閆 磊,趙 亮,李善昌,莊亞嚴(yán),張鐵軍
(1.佳木斯大學(xué)附屬口腔醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154003;2.牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院,黑龍江 牡丹江 157011)
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不同靜壓力對(duì)新生SD大鼠髁突軟骨細(xì)胞增殖與凋亡的影響①
閆磊1,趙亮1,李善昌1,莊亞嚴(yán)2,張鐵軍1
(1.佳木斯大學(xué)附屬口腔醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154003;2.牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院,黑龍江 牡丹江 157011)
摘要:目的:就不同靜壓力對(duì)新生SD大鼠髁突軟骨細(xì)胞增殖與凋亡的影響進(jìn)行探討。方法:加載壓力分別為36kPa、24kPa、12kPa、0kPa,持續(xù)靜壓1h,在加力后立即(0h)收集細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),并且開展流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。結(jié)果:當(dāng)加載壓力分別為36kPa、12kPa時(shí),與0kPa相比,髁突軟骨細(xì)胞的各個(gè)增殖、凋亡指數(shù)都呈現(xiàn)出明顯的下降趨勢(shì),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。當(dāng)加載壓力為12kPa時(shí),細(xì)胞凋亡指數(shù)減幅最大;當(dāng)加載壓力為36kPa時(shí),細(xì)胞增殖指數(shù)減幅最大。結(jié)論:不同靜壓力對(duì)新生SD大鼠髁突軟骨細(xì)胞增殖與凋亡有一定的影響,但并非線性關(guān)系,值得深入研究。
關(guān)鍵詞:靜壓力;新生SD大鼠;髁突軟骨;細(xì)胞增殖;凋亡
從目前來看,軟骨細(xì)胞會(huì)受到應(yīng)力的兩種影響,分別是后繼效應(yīng)和即時(shí)效應(yīng)。雖然這兩種效應(yīng)與力值大小、應(yīng)力性質(zhì)之間的關(guān)系已被國(guó)內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了一定程度的研究,但是對(duì)于力值的影響還存在著較大的爭(zhēng)議。本文就不同靜壓力對(duì)新生SD大鼠髁突軟骨細(xì)胞增殖與凋亡的影響進(jìn)行探討,現(xiàn)報(bào)道如下。
1材料和方法
1.1主要儀器和試劑
可控氣液壓細(xì)胞加載裝置、流式細(xì)胞儀、碘化丙啶染液、2.5g/L胰蛋白酶、RNA酶。
1.2細(xì)胞培養(yǎng)及傳代
基于李松等[1]方法來開展大鼠髁突軟骨細(xì)胞體外原代及傳代培養(yǎng)工作。
1.3壓力加載方法
加載壓力分別為36kPa、24kPa、12kPa、0kPa,持續(xù)靜壓1h,在加力后立即(0h)收集細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),細(xì)胞懸液用1.2的方法來獲得,計(jì)數(shù)后立即接種在六孔培養(yǎng)板上(數(shù)量為4塊),分別將2mL細(xì)胞懸液加在培養(yǎng)板的孔內(nèi)。當(dāng)細(xì)胞發(fā)展到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,并且貼壁之后,應(yīng)該在加載裝置內(nèi)放置培養(yǎng)板(內(nèi)含有接種細(xì)胞)。在對(duì)其密閉性進(jìn)行檢查后, 裝置內(nèi)用加壓氣囊來予以充氣,直至達(dá)到預(yù)設(shè)的壓強(qiáng)刻度之后,應(yīng)該盡快在細(xì)胞培養(yǎng)箱中移入裝置,并開始予以計(jì)時(shí)。
1.4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)
6孔細(xì)胞分別在加力后用2.5g/L胰蛋白酶來予以消化,待細(xì)胞完全脫落之后,對(duì)各孔內(nèi)細(xì)胞懸液進(jìn)行收集,后離心,將上清離心出來之后再漂洗2次,直至形成單細(xì)胞懸液,再加入700μL純酒精(溫度為4℃、濃度為700mL/L)固定保存18h,離心棄固定液, 細(xì)胞周期和細(xì)胞DNA含量用流式細(xì)胞儀來進(jìn)行檢測(cè)。AI(細(xì)胞凋亡指數(shù))和PI(細(xì)胞增殖指數(shù))基于細(xì)胞周期來進(jìn)行計(jì)算。
1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示;兩組計(jì)量資料的差別比較采用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料差別比較采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2結(jié)果
由表1可以看出,當(dāng)加載壓力分別為36kPa、12kPa時(shí),與0kPa相比,髁突軟骨細(xì)胞的各個(gè)增殖、凋亡指數(shù)都呈現(xiàn)出明顯的下降趨勢(shì),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)。當(dāng)加載壓力為12kPa時(shí),細(xì)胞凋亡指數(shù)減幅最大;當(dāng)加載壓力為36kPa時(shí),細(xì)胞增殖指數(shù)減幅最大。增殖與凋亡的比較如圖1所示。
圖1 增殖與凋亡的比較
檢測(cè)力點(diǎn)36kPa24kPa12kPa0kPaS期DNA(%)13.60±8.1023.30±9.6020.50±3.0022.90±0.00G2期DNA(%)2.00±1.404.10±1.804.00±0.803.50±2.20PI(%)15.65±9.4527.45±11.3524.55±3.7526.40±2.20G1期DNA(%)84.40±14.9072.60±17.4075.50±17.2073.60±15.40AI(%)3.225.112.424.88
3討論
軟骨細(xì)胞在改建髁突軟骨的過程中,既會(huì)出現(xiàn)凋亡,又會(huì)出現(xiàn)增殖,且較易受到其他因素的影響,其中最為主要的因素是應(yīng)力[2]。髁突軟骨細(xì)胞增殖與凋亡與應(yīng)力之間的關(guān)系,一直以來都是國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)界的研究重點(diǎn),但是眾說紛紜[3],沒有形成一個(gè)統(tǒng)一的結(jié)論,本文研究結(jié)果表明:當(dāng)加載壓力分別為36kPa、12 kPa時(shí),與0 kPa相比,髁突軟骨細(xì)胞的各個(gè)增殖、凋亡指數(shù)都呈現(xiàn)出明顯的下降趨勢(shì),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)。當(dāng)加載壓力為12kPa時(shí),細(xì)胞凋亡指數(shù)減幅最大;當(dāng)加載壓力為36kPa時(shí),細(xì)胞增殖指數(shù)減幅最大。總之,不同靜壓力對(duì)新生SD大鼠髁突軟骨細(xì)胞增殖與凋亡有一定的影響,但并非線性關(guān)系,值得深入研究。
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基金項(xiàng)目:①黑龍江省衛(wèi)生計(jì)生委科研課題,編號(hào):2014-257。
作者簡(jiǎn)介:閆磊(1980~)男,黑龍江佳木斯人,碩士,主治醫(yī)師。 通訊作者:趙亮(1981~)女,黑龍江佳木斯人,碩士,主治醫(yī)師。E-mail:28789079@qq.com。
中圖分類號(hào):Q344+13
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A
文章編號(hào):1008-0104(2016)03-0003-02
(收稿日期:2016-02-20)
Effects of the static compressive stress on the proliferation and apoptosis of condylar chondrocytes in vitro
YANLei1,ZHAOLiang1,LIShan-chang1,ZHUANGYa-yan2,ZHANGTie-jun1
(1.Oral Cavity Hospital Affiliated to Jiamusi University,Jiamusi 154002,China;2. Flag Hospital Affiliated to Mudanjiang Medical School,Mudanjiang 157011,China)
Abstract:Objective: To discuss the effects of different static compressive stress on proliferation and apoptosis of MCC of neonatal SD rats. Methods: Loading stress was 36kPa、24 kPa、12 kPa、0 kPa, respectively, and static pressure for 1h. The cells were examined immediately(0h) after stress application, and detected by using flow cytometry. Results: When the stress was 36kPa, 12 kPa respectively,compared with 0kPa, its proliferation and apoptosis index of MCC declined sharply, which showed statistically significant differences (P<0.05). When the stress was 12 kPa, the damping of apoptosis was the biggest. When the stress was 36 kPa, the damping of proliferation was the biggest. Conclusion: Different static compressive stress have some performance impacts on proliferation and apoptosis of MCC of neonatal SD rats, but it is nonlinear relationship, which needs intensive study.
Key words:static compressive stress; neonatal SD rats; MCC; proliferation; apoptosis