李彩霞　劉光斌（酒鋼醫(yī)院藥學部，甘肅 嘉峪關735100）

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H PLC測定轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液中5-羥甲基糠醛含量

李彩霞劉光斌
（酒鋼醫(yī)院藥學部，甘肅 嘉峪關735100）

【摘要】目的：建立高效液相色譜法測定轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液中5-羥甲基糠醛的含量。方法：色譜柱為Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-三乙胺溶液（9∶91，取水1 000 mL加三乙胺2.5 mL，用稀磷酸溶液（1→5）調(diào)pH值為3.0）；流速為1.0 mL/min，柱溫25℃，檢測波長284 nm。結果：5-羥甲基糠醛在0.002 8～ 7.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關系（r=0.999 8），平均回收率為99.81%，RSD為1.87%。結論：本方法簡便、靈敏、準確可靠，專屬性強。

【關鍵詞】轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液；5-羥甲基糠醛；高效液相色譜法；含量測定

轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液為復方制劑，其組分為每 500 mL（5%）：果糖 12.5 g，葡萄糖 12.5 g，乳酸鈉1.400 0 g，氯化鈉0.730 0 g，氯化鉀0.930 0 g，氯化鎂0.143 0 g，磷酸二氫鈉0.375 0 g，用于需要非口服途徑補充水分或能源及電解質(zhì)的患者的補液治療［1］。轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液在臨床使用過程中發(fā)生的藥品不良反應很可能與其內(nèi)果糖和葡萄糖在生產(chǎn)和儲存過程中產(chǎn)生的5-羥甲基糠醛（5-hydroxymethyl furfural，5-HMF）有關［2］。5-HMF是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產(chǎn)生的一個醛類化合物，該化合物對人體橫紋肌和內(nèi)臟有損害［3］。有報道稱5-HMF有可能引發(fā)并促進結腸小囊異常生長［4］及具有一定程度的基因毒性［5］。本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液中的5-HMF進行測定并進行多批次不同時間點的檢測，為轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液的安全性評價提供參考。

1　材料

1.1儀器

LC-2010AHT型高效液相色譜儀（日本島津），島津 LC solution工作站；AUY220電子分析天平（日本島津）。

1.2藥品與試劑

5-HMF對照品購自中國食品藥品檢定研究院（批號：111626-200301）；轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液（揚子江藥業(yè)集團上海海尼藥業(yè)有限公司，規(guī)格：500 mL）；乙腈為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-三乙胺溶液（9∶91，取水1 000 mL加三乙胺2.5 mL，用稀磷酸溶液（1→5）調(diào)pH值為 3.0）；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：284 nm；進樣量：10 μL。5-HMF對照品、轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液的色譜圖見圖1。

圖1　高效液相色譜圖

2.2溶液的配制

2.2.1對照品溶液的配制精密稱取5-HMF對照品適量，置于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得10 μg/mL的對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的配制取轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液樣品直接進樣。

2.3標準曲線的制備

精密稱取5-HMF對照品7.0 mg，置于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，精密量取1 mL 置25 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。

精密量取上述對照品貯備液0.01，0.05，0.1，1.0，5.0，10.0，25.0 mL分別置于 100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得濃度分別為0.002 8，0.014，0.028，0.28，1.4，2.8，7.0 μg/mL的對照品溶液。將上述對照品溶液按“2.1”項下色譜條件分別進樣 10 μL，以5-HMF峰面積（Y）為縱坐標，5-HMF濃度（X）為橫坐標，進行線性回歸，并繪制標準曲線，線性回歸方程為：

Y=1.172 34×107X＋ 1 236.1，

r=0.999 8（n=7）。結果表明5-HMF對照品在 0.002 8～ 7.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關系良好。

2.4精密度試驗［6］

2.4.1重復性試驗取同一對照品溶液按照“2.1”色譜條件以10 μL重復進樣5次，測得5-HMF含量的RSD=1.12%；取同一批轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液按照“2.1”色譜條件以 10 μL重復進樣6次，計算5-HMF含量，RSD為1.22%，結果表明，本法的重復性較好。

2.4.2中間精密度試驗取同一供試品溶液按上述色譜條件，由不同的實驗人員分別于0，1，2，3，4，5日進樣，記錄色譜圖，結果峰形無改變，峰面積的RSD為1.64%，說明建立測定轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液中5-HMF含量的方法中間精密度良好。

2.4.3重現(xiàn)性試驗將上述同一供試品溶液送至嘉峪關市藥品檢驗所，依本文建立的方法用不同的高效液相色譜儀進行測定，結果峰形無改變，峰面積的RSD為2.35%，說明不同的實驗室不影響本方法的重現(xiàn)性結果。

2.5回收率試驗

精密量取已知5-HMF含量的轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液2.0 mL 9份，分別置于5 mL量瓶中，分為3組，每組3份。3組待測溶液分別精密加入“2.3”項下0.28 μg/mL對照品溶液1.1，1.3，1.5 mL，使得低、中、高濃度對照品加入量與所取供試品待測定成分量之比控制在0.8∶1，1∶1，1.2∶1左右［6］，加超純水至刻度。分別測定，計算加樣回收率。結果見表1，5-HMF平均回收率為99.81%，RSD為1.87%。

表1　加樣回收率試驗結果（n=9）

2.6樣品含量測定及穩(wěn)定性考察

按擬訂的含量測定方法，測定了10批市售轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液（揚子江藥業(yè)集團上海海尼藥業(yè)有限公司，規(guī)格：500 mL）樣品，并在效期內(nèi)的不同時間點多次進行檢測，5-HMF的含量在0.009～ 1.375 μg/mL之間。同一批號的轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液在不同時間點檢測結果的RSD均小于2.0%，說明同一批號的轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液在效期內(nèi)的不同時間點多次檢測結果是穩(wěn)定的。

3　討論

5-HMF是含有葡萄糖、果糖的注射液制備、運輸及儲存過程中產(chǎn)生的降解產(chǎn)物，因此有必要制訂轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液中5-HMF的檢查方法。《中國藥典》2015年版對于含葡萄糖注射液標準中采用紫外-可見分光光度法檢測5-HMF限度［7］，UV吸收度法因簡單、通用、不需對照品，可作為首選方法。若藥品成分比較復雜干擾檢測時，該方法分離度不高、專屬性較差。經(jīng)試驗，本文所用HPLC專屬性好，可用于轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液中雜質(zhì)含量的控制。

采用HPLC外標法限度要求應不低于藥典中葡萄糖注射液或葡萄糖氯化鈉注射液限度，需用對照品進行限度的等量轉(zhuǎn)換試驗，以確定合適的限度。根據(jù)《中國藥典》2015年版規(guī)定：葡萄糖注射液中5-HMF“在284 nm的波長處測定，吸光度不得大于0.32”。有研究認為［3］，《中國藥典》所規(guī)定的“吸光度不得大于0.32”時相對應的5-HMF濃度約為2 μg/mL，所有葡萄糖類注射液中5-HMF的限度應定為2 μg/mL。因此，按以上限度進行判斷，所測定的10批樣品中實驗結果表明轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液的5-HMF的吸光度均小于2 μg/mL，在限度控制范圍內(nèi)，說明轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液樣品的安全性有保障。

本文曾參照文獻［8］選擇0.05 mol/mL磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)pH值至 3.5）-甲醇（80∶20）進行測定，5-HMF的吸收峰拖尾比較嚴重。而用本文方法減少了拖尾的問題。

轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液是由葡萄糖與果糖等分子混合制成含有多種電解質(zhì)的復方制劑，不僅適用于手術后、燒創(chuàng)傷和感染等胰島素抵抗以及糖尿病患者的能量補充，同時還可作為靜脈給藥的載體，與多種藥物配伍。據(jù)文獻報道［9-12］，有些藥物可以與轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液配伍使用，而有些藥物與轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液存在配伍禁忌。本研究認為，在考察藥物與轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液的配伍穩(wěn)定性時應該考察5-HMF的限度。5-HMF是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產(chǎn)生的一個醛類化合物。藥品與轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液等含有單糖的注射液配伍后在放置過程中可能會分解產(chǎn)生5-HMF［13］。因此在藥物與含糖輸液配伍穩(wěn)定性研究中不可忽視，有必要檢測5-HMF的含量。

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doi：10.3969/j.issn.1672-5433.2016.02.006

收稿日期：（2015-09-08）

作者簡介：劉光斌，男，主任藥師。研究方向：臨床藥學、醫(yī)院藥學。通訊作者E-mail：jgyylgb@sina.com

Determination of 5-Hydroxymethyl Furfural Content in Invert Sugar and Electrolytes Injection by HPLC

Li Caixia，Liu Guangbin（Department of Pharmacy of Jiugang Hospital，Gansu Jiayuguan 735100，China）

ABSTRACTObjective：To develop a HPLC method for determination of 5-hydroxymethyl furfural content in invert sugar and electrolytes injection.Methods:Kromasil C18column（4.6 mm×250 mm，5 μm）was used，serving acetonitrile-triethylamine solution（9∶91，add 2.5 mL triethylamine to 1 000 mL water，and adjust the pH value to 3.0 with dilute phosphoric acid solution（1→5）as a mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min.The temperature of column was 25℃，while the detection wavelength was 284 nm.Results:The standard curve of 5-hydroxymethyl furfural showed a good linearity at a concentration range of 0.002 8～7.0 μg/mL（r=0.999 8）. The average recovery was 99.81%，with a RSD of 1.87%.Conclusion：The developed HPLC method is simple，sensitive，specific and accurate.

KEY WORDSInvert Sugar and Electrolytes Injection；5-Hydroxylmethyl Furfural；HPLC；Content Determination