 華西口腔醫(yī)院牙周病科（四川大學），成都 610041

［摘要］目的 分析不同牙周健康狀況者齦下菌斑中齦溝產(chǎn)線菌的檢出率差異及其與牙周臨床指標間的相關關系。方法 應用聚合酶鏈反應法分別檢測17例牙周健康者的68個牙周健康位點、19例菌斑性牙齦炎患者的64個牙周健康位點和76個病變位點、14例慢性牙周炎患者的36個牙周健康位點和56個病變位點的齦下菌斑中齦溝產(chǎn)線菌的檢出率，并分析檢出率與牙周臨床檢查指標之間的相關關系。結果 齦溝產(chǎn)線菌的檢出率在不同人群的健康位點組及不同人群疾病位點組依次分別增高，其中牙周健康者齦下菌斑中齦溝產(chǎn)線菌檢出率最低，為30.88%（21/68），而慢性牙周炎患者病變位點組齦下菌斑中齦溝產(chǎn)線菌檢出率最高，為91.07%（51/56）。齦溝產(chǎn)線菌與位點發(fā)生牙周病變之間的相關性有統(tǒng)計學意義（P＜0.000 1），其檢出率與位點牙齦出血指數(shù)、臨床探診深度、臨床附著水平的比值比分別為5.26、8.85、11.65。結論 牙周炎患者口腔中攜帶齦溝產(chǎn)線菌的風險升高；局部攜帶齦溝產(chǎn)線菌增加了位點牙周臨床指標（牙齦出血指數(shù)、臨床探診深度、臨床附著水平）異常的風險。

［關鍵詞］牙周健康狀況； 齦溝產(chǎn)線菌； 聚合酶鏈反應； 檢出率

牙周炎是一種牙周組織感染性破壞性疾病，可導致牙周袋形成，進行性附著喪失和牙槽骨吸收，是成人失牙的首要原因，而菌斑微生物是牙周炎的始動因子。目前已明確的與牙周炎密切相關的重要牙周致病菌有11種［1］，主要有牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas gingivalis，P. gingivalis）、伴放線菌嗜血菌（Actinobacillus actinomycetemcomitans，A. actinomycetemcomitans）、福賽斯坦納菌（Tannerella forsythia，T. forsythia）、中間普雷沃菌（Prevotella intermedia，P. intermedia）、齒垢密螺旋體（Treponema denticola，T. denticola）等［2］。隨著研究技術水平的提高，近年來陸續(xù)從牙周炎患者口腔中分離出一些新的菌屬和菌種，齦溝產(chǎn)線菌（Filifactor alocis，F(xiàn). alocis）即為其中之一。

F. alocis由Cato等［3］于1986年在牙齦炎和牙周炎患者的齦下微生境中分離獲得，是一種培養(yǎng)條件苛刻無芽孢革蘭陽性專性厭氧桿型菌，以單個、成雙或鏈狀形式出現(xiàn)。菌細胞寬為0.4～0.7 μm，長為1.4～7.0 μm，從頭部到尾部呈逐漸縮窄的圓錐形形態(tài)［4］。F. alocis常定植于牙周炎患者的病變位點，在牙周健康位點也可檢出；但F. alocis在慢性牙周炎患者中的檢出率明顯高于牙周健康者，在牙周炎患者病變位點的檢出率也高于其健康位點。Kumar等［5］在分析齦下菌群的細菌轉變與牙周狀況變化的相關關系中發(fā)現(xiàn)：牙周狀況持續(xù)穩(wěn)定者齦下菌群的組成相對保守和穩(wěn)定，牙周狀況改善或惡化者則出現(xiàn)明顯的變化；在其調查的136種齦下微生物中，F(xiàn). alocis的組成百分比變化最為明顯。該結果提示，F(xiàn). alocis可能是鑒別牙周炎活動性的一項正相關指標。2012年，Colombo等［6］的研究顯示：F. alocis在難治性牙周炎患者中檢出率明顯高于非難治性牙周炎患者，從而認為F. alocis可能是導致牙周炎治療效果不佳的重要原因之一。綜合這些研究結果可以推測，F(xiàn). alocis可能是牙周炎的可疑致病菌。目前有關該菌的總體研究尚處于起步階段。本實驗通過分析我國成人牙周健康者，菌斑性牙齦炎和慢性牙周炎患者的健康和疾病位點的齦下菌斑中F. alocis的檢出率，以及F. alocis與不同牙周臨床指標的相關關系，初步探討F. alocis與我國人群牙周健康狀況之間存在的可能關系，為牙周炎微生物病因學的研究提供思路。

1 材料和方法

1.1 實驗菌株

P. gingivalis國際標準株ATCC 33277和變異鏈球菌（Streptococcus mutans，S. mutans）國際標準株UA159，由四川大學口腔疾病研究國家重點實驗室提供。

1.2 研究對象的選擇

于四川大學華西口腔醫(yī)院就診的患者及其家屬中篩選年齡為20～70歲的中國漢族人群，分別選取牙周健康者、菌斑性牙齦炎患者和慢性牙周炎患者。要求所有受試者全身健康，無系統(tǒng)性疾??；3個月內(nèi)無抗生素、非激素類抗炎藥物及免疫抑制劑服用史；婦女未在妊娠期和哺乳期；3個月內(nèi)無牙周治療史；口內(nèi)天然牙不少于20顆，且每個象限不少于5顆，其中至少有4顆磨牙；無咬合創(chuàng)傷；口內(nèi)無正畸裝置或/和義齒；口腔內(nèi)無黏膜病損；能夠配合調查和取樣。

本研究經(jīng)四川大學華西口腔醫(yī)院倫理委員會批準（項目編號WCHSIRB-D-2-13-133），所有受試者均告知實驗目的和取樣方法，表示知情同意并愿意參加者被納入。

不同人群的納入標準如下。1）牙周健康者：牙周健康人群的納入標準參照Stingu等［7］的研究，全口牙牙周探診深度（probing depth，PD）≤3 mm，無臨床附著喪失（clinical attachment loss，CAL），探診出血（bleeding on probing，BOP）陽性位點＜10%，且出血位點牙齦出血指數(shù)（bleeding index，BI）≤1，無明顯牙齦紅腫或退縮。牙周健康牙納入標準參照馮向輝等［8］的研究，納入牙排除齲壞、牙髓治療、充填體懸突、食物嵌塞等干擾因素，要求牙齦無紅腫，PD≤3 mm，BI≤1，無臨床附著喪失。2）菌斑性牙齦炎患者：診斷標準采用Armitage（1999年）新分類方法［9］，同時還需滿足口內(nèi)4個象限中均需有牙齦炎患牙和牙周健康牙，其中牙周健康牙納入標準同上。3）慢性牙周炎患者：診斷標準采用Armitage（1999年）的新分類方法［9］，同時還需滿足炎癥位點超過30%，口內(nèi)4個象限中均需有牙周炎患牙和牙周健康牙的標準，其中牙周健康牙納入標準同上。

1.3 菌斑樣本的采集及記錄

菌斑樣本采集位點的選擇方法如下：1）牙周健康者分別選取16、26、36、46牙的近頰位點，若不符合條件（缺失、充填體懸突、齲壞、牙髓治療、食物嵌塞等），則依次選取其他牙（選取順序為磨牙—前磨牙—前牙）的近頰位點，取樣位點不與患牙位點相毗鄰；2）菌斑性牙齦炎患者每個象限內(nèi)選取一個牙齦炎患牙位點（選取順序為磨牙—前磨牙—前牙；且排除充填體懸突、齲壞、牙髓治療等），每個象限內(nèi)選取不超過一個牙周健康位點；3）慢性牙周炎患者每個象限內(nèi)選取PD值最大的一個位點（患牙排除充填體懸突、齲壞、牙髓治療等），每個象限內(nèi)選取不超過一個牙周健康位點。

菌斑采集方法：用無菌刮匙去除受試牙待測位點的齦上菌斑，無菌棉球隔濕，干燥，待檢位點先后插入2根25號滅菌紙尖直至齦溝或牙周袋底，靜置15 s取齦下菌斑；取出后立即置于含有1 mL厭氧轉送液的無菌離心管中，-80 ℃凍存?zhèn)溆?。對每位受試者進行全口牙周檢查并記錄取樣位點的齦溝或牙周袋的PD、CAL、BOP、BI。所有位點由同一位牙周?？漆t(yī)生進行獨立測量。

1.4 DNA的提取及聚合酶鏈反應（polymerase chain

reaction，PCR）

參考細菌DNA提取試劑盒［天根生化科技（北京）有限公司］說明書進行樣本細菌的DNA提取。細菌16S rDNA通用引物序列及F. alocis特異性引物大小分別為434 bp和594 bp，引物序列設計參考文獻［10-11］，具體如下。16S rDNA上游5’-AACGCGAAGAACCTTAC-3’，下游5’-GCGTGTGTACAAGACCC-3’； F. alocis上游5’-CAGGTGGTTTAACAAGTTAGTGG-3’，下游5’-CTAAGTTGTCCTTAGCTGTCTCG-3’。參考Premix Taq R001AM試劑盒（大連TaKaRa公司）說明進行PCR反應。PCR總反應體系50 μL，包括：Takara Taq（5 U·μL-1）0.25 μL，10× PCR Buffer（不含Mg2+）5 μL，25 mmol·L-1MgCl23 μL，dNTP Mixture（各2.5 mmol·L-1）4 μL，上下游引物各1 μL，待測DNA模板10 μL，補充滅菌雙蒸水至50 μL。參照文獻［12］設置循環(huán)參數(shù)。1）細菌16S rDNA通用引物：預變性94 ℃ 2 min；變性94 ℃1 min，退火55 ℃ 1 min，延伸72 ℃ 1 min，36個循環(huán)；最后延伸72 ℃ 5 min。2）F. alocis特異性引物：預變性94 ℃ 2 min；變性94 ℃ 30 s，退火55 ℃ 1 min，延伸72 ℃ 2 min，36個循環(huán)；最后延伸72 ℃ 10 min。

1.5 PCR產(chǎn)物的凝膠電泳及鑒定分析

PCR擴增產(chǎn)物電泳后采用全自動凝膠成像分析系統(tǒng)觀察并記錄，100 bp Marker確定擴增產(chǎn)物的相對分子質量。

因本實驗中無法獲得F. alocis標準株作為陽性對照，為證實F. alocis特異性引物PCR擴增反應的準確性，對其PCR擴增產(chǎn)物（594 bp）進行純化及測序（由大連寶生物工程有限公司協(xié)助完成）。測序結果與GenBank（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/ Blast.cgi）中F. alocis標準株ATCC 35896T的核苷酸序列進行比對，結果經(jīng)BLAST測序分析相似度。

1.6 統(tǒng)計學分析

應用統(tǒng)計分析軟件包SPSS 17.0進行數(shù)據(jù)處理。應用方差分析進行人口學特征分析，卡方檢驗比較不同牙周狀況群體的待檢位點F. alocis的檢出率，與各臨床指標相關的F. alocis的檢出率，雙向有序關聯(lián)檢驗分析各臨床指標與F. alocis的關系。檢驗水準為雙側α=0.05。

2 結果

2.1 PCR擴增反應的準確性驗證

細菌16S rDNA通用引物和F. alocis特異性引物的PCR擴增產(chǎn)物電泳結果見圖1。細菌樣本經(jīng)通用引物擴增后，可見434 bp大小的陽性條帶；臨床樣本經(jīng)特異性引物擴增后，可見594 bp的陽性條帶；而P. gingivalis和S. mutans經(jīng)特異性引物擴增后未見陽性條帶，排除假陽性的干擾。隨機選取電泳后出現(xiàn)594 bp大小條帶的PCR產(chǎn)物進行送檢測序。測序結果與GenBank中F. alocis國際標準株ATCC 35896T的核苷酸序列進行比對，結果經(jīng)BLAST分析，相似度均達到99.9%以上。說明本研究擴增所得產(chǎn)物為目的基因片段。

圖 1 通用引物及F. alocis特異性引物的PCR擴增產(chǎn)物電泳圖Fig 1 PCR amplification electrophoretogram of universal primers and F. alocis specific primer

2.2 不同牙周狀況組的納入情況、牙周臨床指標檢測結果及F. alocis檢出率的比較

本研究共納入17例牙周健康者的68個牙周健康位點；19例菌斑性牙齦炎患者的64個牙周健康位點和76個牙齦炎病變位點；14例慢性牙周炎患者的36個牙周健康位點和56個牙周病變位點。17例牙周健康者男性10例，女性7例，年齡（36.00±6.80）歲；19例菌斑性牙齦炎患者男性14例，女性5例，年齡（31.42± 6.92）歲；14例慢性牙周炎患者男性8例，女性6例，年齡（46.00±11.96）歲。經(jīng)統(tǒng)計學檢驗，3組研究對象性別比例的差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），牙周健康者和菌斑性牙齦炎患者的平均年齡與慢性牙周炎患者的差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

所有位點的取樣樣本共分為5組，牙周健康者健康位點組（H組）、菌斑性牙齦炎患者健康位點組（G-H組）、菌斑性牙齦炎患者疾病位點組（G-D組）、慢性牙周炎患者健康位點組（P-H組）、慢性牙周炎患者疾病位點組（P-D組）。5組的牙周臨床指標檢測結果及F. alocis檢出率結果如表1所示。從不同人群的健康位點組到疾病位點組，F(xiàn). alocis的檢出率依次增高。健康位點中，H組68個位點的F. alocis檢出率為30.88%（21/68），G-H組為35.94% （23/64），P-H組為55.56%（20/36），其中H組與P-H組的差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；病變位點中，G-D組的F. alocis檢出率為65.79%（50/76），PD組為91.07%（51/56），兩者比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.000 1）。牙齦炎患者的健康位點（G-H組）與其病變位點（G-D組）的F. alocis檢出率兩兩比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）；牙周炎患者的健康位點（P-H組）與其病變位點（P-D組）的F. alocis檢出率兩兩比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.000 1）。牙周健康者的健康位點（H組）與牙齦炎患者的病變位點（G-D組）、牙周炎患者的病變位點（P-D組）比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）；牙齦炎患者的健康位點（G-H組）與牙齦炎患者的病變位點（G-D組）、牙周炎患者的病變位點（P-D組）比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。

表 1 不同牙周狀況組的臨床及微生物學檢查結果Tab 1 Clinical and microbiological parameters for different periodontal groups evaluated

2.3 F. alocis檢出情況與牙周臨床指標的相關性分析

本研究共納入300個研究位點，其中135個位點未檢出F. alocis，165個位點F. alocis檢出陽性（表2）。在F. alocis檢出陰性的所有位點中，22.96% （31/135）的位點發(fā)生牙齦炎或牙周炎，而F. alocis檢出陽性的所有位點中，61.21%（101/165）的位點發(fā)生牙齦炎或牙周炎，兩者間的差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.000 1）。這提示攜帶F. alocis增加了位點發(fā)生牙周病變的可能性。進一步分析F. alocis的檢出情況與牙周臨床指標的相關性，結果如表3所示。F. alocis陽性位點較F. alocis陰性位點的BI、PD、CAL發(fā)生異常的風險增加（P＜0.000 1），提示攜帶F. alocis增加了位點臨床指標異常的風險。經(jīng)統(tǒng)計學檢驗，本研究中F. alocis與位點發(fā)生牙周病變之間的相關性有統(tǒng)計學意義，比值比（odds ratio，OR）為5.29（95%可信區(qū)間為3.18～8.01）。此外，F(xiàn). alocis 與BI、PD、CAL的OR值分別為5.26（95%可信區(qū)間3.14～8.77），8.85（95%可信區(qū)間4.05～19.23），11.65（95%可信區(qū)間4.49～30.15）；這提示F. alocis與位點臨床指標（BI、PD、CAL）的異常具有明顯的相關性。

表 2 F. alocis檢出情況與位點牙周健康狀況的相關性分析Tab 2 The correlation analysis between occurrence of F. alocis and different periodontal sites

以牙齦炎患者、牙周炎患者的病變位點為研究對象，以各臨床指標為研究單位，進一步分析F. alocis檢出情況與牙周病變嚴重程度之間的相關性，結果顯示：分別比較G-D組、P-D組內(nèi)BI為2～3的位點與BI為4～5的位點F. alocis檢出率，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），這提示在牙齦炎及牙周炎病變位點中，F(xiàn). alocis的檢出率不隨BI指數(shù)的增加而增加；P-D組內(nèi)比較PD為4～6 mm位點與PD≥7 mm的位點F. alocis檢出率，差異無統(tǒng)計學意義（P=0.558），提示在牙周炎病變位點中，F(xiàn). alocis的檢出率不隨PD指數(shù)的增加而增加；P-D組內(nèi)比較CAL≥5 mm的位點與2 mm≤CAL≤4 mm的位點F. alocis檢出率，差異無統(tǒng)計學意義（P=0.135），提示在牙周炎病變位點中，F(xiàn). alocis的檢出率不隨著CAL指數(shù)的增加而增加。

表 3 F. alocis檢出情況與位點牙周臨床指標的相關性分析Tab 3 The correlation analysis between occurrence of F. alocis and periodontal clinical indices

3 討論

菌斑微生物是牙周炎發(fā)生的始動因子。近年來隨著研究技術水平的不斷提高，陸續(xù)從牙周炎患者的口腔中分離出一些新的菌屬和菌種，F(xiàn). alocis就是其中之一。通過分析牙周炎患者齦下細菌微生態(tài)組成，發(fā)現(xiàn)F. alocis可能是牙周炎的可疑致病菌之一。然而，目前有關該菌的總體研究尚處于起步階段，針對我國，甚至東亞人群的齦下微生境中F. alocis分布情況的調查尚少見報道?；谶@種情況，本研究擬對F. alocis與我國人群牙周健康狀況的相關關系作分析。

本研究共納入17例牙周健康者，19例菌斑性牙齦炎患者，14例慢性牙周炎患者。人口分布學特征分析顯示：3組人群間性別分布無統(tǒng)計學差異，但年齡分布存在統(tǒng)計學差異，其中慢性牙周炎人群的平均年齡偏高。導致這一差異主要有以下兩個方面的原因。1）我國人民口腔衛(wèi)生保健意識較薄弱，35歲以上人群的牙周炎患病率明顯上升。2005年第三次全國口腔流行病學調查結果顯示，牙周炎患病率高達90%以上；因此，在我國成年人中篩選和納入牙周健康者和慢性牙齦炎患者相對困難，導致本研究出現(xiàn)年齡分布的差異性。2）本實驗各組納入的樣本人數(shù)較少，進一步研究需擴大樣本量以減少各組之間的差異。

本研究在3組人群中篩選牙周健康者的健康位點、牙齦炎患者健康位點、牙齦炎患者病變位點、牙周炎患者健康位點、牙周炎患者病變位點并進行分組，分析不同牙周狀況位點組的齦下菌斑中F. alocis的檢出情況。結果顯示：F. alocis的檢出率在不同人群的健康位點組及不同人群疾病位點組依次分別增高，且組間兩兩比較的差異均有統(tǒng)計學意義。這提示牙周炎患者口腔中攜帶F. alocis的風險升高。這一研究結果與國外研究［13-15］相似。Schlafer等［13］分析了F. alocis與牙周炎的相關性，結果發(fā)現(xiàn)，F(xiàn). alocis在慢性牙周炎組檢出率（76.7%）明顯高于牙周健康者（15.8%）。Dahlén等［14］的研究顯示，50例牙周炎患者病變位點的F. alocis檢出率顯著高于其健康位點。2012年，Griffen等［15］應用454超高通量測序技術再次證實，F(xiàn). alocis的檢出率在牙周健康者、慢性牙周炎患者的健康位點和病變位點中依次升高。本研究中牙周健康者的健康位點組及牙周炎疾病位點組檢出率略高于國外的研究結果，這可能與樣本量大小、檢測方法、種族和基因背景等諸多因素有關。本研究納入的不同人群的健康位點組中也可檢出F. alocis，提示牙周炎的發(fā)生發(fā)展不僅與細菌的存在與否相關，還與宿主易感性、致病菌毒力、細菌間相互作用、細菌的定植數(shù)量等諸多因素有關。

本研究隨后分析了F. alocis檢出情況與牙周健康狀況的相關關系，結果顯示，F(xiàn). alocis檢出陽性的位點發(fā)生牙周病變的可能性增加（P＜0.000 1），OR值為5.29。此外，待測位點攜帶F. alocis增加了位點牙周臨床指標（BI、PD、CAL）異常的風險；提示攜帶F. alocis可增加牙齦出血、牙周袋形成、附著喪失的風險，從而導致牙周狀況的改變，F(xiàn). alocis與牙周炎的發(fā)生發(fā)展可能存在著相關關系。進一步分析F. alocis檢出率與牙周病變嚴重程度的關系，結果顯示，F(xiàn). alocis檢出率與BI、PD、CAL指數(shù)的變化不具有相關性，盡管F. alocis增加了位點臨床指標異常的風險，但與位點病變的嚴重程度不存在明顯相關性。這一結果與Schlafer等［13］的研究結果類似。Schlafer等［13］采用點雜交技術檢測F. alocis在牙周袋各部位的分布情況，結果發(fā)現(xiàn)，PD為4～6 mm的牙周袋與PD為7～9 mm的牙周袋中F. alocis的檢出率雖高于對照組健康位點，但其差異無統(tǒng)計學意義。

上述研究結果均提示，F(xiàn). alocis可能與牙周組織的破壞具有相關性，體外研究也證實了這一觀點。Moffatt等［16］研究F. alocis作用于牙齦上皮細胞的影響，結果顯示，F(xiàn). alocis可黏附于牙齦上皮細胞表面并侵入細胞中，與細菌共培養(yǎng)的細胞分泌白細胞介素-1β、白細胞介素-6、腫瘤壞死因子-α的量較對照組明顯升高，而白細胞介素-8無明顯變化。研究者認為F. alocis在促進細胞表達促炎細胞因子的同時，可能與P. gingivalis類似，能夠抑制局部白細胞介素-8水平達到“免疫麻痹效應”，從而有利于自身躲避宿主免疫防御攻擊。同時研究還發(fā)現(xiàn)：F. alocis可能通過抑制絲裂原活化蛋白激酶激酶（mitogen activated protein kinase kinase，MEK）的活性來激活caspase-3，引起細胞發(fā)生外源性細胞凋亡途徑，這一方式又與T. denticola引起上皮細胞凋亡的機制相似。

PCR電泳只能定性反映不同牙周狀況下齦下菌斑中F. alocis的檢出率，無法準確地定量分析不同實驗組間F. alocis數(shù)量是否存在差異，以及位點中F. alocis的數(shù)量水平與牙周病變程度的可能關系。有趣的是，在本研究的PCR產(chǎn)物電泳分析實驗中，不同組的PCR產(chǎn)物電泳條帶的亮度存在差異性趨勢。因此，后續(xù)研究將擴大樣本量，并采用定量PCR的方法進一步分析F. alocis攜帶數(shù)量與牙周臨床狀況之間的相關關系。

［參考文獻］

［1］孟煥新. 牙周病學［M］. 北京: 人民衛(wèi)生出版社， 2008:95. Meng HX. Periodontology［M］. Beijing: People’s Medical Publishing House， 2008:95.

［2］周婷， 徐屹， 丁一， 等. 慢性牙周炎齦下菌斑中五種牙周可疑致病微生物的分布［J］. 華西口腔醫(yī)學雜志， 2007， 25 （5）:470-473. Zhou T， Xu Y， Ding Y， et al. Distribution of five periodontal pathogens in subgingival plaque in chronic periodontitis［J］. West China J Stomatol， 2007， 25（5）:470-473.

［3］Cato EP， Moore LVH， Moore WEC. Fusobacterium alocis sp. nov. and Fusobacterium sulci sp. nov. from the human gingival sulcus［J］. Int J Syst Bacteriol， 1986， 36（4）:475-477.

［4］Haffajee AD， Socransky SS. Microbial etiological agents of destructive periodontal diseases［J］. Periodontol 2000， 1994，5:78-111.

［5］Kumar PS， Leys EJ， Bryk JM， et al. Changes in periodontal health status are associated with bacterial community shifts as assessed by quantitative 16S cloning and sequencing［J］. J Clin Microbiol， 2006， 44（10）:3665-3673.

［6］Colombo AP， Bennet S， Cotton SL， et al. Impact of periodontal therapy on the subgingival microbiota of severe periodontitis: comparison between good responders and individuals with refractory periodontitis using the human oral microbe identification microarray［J］. J Periodontol，2012， 83（10）:1279-1287.

［7］Stingu CS， Jentsch H， Eick S， et al. Microbial profile of patients with periodontitis compared with healthy subjects ［J］. Quintessence Int， 2012， 43（2）:e23-e31.

［8］馮向輝， 張立， 孟煥新， 等. 侵襲性牙周炎病原微生物的檢測［J］. 中華口腔醫(yī)學雜志， 2006， 41（6）:344-347. Feng XH， Zhang L， Meng HX， et al. Prevalence of putative periodontal microorganisms in Chinese patients with aggressive periodontitis［J］. Chin J Stomatol， 2006， 41（6）:344-347.

［9］Armitage GC. Development of a classification system for periodontal diseases and conditions［J］. Ann Periodontol，1999， 4（1）:1-6.

［10］Dahlén G， Konradsson K， Eriksson S， et al. A microbiological study in relation to the presence of caries and calculus ［J］. Acta Odontol Scand， 2010， 68（4）:199-206.

［11］Siqueira JF， R??as IN. Detection of Filifactor alocis in endodontic infections associated with different forms of periradicular diseases［J］. Oral Microbiol Immunol， 2003， 18 （4）:263-265.

［12］Siqueira JF， R??as IN. Simultaneous detection of Dialister pneumosintes and Filifactor alocis in endodontic infections by 16S rDNA-directed multiplex PCR［J］. J Endod， 2004，30（12）:851-854.

［13］Schlafer S， Riep B， Griffen AL， et al. Filifactor alocis—involvement in periodontal biofilms［J］. BMC Microbiol，2010， 10:66.

［14］Dahlén G， Leonhardt A. A new checker board panel for testing bacterial markers in periodontal disease［J］. Oral Microbiol Immunol， 2006， 21（1）:6-11.

［15］Griffen AL， Beall CJ， Campbell JH， et al. Distinct and complex bacterial profiles in human periodontitis and health revealed by 16S pyrosequencing［J］. ISME J， 2012， 6（6）: 1176-1185.

［16］Moffatt CE， Whitmore SE， Griffen AL， et al. Filifactor alocis interactions with gingival epithelial cells［J］. Mol Oral Microbiol， 2011， 26（6）:365-373.

（本文編輯 吳愛華）

［中圖分類號］R 783

［文獻標志碼］A ［doi］ 10.7518/hxkq.2016.01.009

［收稿日期］2015-09-15； ［修回日期］ 2015-11-02

［基金項目］國家自然科學基金（81371150）；教育部留學回國人員科研啟動基金（2013-693-11-11）

［作者簡介］程遠，住院醫(yī)師，碩士，E-mail：yuan_a1989@163.com

［通信作者］趙蕾，副教授，博士，E-mail：jollyzldoc@163.com

Correlation analysis of Filifactor alocis detection with periodontal status

Cheng Yuan ， Wu Leng， Zhao Lei.
（State Key Laboratory of Oral Diseases， Dept. of Periodontics， West China Hospital of Stomatology， Sichuan University， Chengdu 610041， China）

Supported by: Natural Science Foundation of China （81371150 ）； State Education Ministry Scientific Research Foundation for The Returned Overseas Chinese Scholars （2013-693-11-11）. Correspondence: Zhao Lei， E-mail: jollyzldoc@163.com.

［Abstract］Objective The study investigated the epidemiology of Filifactor alocis （F. alocis） in subgingival plaque samples from subjects with different periodontal statuses. The relationship between the prevalence of F. alocis and clinical periodontal parameters was also analyzed. Methods Subgingival plaque samples and periodontal data were collected from 68 healthy sites （H groups） in 17 healthy subjects， 64 healthy （G-H group） and 76 diseased sites （G-D group） in 19 patients with chronic gingivitis， and 36 healthy （P-H group） and 56 diseased sites （P-D group） in 14 patients with chronic periodontitis. The plaque samples were analyzed by polymerase chain reaction， and possible correlations between the F. alocis detection rate and the bleeding index， probing depth， or clinical attachment level were determined. Results The detection levels of F. alocis increased in both healthy and diseased groups. The lowest level at 30.88% （21/68） was noted in the H group， whereas the highest level at 91.07% （51/56） was obtained from the P-D group. A significant correlation was found between the F. alocis detection levels and periodontal disease condition （P＜0.000 1）. Further analyses showed that a significant correlation also existed between the detection level of F. alocis and the abnormal clinical periodontal parameters， namely， bleeding index， probing depth， and clinical attachment loss. The odds ratios were 5.26， 8.85， and 11.65， respectively. Conclusion F. alocis was found at increasedlevels in subjects with periodontal disease. The presence of F. alocis increases the risk of sites with abnormal clinical periodontal parameters.

［Key words］periodontal state； Filifactor alocis； polymerase chain reaction； detection rate