薛 冰 景博瓊 徐 笛

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GP73在不同類型肝病中的應(yīng)用價(jià)值

薛 冰 景博瓊 徐 笛

【摘要】目的 探討高爾基體蛋白73（GP73）在慢性乙肝、肝硬化、肝細(xì)胞癌患者的表達(dá)水平。方法 采用酶聯(lián)免疫定量測定法和電化學(xué)發(fā)光法檢測63例原發(fā)性肝癌、77例肝硬化、83例慢性乙肝患者和75例健康人的血清中GP73、AFP含量。非正態(tài)分布數(shù)據(jù)多組間比較采用KW單因素方差分析，組間比較采用曼-惠特尼U檢驗(yàn)。率的比較用卡方檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果 GP73的含量在PHC組、肝硬化組、慢性乙肝組和健康對照組的總體分布不同（H=186.57，P＜0.01），進(jìn)一步兩兩比較，PHC組含量均高于其它各組（P＜0.01）。以肝硬化組為參照，繪制GP73診斷PHC的ROC曲線，其AUC為0.867，敏感度90.48%、特異度66.23%。結(jié)論 GP73對原發(fā)性肝癌的診斷有較高的靈敏度，是一種有價(jià)值的腫瘤標(biāo)志物，做為AFP診斷PHC的有效補(bǔ)充，可以提高PHC的早期診斷率。

【關(guān)鍵詞】高爾基體蛋白73；甲胎蛋白；原發(fā)性肝癌

Objective To explor golgi protein 73（GP73）in patients with chronic hepatitis B，liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma（HCC）of expression level. Methods The levels of GP73 and AFP in serum of 63 cases of primary liver cancer，77 cases of cirrhosis，83 cases of chronic hepatitis B and 75 healthy persons were detected by enzyme linked immunosorbent assay and electrochemical luminescence assay. Comparison of non-normally distributed data was made by Kruskal-Wallis single factor ANOVA test，and multiple comparisons were made by Mann-Whitney U tset.Comparison of rates was made by chi-square test. P＜0.05 was considered significantly different. Results GP73 content in the PHC group，cirrhosis group，chronic hepatitis B group and healthy control group of the overall distribution of different（H=186.57，P＜0.01），further paired comparisonn，PHC group content was higher than other groups（P＜0.01）. In the cirrhosis group，the ROC curve of GP73 was drawn，and the AUC was 0.867，the sensitivity was 90.48% and the specificity was 66.23%. Conclusion GP73 has high sensitivity to the diagnosis of primary liver cancer. It is a valuable tumor marker，and it can be an effective complement to AFP diagnosis PHC. It can improve the early diagnosis rate of PHC.

【Key words】Golgi protein 73，Alpha-fetoprotein，Primary hepatocellular carcinoma

統(tǒng)計(jì)至2012年底，惡性腫瘤為我國城鎮(zhèn)人口死亡率第二高疾病，死亡率第二高的惡性腫瘤即肝癌［1］。我國肝癌多由乙肝病毒感染逐漸演變?yōu)槁砸腋?、肝硬化、肝?xì)胞癌。原發(fā)性肝癌（PHC）早期無典型臨床表現(xiàn)，診斷后多為晚期，錯(cuò)失寶貴的治療時(shí)間，早期準(zhǔn)確診斷PHC對挽救患者生命具重要意義。甲胎蛋白（AFP）是PHC診斷的經(jīng)典腫瘤標(biāo)志物，但是仍有相當(dāng)一部分AFP陰性PHC漏診，有研究發(fā)現(xiàn)高爾基體蛋白73（GP73）具有作為PHC診斷腫瘤標(biāo)志物的價(jià)值［2］。本文通過測定GP73在不同臨床類型肝病中的濃度，分析GP73對肝癌早期診斷的臨床價(jià)值。

1　對象與方法

1.1對象

納入標(biāo)準(zhǔn)：肝細(xì)胞癌組：符合2010年NCCN指南，未行手術(shù)、介入、化療、分子靶向治療。肝硬化組和慢性乙肝組：符合2010年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)、感染學(xué)分會(huì)《慢性乙型肝炎防治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)，HBsAg陽性。健康對照組排除甲肝、乙肝、丙肝、戊肝等肝炎病毒感染及自身免疫性肝炎，血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）測定在正常范圍內(nèi)。選擇2013年12月～2015年7月在我院住院及門診符合納入標(biāo)準(zhǔn)患者298例，具體分組見表1。

表1　分組情況

1.2方法

1.2.1標(biāo)本收集 抽取受檢者清晨空腹靜脈血3 ml，置于紅頭試管中，低速離心機(jī)3 000 r/min離心10 min，4 h內(nèi)完AFP測定成，用于GP73測定的血清分裝至EP管于-80℃低溫冰箱中保存。

1.2.2GP73的測定 試劑盒（北京熱景生物技術(shù)有限公司），檢測儀器：MK3全自動(dòng)多功能型酶標(biāo)儀。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，比色波長450/630nm，按照GP73標(biāo)準(zhǔn)品曲線制定的濃度曲線，計(jì)算樣本中GP73含量。

1.2.3AFP的測定 電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測，使用德國羅氏COBAS E601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及其配套試劑進(jìn)行檢測。所有測試均在該項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控在控情況下完成。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，正態(tài)分布數(shù)據(jù)用（±s）表示，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)用M（P25-P75）表示，使用KW單因素方差分析、曼-惠特尼U檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MEDCALC繪制AFP和GP73的受試者工作特征（ROC）曲線，計(jì)算ROC曲線下面積，分析AFP和GP73檢測的診斷價(jià)值。

2　結(jié)果

測定AFP和GP73在原發(fā)性肝癌組、乙肝后肝硬化組、慢性乙肝組、健康對照組中的含量，經(jīng)比較P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2　AFP和GP73在不同類型肝病組的比較

統(tǒng)計(jì)PHC患者中AFP+、AFP-、GP73+、GP73-人數(shù)，比較兩種測試在PHC的診斷中陽性率，χ2=6.776，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在PHC診斷中GP73的陽性率高于AFP的陽性率。見表3。

表3　AFP和GP73結(jié)果在PHC中比較

以PHC組為陽性組，肝硬化為陰性對照組，繪制GP73與AFP診斷PHC的ROC曲線。GP73的AUC為0.867，95%CI為0.799 ～0.918；AFP的AUC為0.692，95%CI為0.609 ～0.767。根據(jù)約登指數(shù)確定GP73用于診斷PHC的臨界值為92.3 ng/ml，在此臨界值下的敏感度和特異性分別為90.48%、66.23%；AFP用于診斷PHC的臨界值為204.3 ng/ml，其在此臨界值下的敏感度和特異性分別為55.56%、90.7%（見圖1）。

3　討論

肝細(xì)胞癌（HCC）發(fā)病率位居全球惡性腫瘤的第五位，其死亡率卻位居第二位，全球每年55%的患者來自中國，并且90%以上HCC患者具有病毒性肝炎基礎(chǔ)。肝癌患者早期無明顯癥狀，一旦確診，多為中晚期，失去治療時(shí)機(jī)，因此早期診斷尤為重要。HCC的早期診斷主要依靠影像學(xué)及血清甲胎蛋白（AFP）的檢測，但是小腫瘤不易通過影像學(xué)發(fā)現(xiàn)，并且AFP的敏感性（39%～64%）較差。

圖1　以肝硬化組為對照，GP73和AFP診斷PHC的ROC曲線

在我國多數(shù)原發(fā)性肝癌是由乙肝病毒感染后引起不同臨床病理類型，如慢性乙肝等。肝癌早期確診對提高患者的生存率有重要意義，臨床上早期診斷肝癌主要以影像學(xué)和腫瘤標(biāo)志物AFP為主，但PHC有不少病例表現(xiàn)為AFP陰性，且早期肝癌影像學(xué)缺乏典型表現(xiàn)，使PHC早期確診愈加困難。

GP73 由美國學(xué)者Kladney［3］在2000年發(fā)現(xiàn)的位于高爾基體順面膜囊上的跨膜糖蛋白，Ⅱ型高爾基體膜蛋白。GP73在多種人類組織的上皮細(xì)胞表達(dá)，在正常肝臟中，其存在于膽管上皮細(xì)胞，而肝細(xì)胞顯示很少或沒有信號正常表達(dá)或表達(dá)很少，在乙肝病毒（HBV）或腺病毒感染后，膽管細(xì)胞的表達(dá)無明顯變化，而肝細(xì)胞呈高表達(dá)［4］。2005年有研究顯示GP73在肝細(xì)胞癌患者中高水平表達(dá)在非肝癌患者中表達(dá)水平低，且對肝癌的診斷優(yōu)于AFP［5］。賈紅蓮、馮志剛等［6-7］發(fā)現(xiàn)肝癌組織和癌旁組織中的GP73表達(dá)陽性率高于肝硬化肝組織和正常肝組織，GP73在肝癌組織中表達(dá)升高，可作為肝癌組標(biāo)志物。高爾基體糖蛋白73（Golgi prolein 73，GP73）是一種與原發(fā)性肝癌相關(guān)的糖蛋白，并以良好的敏感性和特異性被認(rèn)為是最有潛力的HCC標(biāo)志物之一。由于HCC的發(fā)生是一個(gè)經(jīng)過慢性乙型肝炎（CHB），肝硬化，HCC多階段長期病毒感染的過程，并且以HBV相關(guān)HCC多階段為研究對象的研究并不多見，所以本研究的目的是通過檢測HBV相關(guān)的CHB、肝硬化、HCC患者血漿中的GP73水平和AFP含量，試圖了解二者在上述疾病發(fā)生發(fā)展中的變化規(guī)律，從而探討GP73和AFP對于HCC早期診斷和預(yù)后判斷的價(jià)值［8］。

本研究結(jié)果顯示肝癌組和肝硬化組AFP比較，P＞0.05，肝硬化患者因肝細(xì)胞變性壞死，肝內(nèi)結(jié)締組織再生，纖維組織彌漫性增生，導(dǎo)致AFP中重度增高，并有部分肝癌患者AFP輕度升高或不升高，AFP＜400 ng/ml的PHC患者易誤、漏診；肝癌組和肝硬化組GP73比較，P＜0.01，提示GP73能更好的區(qū)分這兩類患者，GP73表達(dá)水平的變化可能與肝功能減退有關(guān)。肝硬化與慢性乙肝組，慢性乙肝組與健康對照組兩兩比較，P＜0.01，說明GP73在不同的肝病類型中表達(dá)不同，隨著肝臟疾病的進(jìn)展，GP73呈明顯增加趨勢，可以作為區(qū)分乙肝病毒感染肝臟后肝病不同階段的參考標(biāo)準(zhǔn)。將PHC組GP73和AFP的陽性和陰性人數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，P＜0.05，說明這在針對肝癌診斷時(shí)GP73的診斷效果優(yōu)于AFP。根據(jù)ROC曲線AUC判斷，AFP的診斷價(jià)值低于GP73，因?yàn)镚P73較高的靈敏性，可將其作為早期篩查肝細(xì)胞癌的肝臟腫瘤標(biāo)志物，盡早發(fā)現(xiàn)疑似肝癌患者［9-10］。

綜上所述，GP73作為一種診斷肝細(xì)胞癌的腫瘤標(biāo)志物，靈敏度高，特異性不及AFP，可作為PHC陰性標(biāo)記物，即GP73含量低可做為PHC排除依據(jù)；同時(shí)在AFP陰性或低水平表達(dá)而GP73升高的可疑患者，可加強(qiáng)對疑似患者的隨訪，進(jìn)一步做影像學(xué)、病理學(xué)等相關(guān)方面的檢查，以提高PHC早期診斷的準(zhǔn)確性，為挽救患者生命贏得時(shí)間。

參考文獻(xiàn)

［1］國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)統(tǒng)計(jì)信息中心. 中國衛(wèi)生和計(jì)劃生育統(tǒng)計(jì)年鑒［Z］. 2003.

［2］Marrero JA，Romano PR，Nikolaeva O，et al. GP73，a resident Golgi glycoprotein，is a novel serum marker for hepatocellular carcinoma［J］. J Hepatol，2005，43（6）:1007-1012.

［3］Kladney RD，Bulla GA，Guo L，et al. GP73，a novel Golgilocalized protein upregulated by viral infection［J］. Gene，2000，249（1-2）:53-65.

［4］Kim HJ，Lv D，Zhang Y，et al. Golgi phosphoprotein 2 in physiology and in diseases［J］. Cell Biosci，2012，2（1）:31.

［5］葉佩靈，何欣欣，吳曉蔓. 原發(fā)性肝癌組織中GP73蛋白的表達(dá)［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2014，35（2）: 234-236.

［6］賈紅蓮，黃彩云，宋君利，等. 血清AFP-L3、GP73檢測聯(lián)合CT掃描在肝細(xì)胞癌診斷中的價(jià)值［J］. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2015，23（1）:101-103.

［7］馮志剛，岑曉紅，云俊木，等. GP73在酒精性肝病中的臨床意義［J］.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，36（15）:2214-2215，2217.

［8］劉秀紅，趙一鳴，李寧，等. 血漿高爾基體糖蛋白73和血小板計(jì)數(shù)在不同階段HBV相關(guān)肝病中的表達(dá)及意義［J］. 臨床肝膽病雜志，2015，31（9）:1469-1472.

［9］張克釗. 血清GP73、AFP、Fer、CA199四種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌診斷價(jià)值探討［J］. 實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2015，33 （6）:776-777.

［10］江均昌，周林福. 高爾基體駐膜糖蛋白73的研究進(jìn)展及其與肝癌等疾病的聯(lián)系［J］. 浙江大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2012，41（2）: 215-221.

【中圖分類號】R575

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1674-9316（2016）08-0161-03

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2016.08.111

基金項(xiàng)目:新疆醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院2014年院級課題項(xiàng)目，項(xiàng)目編號（WYF2014010）

作者單位:新疆醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，新疆 烏魯木齊 830011

The Value of GP73 in Different Types of Liver Disease

XUE Bing JING Boqiong XU Di Department of Clinical Laboratory，F(xiàn)ifth Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University，Urumqi Xinjiang 830011，China

【Abstract】