李紅敬* ，李曉風，呂 萃，王雅平，李曉杰 ,黃新華

(信陽師范學院 生命科學學院，河南 信陽 464000)

0 引言

側(cè)條光唇魚(Acrossocheilusparallens)(Nichols)是棲息于石礫底部、水清流急溪流中的小型魚類，主要分布在珠江水系，隸屬鯉形目、鯉科、鲃亞科、光唇魚屬[1].側(cè)條光唇魚的研究主要在分類學及形態(tài)學比較[2]、個體生殖力[3]、年齡和生長的初步研究[4]以及基礎(chǔ)生物學研究[5]等方面，年輪特征未見詳盡報道.年輪特征是指年輪的分布或排列方式，是魚體內(nèi)在遺傳特性、生理機能和外界環(huán)境條件等各因素綜合作用形成的.描述、分析比較側(cè)條光唇魚各種年齡材料年輪特征，是對其進行年齡判定和分析種群結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ).本研究對鱗片、脊椎骨、主鰓蓋骨和耳石四種材料進行分析.

1 材料和方法

1.1 樣本采集

2000年6—8月，于廣東南嶺、天井山、天秤山、秤架和乳陽龍溪等地采集樣本，共93尾，體長35.70～98.84 mm，全長45.70～117.86 mm，體質(zhì)量4.01～106.72 g，長度精確到0.02 mm，質(zhì)量精確到0.1 g.8%福爾馬林固定后移至實驗室.

1.2 年輪材料的采集和處理

采集第一背鰭前半部下方至左側(cè)線上方中間2～3行環(huán)紋清晰、形狀規(guī)則的鱗片5～10枚.據(jù)鱗片大小用2% KOH溶液將其浸泡2～24 h，用棉簽輕輕擦洗鱗片，再用牙刷刷洗表面的結(jié)締組織，洗去黏液，然后用清水漂洗干凈，吸水紙吸干或自然晾干后貼上標簽封片，顯微鏡( Olympus)下觀測拍照.

選取第4～8節(jié)脊椎骨.置于2%KOH溶液中煮沸3～5 min，用牙刷剔除表面附著的肌肉和結(jié)締組織，然后置于2% H2O2溶液中漂白12 h左右，滴少量二甲苯進行透明，再在顯微鏡下觀察.

取主鰓蓋骨用手指搓掉表面污物，將其放于清水中煮沸1～3 min，牙刷刷洗表面結(jié)締組織，然后在清水中漂洗干凈.再置于甘油中浸泡0.5～1 h，在解剖鏡下觀察，拍照并保存.

用解剖剪將魚頭沿著魚體縱軸劈開，然后用鑷子夾取耳石，用清水漂洗干凈.用食指或中指將其按于水砂紙上進行打磨，先1000#粗磨，再用2000#細磨，打磨至露出中心核時將其翻過來，接著打磨另一面.滴適量二甲苯對其進行透析，再在顯微鏡下觀察.

2 結(jié)果

側(cè)條光唇魚的鱗片、脊椎骨、主鰓蓋骨和耳石等材料上都可以看到表示年齡的輪紋分布.鱗片年輪特征主要呈現(xiàn)為疏密型，切割型較少見，有時會看到副輪、幼輪等區(qū)別于年輪的輪紋.脊椎骨年輪特征為明帶和暗帶交替出現(xiàn)的同心環(huán)圈，一般是明帶稍寬，暗帶向明帶過渡處可看作年輪.主鰓蓋骨年輪特征為數(shù)條明暗間隔出現(xiàn)的環(huán)帶平行分布，大致呈L型，明帶一般較暗帶稍寬，可簡單地將暗帶視為年輪，輪紋特征在L型的拐角處或其附近較明顯.微耳石年輪表現(xiàn)為一條條圍繞耳石中心核的同心環(huán)紋，年輪特征在后區(qū)較為明顯；星耳石年輪由透明帶與白色遮光帶所構(gòu)成，一般透明帶寬度比遮光帶稍窄，兩者間隔出現(xiàn)且環(huán)狀分布.

2.1 鱗片年輪特征

側(cè)條光唇魚再生鱗(圖1a)不適合做年齡鑒定.側(cè)條光唇魚的鱗片為圓鱗，主要為盾形，偶見扇形、菱形，其形態(tài)在不同著生位置和個體中無明顯變化.可分為四個區(qū)：前區(qū)(又稱基區(qū))、上側(cè)區(qū)、下側(cè)區(qū)和后區(qū)(又稱頂區(qū))，后區(qū)明顯大于前區(qū)，鱗焦基位，但隨年齡增長，逐漸向鱗片中心轉(zhuǎn)移.大部分鱗片各分區(qū)均有自鱗焦向外發(fā)散的輻射溝，在前區(qū)、后區(qū)分布較規(guī)律，后區(qū)更為顯著(圖1b),在后區(qū)排列較前區(qū)、側(cè)區(qū)密集且相鄰輻射溝間距離基本相等，前區(qū)、側(cè)區(qū)輻射溝較為稀疏，側(cè)區(qū)輻射溝極少且大多為次生輻射溝(遠離鱗焦自不同環(huán)片發(fā)出)，前區(qū)也偶見次生輻射溝.鱗片前區(qū)和側(cè)區(qū)環(huán)片都清晰可見，前區(qū)環(huán)片呈疏密型分布，前區(qū)和側(cè)區(qū)交界處年輪特征較明顯，有時年輪處較密集甚至重合在一起形成一條暗帶，側(cè)區(qū)環(huán)片間距較寬且間隔幾乎相等，輪紋圍繞鱗焦形成敞開的U型(圖1b)，在對裝片進行觀察時發(fā)現(xiàn)少部分鱗片前區(qū)、側(cè)區(qū)無輻射溝，后區(qū)無顆粒狀突起(圖1c).環(huán)片交替排列且有規(guī)則，相鄰環(huán)片間彼此相互平行，后區(qū)有許多透明的顆粒狀突起，距離鱗焦較近位置處排列相對密集，邊緣處稀疏，距離后區(qū)邊沿較近處可看到一些暗紅色或紅褐色斑點(圖1d)，部分鱗片于突起顆粒凹陷處可看到一些細密環(huán)紋.部分鱗片還會看到溶蝕現(xiàn)象(圖1e).

鱗片外表面由鱗焦向外依次生長的環(huán)紋所構(gòu)成，常呈開口U型.當鱗片環(huán)紋發(fā)生周期性更新時，可將其看成年輪.側(cè)條光唇魚的年輪有疏密型(圖1b箭頭1)、切割型(圖1c)以及環(huán)片斷裂、分叉、合并(圖1g)等幾種，大部分為疏密型，切割型較為少見.疏密型大多在前區(qū)，寬帶和窄帶間隔出現(xiàn)，后區(qū)的輻射溝較為發(fā)達，環(huán)片被輻射溝所截斷，使年輪在后區(qū)不太連續(xù)，蛻變?yōu)轭w粒狀突起而不容易分辨(圖1b)，而有些鱗片后區(qū)的突起顆粒在年輪處分布較有規(guī)律(圖1f).切割型主要出現(xiàn)在側(cè)區(qū)，當年生長環(huán)片被第二年新出現(xiàn)環(huán)片所切割，切割處即為年輪.在進行年齡鑒定與判讀時通常根據(jù)疏密型和切割型年輪，環(huán)片斷裂、合并和分叉等也可作為年輪標志.鱗片有時還會見到除年輪之外的副輪、幼輪和生殖輪，副輪出現(xiàn)的位置與環(huán)片無規(guī)律、不清晰、不完整，折光性較弱(圖1i)；幼輪通常在鱗焦附近，密紋較狹窄，不便觀察(圖1b箭頭2)；生殖輪主要是環(huán)片斷裂與無規(guī)律扭曲，折光性較強，生殖輪有時與年輪重合(圖1h).

2.2 脊椎骨年輪特征

側(cè)條光唇魚的脊椎骨椎體呈現(xiàn)出硬骨魚類特有的雙凹形，但上下凹陷程度不同，似碗形，將切好并處理干凈的材料置于載玻片上，關(guān)節(jié)臼朝上放置.在顯微鏡下觀察，入射光下可看到椎體中央斜凹面上呈現(xiàn)出明暗交替的同心環(huán)圈.亮帶凹面中心有一小孔，其周圍常透明，無輪紋或有少數(shù)細紋，因而位于脊椎骨中心處的年輪較難判別，需結(jié)合同尾魚鱗片和耳石上的年輪讀數(shù)予以判定.明帶與暗帶組成一個生長年帶，一般亮帶較暗帶稍寬，內(nèi)側(cè)暗帶(暗色條紋)和外側(cè)亮帶(乳白色條紋)過渡處即年輪(圖2).脊椎骨椎體連接處常覆蓋有較多的結(jié)締組織，干擾脊椎骨最外邊輪紋的觀察.對脊椎骨各節(jié)椎體進行觀察比較，環(huán)紋清晰度和年輪讀數(shù)無顯著差異.

圖1 側(cè)條光唇魚鱗片

a.再生鱗；b.鱗片疏密型年輪(1為年輪，2為幼輪)；c.鱗片切割型年輪；d.鱗片上的暗紅色或紅褐色斑點；

e.溶蝕現(xiàn)象；f.顆粒在年輪處排列較規(guī)律；g.環(huán)片斷裂、分歧和合并；h.生殖痕；i.副輪.

圖2 側(cè)條光唇魚脊椎骨年輪(入射光下觀察)

2.3 主鰓蓋骨年輪特征

側(cè)條光唇魚主鰓蓋骨形態(tài)大致呈不規(guī)則四邊形.自然光下，部分鰓蓋骨表面邊緣附近裸眼可看到2～3條環(huán)紋，但在解剖鏡下卻不易辨認甚至看不到輪紋.大部分鰓蓋骨在透射光下可看到一些明暗間隔出現(xiàn)的L型環(huán)帶平行分布，明帶通常較暗帶稍寬，可將暗帶視作年輪.近中心處骨質(zhì)較厚，不容易看到輪紋，向周圍延伸逐漸變薄，輪紋也漸漸清晰，輪紋特征一般在L型的拐角處或其附近較明顯，但有的會在年輪附近看到副輪(圖3a).低齡魚輪紋呈現(xiàn)不完整的L形，且近中心處看不到輪紋(圖3b)；高齡魚輪紋特征較完整，近中心處可看到輪紋分布(圖3c).低齡魚輪紋間隔較大，易于識別，但隨著年齡增長，輪紋間距漸漸變小，易導致年輪的誤判.鰓蓋骨上有時可看到一些暗紅色斑點，近似星形(圖3d).

2.4 耳石年輪特征

側(cè)條光唇魚的耳石有3類，分別為位于基枕骨背面兩側(cè)縱溝中聽壺的星耳石(Asteriscus)、前耳骨后外側(cè)凹窩橢圓囊的微耳石(Lapillus)和內(nèi)耳球狀囊的矢耳石(Sagitta)，以上三類耳石在魚體中各有一對.星耳石形狀近似圓形，表面比較粗糙，邊緣有齒狀突起；微耳石近似卵圓形，前部膨大，后部稍尖，底部中間微凹或呈現(xiàn)凸凹面，邊緣稍薄，為不規(guī)則狀;微耳石中心核呈圓形且不透明,中心核偏于一側(cè)，位于前區(qū).星耳石中心核也為圓形，在中心區(qū).

年輪在微耳石中呈現(xiàn)為圍繞中心核的同心條紋，中心核的前區(qū)比較厚，用二甲苯透明后，該區(qū)輪紋仍不易辨認.后區(qū)比較薄，輪紋特征在此區(qū)較明顯，且各條紋間距離較大，很容易觀察(圖3e).星耳石磨片年輪由透明帶和白色遮光帶構(gòu)成，透明帶寬度比遮光帶稍窄，兩者間隔出現(xiàn)呈環(huán)狀分布，透明帶與遮光帶的交界處即為年輪(圖3f).

圖3 側(cè)條光唇魚主鰓蓋骨和耳石

a.鰓蓋骨副輪；b.鰓蓋骨暗紅色斑點；c.低齡魚鰓蓋骨輪紋；d.高齡魚鰓蓋骨輪紋；e.微耳石磨片年輪；f.星耳石磨片年輪

3 討論

通過側(cè)條光唇魚對輪紋清晰度和年輪可讀性進行比較發(fā)現(xiàn)，鱗片年輪特征最顯著而且清晰，容易選取、數(shù)量較多，對魚體損害很小，但對鱗片進行觀察時會看到一些副輪、幼輪等不同于年輪的輪紋影響年輪的判定，需觀察大量標本，總結(jié)規(guī)律，準確區(qū)分其差異.在觀察大鱗裂峽鲃(Hampalamacrolepidota)[6]和厚頜魴(Megal0bramapellegrini)[7]的鱗片時，也會看到這些異常輪紋.幼齡鮭魚(Coregonusclupeaformis)因饑餓而在鱗片留下副輪[8]；而有學者通過實驗推斷藍色太陽魚(Lepomismacrochirus)副輪的形成可能與階段性餌料不足有關(guān)[9]；另外，有研究表明進食方式不規(guī)律也會影響魚類鈣質(zhì)組織的正常形成,從而產(chǎn)生副輪[10].南嶺是長江水系和珠江水系的分界線，為亞熱帶濕潤性季風氣候,1月平均溫高于0 ℃，夏季較為炎熱，7月平均溫大約25 ℃，冬夏季節(jié)風向有很大不同，年降水量大于1500 mm，夏季雨水較多，冬季較少.側(cè)條光唇魚副輪的出現(xiàn)可能與南嶺獨特的氣候條件有關(guān).幼輪是副輪的一種，是位于鱗片中心區(qū)的一個小環(huán)圈，易與第一年輪即初輪相混淆.幼輪僅見于部分個體，輪紋寬度比正常年輪小得多,幼輪的出現(xiàn)往往與食性變換或者外界環(huán)境改變有關(guān).將當年秋冬直到第二年早春采集到的當齡魚，用退算法計算出一齡魚體長，與測得的實際體長作比較，若退算體長明顯小于實際體長則可判其為幼輪，否則為初輪.生殖輪是魚體在進行生殖活動時，會暫停攝食或產(chǎn)卵衰竭，使魚體內(nèi)靠近年輪的窄帶上產(chǎn)生一種表現(xiàn)為環(huán)片斷裂、分叉或無規(guī)則扭曲的非正常輪紋，多分布在側(cè)區(qū)，其中在雌性個體較多見.

脊椎骨年輪特征較明顯，而且無副輪的干擾，但近中心處輪紋較難判別，且邊緣常有些肌肉和結(jié)締組織，影響最外邊輪紋的觀察和判定.霍斌[11]對鯉科的尖裸鯉(Oxygymnocyprisstewarti)進行研究表明，脊椎骨初輪不便識別，附著的結(jié)締組織常影響最外邊輪紋的判斷.大部分主鰓蓋骨可看到明暗交替的輪紋，而且處理較為簡單，但是部分鰓蓋骨看不到輪紋，且有副輪干擾，因此主鰓蓋骨年齡判定的可靠性較低.劉明典[6]等對鲃亞科的大鱗裂峽鲃進行研究發(fā)現(xiàn)：鰓蓋骨不適合用于該魚的年齡鑒定.微耳石后區(qū)年輪特征較顯著，且輪紋間隔較大，便于觀察，微耳石輪紋較星耳石清晰，但由于微耳石底部有一凹窩，而邊緣較尖導致打磨的角度不容易控制.矢耳石細小易碎，本文未將其作為年輪材料.Victor 和Brothers[12]曾提出鯉科魚中的矢耳石都不適合判定年齡，而微耳石較佳.由于標本浸泡時間較長，耳石在處理過程中易碎，導致年齡鑒定的可利用性不高.耳石在魚體頭部，不容易受外界環(huán)境因素影響，經(jīng)常被視作比其他鈣化組織更為可靠的年齡判定材料.Erickson[13]通過研究發(fā)現(xiàn)：在對低齡的大眼梭鱸(Stizostedionvitreum)進行年齡判定時鱗片年輪讀數(shù)同耳石較為接近，而耳石在對生長緩慢的高齡魚進行年齡判定時，準確性較鱗片高.

在側(cè)條光唇魚的年齡鑒定中，鱗片是較佳材料，脊椎骨、主鰓蓋骨和耳石可作為輔助材料和佐證.王曉輝等[14]對鲃亞科的瓣結(jié)魚(Tor(Folifer)brevifilisbrevifilisPeter)年輪特征進行研究時發(fā)現(xiàn)鱗片年輪特征最顯著并且非常清晰，對該種魚年齡判定時首選鱗片.劉明典等[6]對鲃亞科的大鱗裂峽鲃進行研究發(fā)現(xiàn)：鱗片年齡判定能力優(yōu)于耳石與脊椎骨.趙海濤等[15]對鲃亞科光唇魚屬的云南光唇魚(Acrossocheilusyunnanensis)的鱗片、脊椎骨、耳石和鰓蓋骨進行研究時將鱗片作為年齡鑒定的重要依據(jù).鱗片是一種較為經(jīng)典的年齡判定材料，在淡水魚類中由于年齡判定的準確性和可利用性較高而被廣泛運用,其中在鯉科魚類的年齡鑒定中起著非常重要的作用.不少學者研究發(fā)現(xiàn)，鱗片僅適用于低齡魚或生長較快個體的年齡判定中，然而對于高齡魚或者生長較慢個體，鱗片在判定年齡時不太準確.本研究中的側(cè)條光唇魚是一種低齡小型魚(2、3齡個體較多，少數(shù)5齡個體)，因此將鱗片作為較佳的年齡判定材料是可靠的.