朱　佳　王昕宇　胡月月　葛　亮*

1.新疆維吾爾自治區(qū)第一濟(jì)困醫(yī)院，新疆　烏魯木齊　830017；2.新疆名醫(yī)名方與特色方劑學(xué)重點(diǎn)實驗室，新疆　烏魯木齊　830011；3.新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，新疆　烏魯木齊　830011

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粗柄獨(dú)尾草中總多糖的提取工藝研究

朱佳1王昕宇2,3胡月月3葛亮2,3*

1.新疆維吾爾自治區(qū)第一濟(jì)困醫(yī)院，新疆烏魯木齊830017；2.新疆名醫(yī)名方與特色方劑學(xué)重點(diǎn)實驗室，新疆烏魯木齊830011；3.新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，新疆烏魯木齊830011

【摘要】目的：優(yōu)選粗柄獨(dú)尾草中總多糖的最佳提取工藝。方法：采用正交試驗設(shè)計，以總多糖含量為指標(biāo)，分別考察提取時間、提取次數(shù)、加水倍量對總多糖提取工藝的影響。結(jié)果：最佳提取工藝為提取3次，每次1.5h，加水倍量為10倍量。結(jié)論：所得到的最佳提取工藝簡單、可行、穩(wěn)定。

【關(guān)鍵詞】粗柄獨(dú)尾草；總多糖；提取工藝；正交實驗

粗柄獨(dú)尾草為百合科獨(dú)尾草屬植物，主要分布于新疆、甘肅等地區(qū)[1-2]，多集中分布于準(zhǔn)噶爾盆地，為典型的沙生類短命植物[3]。新疆少數(shù)民族地區(qū)稱其為西力力，民間用其根焙干磨粉沖服，用于治療消化道頑疾，具有祛風(fēng)除濕、補(bǔ)腎強(qiáng)身的功效[4]，并有對其解剖學(xué)方面的相關(guān)研究[5]。通過預(yù)實驗，發(fā)現(xiàn)藥材可能含有蒽醌類、黃酮類、糖和苷類等化學(xué)成分。研究以粗柄獨(dú)尾草中總多糖含量為指標(biāo)，并以正交實驗優(yōu)選最佳提取工藝，為開發(fā)粗柄獨(dú)尾草這一新疆特色民族藥材提供實驗依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器TU-1810PC可見紫外分光光度計(北京普析通用有限公司)；BS-220S電子分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；ZNHW-Ⅱ型智能恒溫電熱套(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)。

1.2試藥粗柄獨(dú)尾草為2014年6月采自新疆自治區(qū)吉木薩爾縣，經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院徐海燕副教授鑒定為百合科獨(dú)尾草屬植物粗柄獨(dú)尾草Eremurus.inderiensis(M.Bieb)的干燥全草；葡萄糖對照品(成都曼思特生物科技有限公司)；所用試劑均為分析純。

2方法及結(jié)果

2.1對照品溶液制備精密稱取葡萄糖0.5g，加蒸餾水定容至25ml容量瓶中，搖勻，得20mg/ml的對照品溶液。

2.2顯色試劑的制備精密稱取蒽酮0.1g置于燒杯中，逐步加入濃硫酸溶解，并定容至50ml，得到2mg/ml硫酸-蒽酮試液，需臨用新配。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別準(zhǔn)確吸取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，置于10ml量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度。再準(zhǔn)確吸取上述對照品溶液各1.0ml，加入硫酸-蒽酮試劑4.0ml，震蕩搖勻，在沸水浴中加熱10min，冷卻至室溫。準(zhǔn)確吸取蒸餾水1.0ml，加入硫酸-蒽酮試劑4.0ml，制成空白對照，在620nm波長測定吸光度。選擇濃度(Y)為縱坐標(biāo)，吸光度(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為：Y=6.12X-1.15(r=0.9994)，結(jié)果表明濃度在0.4～2.0mg時與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1精密度實驗精密吸取葡萄糖對照品溶液1ml，置于10ml的具塞試管中，按“2.3”操作，平行制作6份，檢測結(jié)果RSD=1.06%，表明精密度良好。

2.4.2穩(wěn)定性試驗精密吸取樣品溶液1ml，置于10ml的具塞試管中，按“2.3”操作，分別于10、30、60、120min測定其吸光度，其RSD=1.97%，結(jié)果表明樣品溶液在2h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.4.3重復(fù)性試驗精密稱取同一批次粗柄獨(dú)尾草藥材6份，按“2.3”操作，分別測定其吸光度，結(jié)果其平均含量為4.02%，RSD=1.08%。

2.4.4加樣回收率試驗精密稱取適量粗柄獨(dú)尾草藥材共6份，加入一定量的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，按“2.3”操作，測定其吸光度，計算加樣回收率，其平均回收率為99.02%，RSD=1.35%。

2.5最佳提取工藝研究通過預(yù)實驗，以提取時間(A)、加水倍量(B)、提取次數(shù)(C)為相關(guān)因素，各個因素選擇3個水平，使用L9(34)正交試驗表，以總多糖的含量為評價指標(biāo)，優(yōu)選粗柄獨(dú)尾草總多糖的最佳提取工藝，實驗計劃及相關(guān)結(jié)果見表1～2。

表1　因素水平表

表2　L9(34)正交實驗表

表3　方差分析表

F0.01(2,2)=99， F0.05(2,2)=19

統(tǒng)計分析可知：各因素對工藝影響大小順序為：A(提取時間)>C(提取次數(shù))>B(加水倍量)，每個因素不同水平之間的趨勢為：A3>A2>A1，B2>B3>B1，C3>C1>C2。直觀分析得最佳提取工藝為A3B2C3，即提取1.5h，加水10倍量，提取3次。方差分析結(jié)果表明A(提取時間)影響顯著，B(加水倍量)與C(提取次數(shù))幾乎無影響。全面考察以A2B2C3組合為佳，即提取3次，每次1.5h，加水10倍量。

2.6驗證試驗根據(jù)試驗所得到的最佳工藝A3B2C3，準(zhǔn)確稱取粗柄獨(dú)尾草細(xì)粉3份，采用最佳提取工藝制備相關(guān)測試樣品，并測定樣品中總多糖的含量，其平均含量為5.96%。結(jié)果表明，該工藝重復(fù)性好，實驗結(jié)果見表4。

表4　驗證試驗結(jié)果

3討論

多糖廣泛存在于自然界，是多種中草藥的有效成分之一，具有多種生物活性，是理想的免疫增強(qiáng)劑。研究采用正交試驗對粗柄獨(dú)尾草中總多糖的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，得到最佳提取工藝。采用苯酚-蒽酮法測定其總多糖的含量，其方法學(xué)考察效果較好，為粗柄獨(dú)尾草的總多糖測定提供了一種合適的檢測方法，結(jié)合粗柄獨(dú)尾草中總多糖的最佳提取工藝，可為粗柄獨(dú)尾草進(jìn)一步的相關(guān)研究提供數(shù)據(jù)參考。

參考文獻(xiàn)

[1]中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志(第十四卷)[M].北京:科學(xué)出版社,1980:38.

[2] 新疆植物志編輯委員會.新疆植物志(第六卷)[M].烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社,1996:480-482.

[3]毛祖美,張佃民.新疆北部早春短命植物區(qū)系綱要[J].干旱區(qū)研究,1994,11(3):1-26．

[4]會經(jīng)武.藥用植物詞典[M].天津:科學(xué)出版社,1995：300.

[5]周玲玲,吳玲,馬淼.新疆沙生植物粗柄獨(dú)尾草的解剖學(xué)研究[J].石河子大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2003,7(1) :52-54.

基金項目：新疆維吾爾自治區(qū)重點(diǎn)實驗室科研開放課題基金(No XJDX0910-2012-4)。

作者簡介：朱佳(1980-)，女，江蘇人，學(xué)士，主管中藥師。主要從事醫(yī)院藥學(xué)研究。 通信作者：葛亮(1980-)，男，新疆人，博士，高級實驗師。主要從事中藥民族藥研究。 E-mail: geliang917@163.com

【中圖分類號】R284.2

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)11-0022-02

(收稿日期：2016.04.10)

Research of Extraction Process of Total Polysaccharide in Eremurus inderiensis

ZHU Jia1WANG Xinyu2，3HU Yueyue3GE Liang2，3*

1.The First Aid Hospital of Xinjiang Autonomous Region, Urumqi 830017, China;2.Xinjiang Key Laboratory of Famous Prescription and Science of Formulas, Urumqi 830011, China;3.College of Traditional Chinese Medicine, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, China

Abstract:Objective To optimize the best extraction process of total polysaccharides from Eremurus inderiensis．Method With the content of Total polysaccharides as indexes，extraction technology was optimized by the orthogonal test，using the extraction time, extraction times and the amount of water as the factors．Results The best extraction process was as follows：extracted 3 times with 10 folds of water,1.5h each time．Conclusion This optimized extraction process was simple，feasible and steady.

Key words:Eremurus inderiensis;Total Polysaccharides; Extraction Process; Orthogonal Test