李國棟， 尹子麗， 劉小莉*

( 1. 云南中醫(yī)學院 中藥學院， 昆明 650500； 2. 云南中醫(yī)學院 民族醫(yī)藥學院， 昆明 650500 )

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基于cpDNA trnL-F序列的胡黃連保護遺傳學研究

李國棟1， 尹子麗2， 劉小莉1*

( 1. 云南中醫(yī)學院 中藥學院， 昆明 650500； 2. 云南中醫(yī)學院 民族醫(yī)藥學院， 昆明 650500 )

摘要：胡黃連為特產中國-喜馬拉雅特有高山植物，作為常用中、藏藥材，受到滅絕性采挖，作為瀕危和二級保護植物亟待科學的保護。該研究以云南和西藏7個野生居群91個個體為材料，基于cpDNA trnL-F非編碼序列測序分析胡黃連的遺傳多樣性和遺傳結構，分析顯著進化單元，確立優(yōu)先保護居群并提出科學的保護策略。結果表明：胡黃連trnL-F序列長度為871～876 bp，根據(jù)序列的核苷酸變異共鑒定出5個單倍型，西藏占有2個單倍型，云南占有3個單倍型，西藏和云南2個地區(qū)的所有單倍型均不共享。胡黃連具有較低的單倍型多樣性(Hd = 0.434 19)和核苷酸多樣性(Dij = 0.004 66)。種群間分化度(Fst=0.864 520)和基因流(Nm=0.04)、居群間的遺傳分化水平(GST=0.916)、AMOVA分析(0.78%的遺傳變異發(fā)生在居群內，60.97%的遺傳變異發(fā)生在地區(qū)內居群間，38.25%的遺傳變異發(fā)生在地區(qū)間)均表明，胡黃連居群間存在明顯遺傳分化。多數(shù)一致性樹將胡黃連劃分為3個進化分支(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)，這3個分支均與地理相關，分支Ⅰ分布于橫斷山區(qū)的4個居群，分支Ⅱ是分布于東喜馬拉雅的一個居群，分支Ⅲ是分布于喜馬拉雅中段的2個居群。3個分支分屬于3個“進化顯著單元(ESU)”。這3個ESU中白馬雪山、茨中、定日、波密、聶拉木五個居群都需要保護，建議現(xiàn)階段應優(yōu)先保護的居群是云南白馬雪山和西藏波密居群，以就地保護為主。

關鍵詞：胡黃連, 瀕危, trn L-F, 單倍型, 保護遺傳學

胡黃連(Neopicrorhizascrophulariiflora)為玄參科的單種屬植物，為中國-喜馬拉雅特有高山植物，分布于我國云南西北部、西藏，海拔3 600～4 200 m的高山冷涼生境下。胡黃連具有重要的藥用價值，是常用的中、藏藥材，根狀莖具有清濕熱，除骨蒸、消疳熱的功效(中華人民共和國藥典，2010)。經(jīng)過課題組全面調查發(fā)現(xiàn)，胡黃連資源蘊藏量急劇下降，生存受到嚴重威脅。已被收載在《中國珍稀瀕危植物名錄》《國家重點保護野生藥材物種名錄》中，目前對胡黃連研究主要集中在資源調查(楊少華等，2009)、栽培(楊少華等，2008)、化學(黃開毅等，2008)、藥理(高宏偉等，2011)幾個方面，對胡黃連遺傳變異研究僅限于課題組前期基于ISSR分析(Liu et al, 2011)。近年來，葉綠體DNA (cpDNA)非編碼區(qū)核苷酸序列變異已被經(jīng)常用于分析植物的種群遺傳變異(劉陽等，2010; 蘇英娟等，2004)，cpDNA測序法可以避免其它基于PCR的分子標記法經(jīng)常遇到的長度同塑性問題，在估算種群遺傳結構和基因流的能力方面具有較大優(yōu)勢(Chiang et al, 2001; 蘇應娟等，2004)。本研究選擇用于胡黃連近緣種(Picrorhizakurrooa)并且具有很好的位點變異的trnL-F片段對胡黃連開展了保護遺傳學研究，旨在檢測胡黃連基于cpDNA遺傳多樣性水平、遺傳結構并確定優(yōu)先保護種群，分析位于云南和西藏居群在地區(qū)水平上是否存在顯著分化，劃分顯著進化單元，提出保護建議，其結果可以為胡黃連這一重要藥用資源的可持續(xù)利用奠定基礎。

1材料與方法

1.1 研究材料

本研究實驗材料為采集自云南和西藏7個居群共91個個體，基本覆蓋了該物種的所有已知分布點。每個居群的個體之間的距離至少5 m以上， 避免采集到同一株的克隆。選擇幼嫩、干凈的葉片，放到硅膠中干燥保存。

表 1　 胡黃連7個居群的地理分布信息

研究材料采集點詳細信息見表1，憑證標本存放于云南中醫(yī)學院。

1.2 DNA提取

參考Doyle(1991) CTAB法，針對胡黃連葉片在研磨過程中極易褐化的問題, 在研磨時加入適量PVP粉，在65 ℃溫浴過程中，將2×CTAB溶液與2 μL β-巰基乙醇混合，以有效解決褐化問題。

1.3 PCR擴增

引物序列為trnL: 5′-CGAAATCGGTAGACGCTACG-3′；trnF: 5′-ATTTGAACTGGTGACACGAG-3′，引物由上海生工技術有限公司合成。PCR擴增程序: 94 ℃預變性3 min；94 ℃30 s, 55 ℃ 30 s, 72 ℃ 60 s, 30個循環(huán)；末次循環(huán)72 ℃延伸7 min, 4 ℃保存。 PCR產物經(jīng)2%的瓊脂糖凝膠檢測,擴增成功的樣品送中美泰和生物技術(北京)有限公司測序(所有個體均進行雙向測序)。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

將每條序列與chromas 峰圖逐一對比，結合Clustal X 1.83軟件對序列進行排列校正。用BioEdit軟件統(tǒng)計序列信息和核苷酸組成變異。用DnaSP 4.0軟件分析統(tǒng)計單倍型數(shù)目、單倍型頻率、單倍型多樣度(遺傳多樣度，h)、核苷酸多樣性(Dij)、基因流(Nm)等指標。

運用HAPLONST程序計算胡黃連總遺傳多樣性(HT)和居群內平均遺傳多樣性 (Hs)以及7個居群間遺傳分化系數(shù)(GST)。GST和NST的比較采用U統(tǒng)計方法進行。在揭示胡黃連遺傳變異的分布以及分化程度時，用Arlequin軟件3.01中的分子方差分析AMOVA(Analysis of Molecular Variance)軟件計算遺傳變異在居群內、居群間及云南和西藏2個地區(qū)間的組成和單倍型分布的FST評價。應用PAUP*4.0 b10軟件中的最大簡約性分析法(maximum parsimony, MP)對單倍型進行系統(tǒng)發(fā)育分析, 選擇Picrorchizakurroa、Wulfensiopsisamherst、短筒兔兒草(Lagotiskongboensis)、Plantagocoronopus作為外類群, 把空位作為缺失，采用啟發(fā)式方式搜索，得到一致性系統(tǒng)樹。分支的可靠性進行Bootstrap分析, 用1 000次的重復檢驗各個分支的支持率。

2實驗結果

2.1 胡黃連trnL-F序列變異分析

對胡黃連7個居群 91個個體進行了cpDNA片段trnL-F序列的雙向測定，序列長度在 871～876 bp之間，排序后長869 bp。共檢測到5種單倍型(Hap1～Hap5)。單倍型序列比對后共發(fā)現(xiàn)13處變異位點：12處堿基替換和 1處插入或缺失，其中12處替換包括2處堿基轉換，10處堿基顛換(表2)。通過統(tǒng)計91個個體的序列發(fā)現(xiàn)，堿基A/T含量豐富，占整個序列的比例為64.93%～65.1%，這與大多數(shù)植物葉綠體DNA堿基組成成分相符(蘇應娟等，2004；陳生云等，2008)

2.2 胡黃連單倍型分布、單倍型多樣性、核苷酸多樣性

胡黃連每個居群單倍型數(shù)目、組成、頻率、多樣性以及核苷酸多樣性指數(shù)見表3。胡黃連共有5個單倍型，分別是H1、H2、H3、H4、H5,單倍型H1、H3、H4、H5占絕對優(yōu)勢，單倍型H4的頻率最高，在DR居群和NLM2個居群中出現(xiàn)，有27個個體，占總個體數(shù)的30%, 而單倍型H2的分布頻率最低，僅在居群BM中有2個個體。H3在CZ居群、SN居群和YZ居群中出現(xiàn)。西藏3個居群共有2個單倍型即H4、H5，云南4個居群共有3個單倍型即H1、H2、H3，西藏和云南2個地區(qū)的所有單倍型均不共享，均為各自獨特的單倍型，這也為胡黃連藥材的產地鑒定提供了可能。由單倍型地理分布可見，胡黃連在云南和西藏2個地區(qū)間存在一定程度的隔離。

表 2　胡黃連葉綠體DNA trnL-F片段5個單倍型間的序列變異位點

▲=TCAAA

表 3　胡黃連7個居群葉綠體DNA單倍型的遺傳多樣度、組成和頻率

胡黃連具有較低的單倍型多樣性(Hd= 0.434 19)和核苷酸多樣性(Dij= 0.004 66)。各個居群中，只有BM居群的單倍型多樣性較高(Hd= 0.327 27), 其余居群的單倍型多樣性均較低，其中SN和YZ居群均為同源組成。地區(qū)水平上，云南的單倍型多樣性(Hd= 0.543 96)高于西藏(Hd= 0.000 0)。

2.3 遺傳多樣性和遺傳結構

胡黃連7個居群cpDNAtrnL-F多樣性在居群間的分化程度，兩種中性檢驗法檢驗的結果均為正值(Fu and Li′s D*=1.470 34和Tajima′s=1.896 02)，并且均呈顯著水平(0.10>P>0.05)。同時，對胡黃連居群trnL-F片段序列數(shù)據(jù)的歧點分布分析顯示觀測值和期望值兩者比較得到的是一個非單峰分布圖(圖1)，此圖明顯偏離了群體擴張模型，結果表明胡黃連可能未曾經(jīng)歷過居群擴張。

根據(jù)胡黃連cpDNAtrnL-F序列變異(gap as the fifth state)采用Nei(1973)的算法估算出的居群間分化度(Fst)為0.864 52，基因流(Nm)為0.04，表明胡黃連各個居群間存的分化較大。在云南和西藏2個地區(qū)內，云南居群間的Fst為0～0.904 38,Nm為0.08，西藏居群間的Fst為0～1.000,Nm為0，說明2個地區(qū)內居群間的基因交流也近乎為零。

胡黃連總的遺傳多樣性HT(se)、居群內平均遺傳多樣性HS(se)、7個居群間遺傳分化GST(se)和NST(se)值分別為0.861 (0.0443)、0.073 (0.0496)、0.916 (0.057 5)和0.987 (0.013 3)。使用U統(tǒng)計法檢驗胡黃連所有單倍型變異的地理結構，結果發(fā)現(xiàn)NST>GST(P<0.01)，以上分析結果均表明胡黃連在整個中國-東喜馬拉雅分布區(qū)內，居群間的遺傳分化水平非常高(GST=0.916)，單倍型的親緣關系越相近越傾向于分布于同一居群中，并且有著明顯的親緣地理結構存在。將胡黃連按照地區(qū)分為云南和西藏2個組后, AMOVA分析也表明，胡黃連居群只有0.78%的遺傳變異發(fā)生在居群內，而60.97%遺傳變異發(fā)生在地區(qū)內居群間，38.25%遺傳變異發(fā)生在地區(qū)間(表4), 這也揭示了胡黃連的遺傳變異主要存在于居群間，而且具有相當高的居群分化水平。

表 4　胡黃連2個地區(qū)之間的cpDNA AMOVA分析

圖 1　胡黃連cpDNA序列的失配分布圖實線Exp-預期值；虛線Obs-觀測值。Fig. 1　Mismatch distribution for cpDNA sequence data of N. scrophulariiflora　Solid line represents the expected value; dotted line represents the observed value.

2.4 “顯著進化單元”的劃分

用粗筒兔兒草等做外類群對5個單倍型構建系統(tǒng)發(fā)育多數(shù)一致性樹，通過啟發(fā)式搜索得到一棵多數(shù)一致性樹，得到了3個進化分支(GroupⅠ-Ⅲ)，如圖2。組Ⅰ和組Ⅱ共同構成一個單系，具有54%的支持率。組Ⅰ的單倍型為分布在橫斷山區(qū)的4個居群(BM、YZ、SN、CZ)，構成一個單系，具有90%的支持率，組Ⅱ的單倍型分布在東喜馬拉雅北端的2個居群(DR、NLM)，組Ⅲ的單倍型分布在東喜馬拉雅的居群(BMI)，與P.kurrooa聚為一支，具有78%的支持率。因此GroupⅠ、GroupⅡ、GroupⅢ各自劃分為一個ESU。

遺傳距離計算的結果支持3個ESU的劃分(表5)，3個ESU內兩兩居群間的遺傳距離≤1.182 (對角線以下，不加粗部分)，ESU之間的兩兩居群間的遺傳距離≥1.399(對角線以下，加粗部分)。居群內平均遺傳距離為0～0.327,ESUⅠ、Ⅱ、Ⅲ內平均遺傳距離分別為0.000、0.001、0.000。91個個體兩兩的遺傳距離為0.000～0.013。

對3個ESUs進行AMOVA分析和相應的F檢驗的結果(表6)可見，遺傳變異主要存在于ESUs間，所占比例高達94.22%，ESUs內居群間的遺傳變異僅占5.09%，居群內的遺傳變異幾乎可以忽略不計，僅為0.69%，因此，AMOVA的結果也支持胡黃連3個ESUs的劃分。

圖 2　胡黃連5個單倍型的多數(shù)一致性樹，顯示50%以上的支持Fig. 2　Majority-rule consensus of 5 cpDNA haplotypes of N. scrophulariiflora, showing more than 50% of the support

3討論

3.1 胡黃連遺傳分化程度

胡黃連的cpDNAtrnL-F片段檢測結果發(fā)現(xiàn)，在單倍型序列的13個變異位點中，小片段的插入/缺失僅占了1個，而點突變占了12個。由此表明了胡黃連單倍型序列間的分化水平較高，種內遺傳分化經(jīng)歷的時間較長。

對胡黃連整個地理分布區(qū)的7個居群91個個體進行的trnL-F基因間區(qū)檢測發(fā)現(xiàn)，胡黃連總的遺傳多樣性(HT= 0.861)和居群間遺傳分化程度都很高(Gst= 0.916)。這與ISSR分子標記的分析結果一致(liu et al, 2011)。居群間遺傳分化程度較之大多數(shù)物種高，如條紋狹葉龍膽(Metagentianastriata),Gst=0.859(陳生云等，2008)、偏花報春(Primulasecundiflora), Gst = 0.816(Wang et al, 2008)、肋果沙棘(Hippophaeneurocarpa)，Gst= 0.646(孟麗華等，2008)等。胡黃連的cpDNA多樣性水平高于Petit et al(2005)所統(tǒng)計的175種種子植物的平均cpDNA多樣性HT= 0.67。AMOVA分析也表明，胡黃連99.22%遺傳變異發(fā)生在居群間，基因流僅為 0.04, 說明胡黃連具有很高的遺傳分化水平，而且居群間幾乎沒有基因交流。Ouborg et al(1999)認為種群間一粒種子或一個花粉粒的交流就會導致Gst值達到0.20，這說明胡黃連種群間存在極低的花粉或種子交流。根據(jù)cpDNA得出的Gst值反映種子遷移對基因流的貢獻，而根據(jù)核基因組分子標記ISSR計算出的Gst值既反映了種子遷移對基因流的貢獻，同時也反映了花粉運動對基因流的貢獻。因此對于胡黃連而言，花粉運動對基因流的貢獻要比種子稍大。

表 5　胡黃連7個居群間和居群內的遺傳距離

注：對角線下為居群間遺傳距離, 對角線上為標準誤，下劃線為居群內遺傳距離。

Note: Among populations distances are below the diagonal(mean among the ESU). SE values are above diagonal. Within population mean distances are underlined.

表 6　胡黃連7個居群不同層次AMOVA分析

注：顯著性檢驗用1 023次置換。

Note: Significance tests using 1 023 permutations.

胡黃連居群間如此大的遺傳分化和如此低的基因流這可能與喜馬拉雅和橫斷山區(qū)的生境復雜度有關。5個單倍型在2個地區(qū)中的分布呈現(xiàn)較大差異，所有單倍型在2個地區(qū)間均不共享，而是為各自獨有，在西藏地區(qū)，聶拉木(NLM)和定日(DR)共享一個單倍型(H4)，居群波密 (BMI) 居群獨有一個單倍型(H5)，從胡黃連單倍型多數(shù)一致性樹(圖2)可見西藏的2個單倍型不構成一個單系，這一結果顯然也說明胡黃連存在分化明顯的遺傳譜系， BMI與P.kurrooa聚為一支，這是否意味著該屬分類地位上存在一定的疑問？有待于深入研究。

3.2 顯著進化單元的劃分及胡黃連保護

本研究根據(jù)多數(shù)一致性樹劃分的3個ESUs, 從居群間的遺傳距離矩陣也得到很好的支持，所有3個ESU內兩兩居群間的遺傳距離小于ESU之間的兩兩居群間的遺傳距離(分別是≤1.182和≥1.399)，表明ESUs內的居群之間遺傳分化程度低，ESUs之間遺傳分化程度高。

ESUⅠ 包括了4個居群分別是BM、CZ、YZ、SN，占有3個單倍型(H1、H2、H3), 從單倍型在這個4個居群的分布來看，必須優(yōu)先保護的是BM和CZ居群。其中BM居群的保護任務是最緊迫的，因為BM居群具有獨特的單倍型H2，而CZ包含了H1、H32個單倍型，因此保護這2個居群就等于保護了所有的遺傳變異。目前BM居群分布于白馬雪山國家級自然保護區(qū)內，但由于此居群與胡黃連的其它居群相比，交通相對便利，云南省迪慶州德欽縣的藏醫(yī)日常使用常在此處采挖，保護區(qū)由于地域廣闊，人力物力限制，對瀕危植物的保護相對較薄弱，因此此居群境況堪憂。按照ESU的保護原則是種群的遺傳組成越獨特，越具有優(yōu)先保護價值，因而BM居群是需要重點保護的居群，因為這個居群的消失會對胡黃連的遺傳多樣性造成重大影響。CZ居群離附近的村莊比較遠，居群附近生境惡劣，鮮有人煙活動，受到威脅的可能性較小。

ESUⅡ包括了DR和NLM2個居群，只有這2個居群具有單倍型H4，因此也具有獨特性。NLM居群分布于聶拉木縣城附近，每年都有藥材收購商到當?shù)厥召徍S連藥材，當?shù)厮庌r往往組織成小分隊的形式進行采挖，因此對NLM居群的干擾特別大，而DR居群是位于日喀則地區(qū)定日縣融霞鄉(xiāng)的一個居群，多年前被定日縣的藏醫(yī)采收過，由于資源已嚴重匱乏，當?shù)夭蒯t(yī)已多年未曾來此地采集，此居群由于地處偏遠、交通不便受人類干擾相對較小，但此居群很小，能夠自然復壯的幾率很低。這2個居群已經(jīng)處于珠穆朗瑪峰國家級自然保護區(qū)內，盡管此保護區(qū)主要保護高山、高原生態(tài)系統(tǒng)，但由于地域廣闊，對胡黃連的保護沒有受到足夠重視。綜上所述，DR居群可以采用就地保護措施，而對嚴重受人類干擾的NLM居群的最佳保護措施則是遷地保護，由于兩者具有共同的單倍型，因此2個居群能夠保護好一個居群即可。

ESUⅢ 只包含一個居群即BMI居群，并且具有一個獨特的單倍型H5, 結合ISSR分子標記研究結果，BMI居群是所有居群中遺傳多樣性水平最低的一個(PPB=4.88)，因而此居群胡黃連具有重要的保護價值。在調查中發(fā)現(xiàn)此居群胡黃連數(shù)量已非常少，呈零星分布，距離最近的是波密縣城，波密縣以旅游業(yè)為主，未見藏醫(yī)院以及藏醫(yī)，因而此地對胡黃連的利用很少，但胡黃連為何會數(shù)量如此之少，原因現(xiàn)無從得知。從保護遺傳差異性居群角度，此居群由于遺傳的特異性，需要就地保護。

由于胡黃連的遺傳多樣性主要分布在居群間，若有條件在高海拔地區(qū)建設胡黃連種質資源圃對胡黃連進行遷地保護時，樣品采集應該覆蓋盡可能多的居群而避免從一2個居群采集多個個體。

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Conservative genetics ofNeopicrorhizascrophulariiflorabased on cpDNAtrnL-F

LI Guo-Dong1， YIN Zi-Li2， LIU Xiao-Li1*

( 1.CollegeofTraditionalChinesePharmacy,YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine, Kunming 650500, China;2.CollegeofTraditionalMinorityMedicine,YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine, Kunming 650500, China )

Abstract:Neopicrorhiza scrophulariiflora (Scrophulariaceae), a monotypic genus perennial species, is endemic to the Eastern Himalayas and the Hengduan Mountains region. It only distributes in Yunnan and Tibet in China, ranging from 3 600 m to 4 200 m in elevation. The long and creep rhizomes (Rhizoma Neopicrorhizae) are of high medicinal value and dysentery by traditional Chinese and Tibetan medicine. Mainly because of large-scale acquisitions activity, natural populations of this species have suffered rapid declines and now it is classified as an endangered species under second category of key protected wild plants in China. In order to protect the decreasing natural genetic resources of N. scrophulariiflora, in this study, the chloroplast DNA (cpDNA) trnL-F noncoding sequence was used to estimate the genetic diversity and genetic structure and the evolutionary significant units (ESU) were proposed. A total of 91 individuals of N. scrophulariiflora were collected from seven populations, covering almost all areas of its distribution ranges. Of these seven populations, four were from Yunnan Province and three populations were from Tibet. The statistical results showed that the haplotype sequences length varied from 871 bp to 876 bp. A total of five haplotypes were detected based on trnL-F nucleotide variation. Yunnan contains three haplotypes and Tibet contains two. However, none of common haplotypes were shared between the populations from Yunnan and Tibet. A normal low level of genetic diversity (Hd = 0.434 19) and nucleotide diversity (Dij = 0.004 66) were identified at the species level. A high level of genetic differentiation (0.96) among populations was revealed. AMOVA results from chloroplast data indicated that 0.78% of the genetic variation was partitioned within population, 60.97% among populations within groups, and 38.25% among groups under the condition that N. scrophulariiflora was divided into two groups including Yunnan and Tibet. The U-statistic test for phylogeographical structure showed that NSTwas significantly higher than GST(NST>GST, P < 0.01), which suggested a distinctly phylogeographical pattern The gene flow (Nm) was extremely low with only 0.04. The higher NSTthan GST(P<0.01) suggested a distinctly phylogeographical pattern. Conjoint Fst (0.864 520), gene flow, GSTand AMOVA results all indicated a significant high level of genetic differentiation among populations, which could be a consequence of the limited gene flow caused by geographic isolation among populations. Phylogenetic analysis of the haplotypes sequences identified three tentative clades (Ⅰ,Ⅱ and Ⅲ) according to Majority-rule consensus tree. All of which had distinct geographic range: Clade Ⅰ comprised four populations (CZ, YZ, SN, BM) which were located at the Hengduan Mountains region; Clade Ⅱ comprised one population (BMI), which was located at the Eastern Himalayas region; and Clade Ⅲ comprised two populations (DR, NLM) located at the Central Himalayas region. Based on the phylogenetic analyses and uniqueness of the populations, three evolutionary significant units (ESU) were identified and conservation strategies were discussed for this endangered species. Baimaxueshan and Cizhong, Bomi, Nielamu and Dingri populations respectively concluded in the three evolutionary significant units and the five populations all contained special haplotypes. Based on these findings, all the populations should be protected. However, in consideration of the actual distribution of every population, Baimaxueshan population from Yunnan and Bomi population from Tibet should be given priority for conservation and in situ conservation should be the ideal implement.

Key words:Neopicrorhiza scrophulariiflora, endangered, trnL-F, haplotype, conservative genetics

DOI:10.11931/guihaia.gxzw201410004

收稿日期:2014-10-8修回日期：2015-03-29

基金項目：云南省自然科學基金面上項目(2010CD073)；國家科技基礎性工作專項重點項目(SB2007FY0200)；云南省應用基礎研究青年項目(2014FD035)[Supported by the Natural Science Foundation of Yunnan(2010CD073)； National Science and Technology Basic Special Fund (SB2007FY0200)； Yunnan Youth Program for the Application Foundamental Research (2014FD035)]。

作者簡介：李國棟(1984-)， 江西鄱陽人，博士，講師，主要從事植物譜系地理學研究，(E-mail)gammar116@163.com。 *通訊作者：劉小莉，博士，副教授，碩士生導師，主要從事藥用植物資源研究，(E-mail)kmxunzi@aliyun.com。

中圖分類號：Q945

文獻標識碼：A

文章編號：1000-3142(2016)06-0691-07

李國棟，尹子麗，劉小莉. 基于cpDNAtrnL-F序列的胡黃連保護遺傳學研究 [J]. 廣西植物， 2016， 36(6)：691-697

LI GD，YIN ZL，LIU XL. Conservative genetics ofNeopicrorhizascrophulariiflorabased on cpDNAtrnL-F [J]. Guihaia， 2016， 36(6)：691-697