黃立森，張瞳昕，龐海月，吳黌坦，葉子堅，王貴弘

(1.廈門醫(yī)學高等?？茖W校醫(yī)學技術系，福建 廈門 361008；2.天然化妝品福建省高校應用技術工程中心，福建 廈門 361008；3.哈爾濱商業(yè)大學藥學系，黑龍江 哈爾濱 150028)

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蘆薈、白芷提取物聯(lián)合應用的抗氧化和美白活性評估

黃立森1,2，張瞳昕3，龐海月1,2，吳黌坦1,2，葉子堅1，王貴弘1,2

(1.廈門醫(yī)學高等?？茖W校醫(yī)學技術系，福建 廈門 361008；2.天然化妝品福建省高校應用技術工程中心，福建 廈門 361008；3.哈爾濱商業(yè)大學藥學系，黑龍江 哈爾濱 150028)

摘要：為評估蘆薈和白芷的乙醇提取物聯(lián)合應用在抗氧化和美白方面的協(xié)同增效作用，采用乙醇浸提法從蘆薈和白芷中提取分離功效成分，應用DPPH和ABTS方法評估其抗氧化活性，酪氨酸酶活性抑制實驗評估其美白活性。結果表明，蘆薈和白芷提取物聯(lián)合應用比單獨應用具有更強的抗氧化、清除DPPH自由基和抑制酪氨酸酶活性。蘆薈和白芷提取物聯(lián)合應用在抗氧化和美白方面具有協(xié)同增效作用。

關鍵詞：蘆薈；白芷；提取物；抗氧化；美白；酪氨酸酶；協(xié)同作用

保持皮膚結構和功能的完整對維護機體健康具有舉足輕重的意義[1]。隨著環(huán)境狀況的不斷惡化，皮膚細胞氧化應激損傷加劇，酪氨酸酶活性增強，黑色素增多而沉著，嚴重則導致皮膚細胞損傷而使其結構和功能遭受破壞[2]。另外，基于以白為美的傳統(tǒng)美學觀念[3]，美白類護膚品已成為功效性護膚品的重要組成部分，占美容護膚品消費市場的1/3[4]，美白類護膚品也成為化妝品研發(fā)機構和生產(chǎn)企業(yè)重點關注的方向[5]。具有抗氧化、美白功效的主要活性成分為一些小分子化合物，如熊果苷、VC及其衍生物和曲酸等[6]，這些成分雖然美白效果顯著，但在使用過程中會產(chǎn)生諸多副作用。而從天然動植物資源中提取美白活性成分相對安全，成為護膚品研發(fā)領域的熱點方向[7]。

蘆薈和白芷是我國常用的中草藥，在藥用方面發(fā)揮了重要作用，作者采用乙醇浸提法從蘆薈、白芷中提取功效成分，研究蘆薈、白芷提取物聯(lián)合應用在抗氧化和美白方面的協(xié)同增效作用。

1實驗

1.1材料、試劑與儀器

蘆薈(產(chǎn)地：福建)、白芷(產(chǎn)地：四川)，購于廈門國大藥房。

酪氨酸酶(BC級)，生工生物工程(上海)股份有限公司；DPPH，Sigma公司；L-DOPA、無水乙醇，國藥集團化學試劑有限公司；總抗氧化能力檢測試劑盒(ABTS快速法)，碧云天公司。

SPECTRAMAXI3X型酶標儀，MolecularDevices公司；EYELAN-1200B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，東京理化器械株式會社；冷凍干燥機(FreeZone?)，Labconco公司；LE2002E型電子天平，梅特勒-托利多國際股份有限公司。

1.2方法

1.2.1蘆薈和白芷功效成分的提取

將蘆薈和白芷分別粉碎，過40目篩，各稱取100 g，與70%乙醇按1∶10(g∶mL)比例加入到2 L三角錐形瓶中，室溫放置48 h，期間多次振蕩，48 h后過濾，45 ℃水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，超純水溶解收集，收集液用真空冷凍干燥機冷凍干燥成粉末。

1.2.2ABTS總抗氧化活性評估

按照試劑盒要求配制ABTS工作母液，使用前稀釋成工作液。將10 mmol·L-1Trolox標準溶液用超純水稀釋成濃度(mmol·L-1)為0.15、0.30、0.60、0.90、1.20和1.50的系列溶液。分別配制1.0 mg·mL-1蘆薈提取物溶液、0.5 mg·mL-1白芷提取物溶液、1.0 mg·mL-1蘆薈+0.5 mg·mL-1白芷提取物聯(lián)合溶液。96孔板的每個檢測孔中加入200 μL ABTS工作液，取10 μL各種濃度的Trolox標準溶液或樣品溶液加入到相應的96孔板中，室溫孵育2～6 min后，酶標儀測定734 nm處吸光度。采用GraphPad Prism軟件繪制標準曲線，并求出標準曲線方程，根據(jù)公式計算相對于Trolox的樣品濃度。樣品的抗氧化能力用Trolox-Equivalent Antioxidant Capacity(TEAC)來表示。

1.2.3DPPH自由基清除活性評估

取一定量的DPPH，用無水乙醇配制成濃度為0.08 mmol·L-1的DPPH溶液。96孔板的每個檢測孔中加入50 μL白芷提取物溶液(4.00 mg·mL-1、2.00 mg·mL-1、1.00 mg·mL-1、0.50 mg·mL-1)或50 μL蘆薈提取物溶液(2.00 mg·mL-1、1.00 mg·mL-1、0.50 mg·mL-1、0.25 mg·mL-1)或50 μL兩者聯(lián)合溶液，再加入150 μL DPPH溶液混合均勻，室溫避光反應30 min，酶標儀測定517 nm處吸光度。按式(1)計算DPPH自由基清除率，采用CompuSyn軟件進行協(xié)同性分析。

(1)

1.2.4酪氨酸酶活性抑制實驗

酪氨酸酶活性抑制實驗以L-DOPA為反應底物，檢測酪氨酸酶催化后的底物有色物質(zhì)Dopachrome在475 nm處的吸光度，間接反映樣品對酪氨酸酶的抑制活性。96孔板的每個檢測孔中加入50 μL磷酸鹽緩沖液，然后加入20 μL白芷提取物溶液(4.00 mg·mL-1、2.00 mg·mL-1、1.00 mg·mL-1、0.50 mg·mL-1)或20 μL蘆薈提取物溶液(2.00 mg·mL-1、1.00 mg·mL-1、0.50 mg·mL-1、0.25 mg·mL-1)或20 μL兩者聯(lián)合溶液，再加入80 μL預先在30 ℃恒溫水浴保溫的5 mmol·L-1L-DOPA溶液，然后加入5 μL濃度為2 mg·mL-1的酪氨酸酶水溶液，最后加入45 μL超純水，立刻混勻，30 ℃恒溫條件下測定475 nm處吸光度。按式(2)計算酪氨酸酶抑制率，采用CompuSyn軟件進行協(xié)同性分析。

(2)

2結果與討論

2.1蘆薈、白芷提取物聯(lián)合應用協(xié)同增強總抗氧化活性

依據(jù)ABTS試劑盒方法測試蘆薈、白芷、蘆薈+白芷聯(lián)合應用的總抗氧化活性。以濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標，繪制標準品Trolox的標準曲線，計算出標準曲線方程為：y=-0.1142x-0.4640，R2=0.99，通過標準曲線方程計算樣品的抗氧化活性，結果見表1。

由表1可知，總抗氧化活性強弱為：蘆薈+白芷>白芷>蘆薈。表明蘆薈和白芷提取物聯(lián)合應用對抗氧化活性具有協(xié)同增效作用。

2.2蘆薈、白芷提取物聯(lián)合應用協(xié)同增強DPPH自由基清除能力(表2)

從表2可知，單獨使用2.00 mg·mL-1、1.00 mg·mL-1

表1蘆薈、白芷提取物單獨或聯(lián)合應用的總抗氧化活性

Tab.1　The total antioxidant activities of individual or combination of Aloe vera and Angelica dahurica extracts

表2蘆薈、白芷提取物單獨或聯(lián)合應用的DPPH自由基清除能力

Tab.2The DPPH free radical scavenging activity of individual or combination ofAloeveraandAngelicadahuricaextracts

白芷濃度 mg·mL-1 蘆薈濃度 mg·mL-1清除率%CI2.000.0082-1.000.0072-0.001.0066-0.000.5047-2.001.00821.122.000.50820.931.001.00790.931.000.50770.80

注：CI為聯(lián)合指數(shù)，CI大于1為拮抗作用、等于1為相加作用、小于1為協(xié)同作用，下同。

白芷的DPPH自由基清除率分別為82%和72%；而單獨使用1.00 mg·mL-1、0.50 mg·mL-1蘆薈的DPPH自由基清除率分別為66%和47%；二者聯(lián)合應用的DPPH自由基清除率明顯高于二者單獨使用。通過CompuSyn軟件分析，繪制Fa-CI圖(圖1)。結果顯示，蘆薈和白芷提取物聯(lián)合應用除高濃度聯(lián)合組外CI值均小于1，表明二者聯(lián)合應用在DPPH自由基清除方面具有一定的協(xié)同增效作用，特別在低濃度下聯(lián)合應用時協(xié)同增效作用更強。

Fa代表活性大小，即0為0%活性、0.5為50%活性、1為100%活性 圖1　DPPH自由基清除能力的Fa-CI曲線Fig.1　Fa-CI Curve of DPPH free radical scavenging activity

2.3蘆薈、白芷提取物聯(lián)合應用協(xié)同增強抑制酪氨酸酶活性(表3)

表3蘆薈、白芷提取物單獨或聯(lián)合應用的抑制酪氨酸酶活性

Tab.3The inhibiting tyrosinase activity of individual or combination ofAloeveraandAngelicadahuricaextracts

白芷濃度mg·mL-1蘆薈濃度mg·mL-1抑制率%CI2.000.0056-1.000.0031-0.001.005-0.000.503-2.001.00610.922.000.50580.911.001.00420.981.000.50361.00

圖2　抑制酪氨酸酶活性的Fa-CI曲線Fig.2　Fa-CI Curve of inhibiting tyrosinase activity

從表3 可知，蘆薈和白芷提取物聯(lián)合應用的酪氨酸酶抑制活性明顯高于二者單獨使用。通過CompuSyn軟件分析，繪制Fa-CI圖(圖2)。結果顯示，蘆薈和白芷聯(lián)合指數(shù)CI值小于1，表明二者聯(lián)合應用在抑制酪氨酸酶活性方面具有協(xié)同增效作用。

3結論

采用乙醇浸提法從蘆薈和白芷中提取分離功效成分，應用DPPH和ABTS方法評估其抗氧化活性，酪氨酸酶抑制實驗評估其美白活性。結果表明，蘆薈和白芷提取物聯(lián)合應用在抗氧化和美白方面具有協(xié)同增效作用，可為開發(fā)中藥復方功效護膚品提供參考。

參考文獻：

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[7]關小麗，楊子明，顏小捷，等.8種殼斗科植物多酚含量及抗氧化能力[J].中國實驗方劑學雜志,2015,21(2):65-69．

基金項目：重點工程中心建設廈門市衛(wèi)計委資助項目(XWJW201402-02)，重點工程中心建設廈門醫(yī)學高等?？茖W校資助項目(ZD201402-02)

收稿日期：2016-02-29

作者簡介：黃立森(1983-)，男，苗族，湖南麻陽人，助理實驗師，主要從事天然化妝品研發(fā)工作，E-mail：83427584@qq.com；通訊作者：王貴弘，博士，教授，E-mail：2659294971@qq.com。

doi：10.3969/j.issn.1672-5425.2016.07.014

中圖分類號：TQ 658.2

文獻標識碼：A

文章編號：1672-5425(2016)07-0058-03

Evaluation of Antioxidation and Whitening Activities for Combination ofAloeveraandAngelicadahuricaExtracts

HUANG Li-sen1,2,ZHANG Tong-xin3,PANG Hai-yue1,2,WU Hong-tan1,2,YE Zi-jian1,WANG Gui-hong1,2

(1.DepartmentofMedicalTechnology,XiamenMedicalCollege,Xiamen361008,China;2.ApplicationTechniqueEngineeringCenterofNaturalCosmeceuticals,CollegeofFujianProvince,Xiamen361008,China;3.DepartmentofPharmacy,HarbinUniversityofCommerce,Harbin150028,China)

Abstract：To evaluate the synergetic effect of antioxidation and whitening activities for combination of Aloe vera and Angelica dahurica extracts,the active ingredients from Aloe vera and Angelica dahurica were separated by an ethanol extraction method.The antioxidant activity was evaluated by DPPH and ABTS methods.And the whitening activity was tested by using a tyrosinase inhibition experiment.Results showed that,the combination of Aloe vera and Angelica dahurica extracts had stronger antioxidant activity than the individual,as well as in the aspect of DPPH free radical scavenging and inhibiting tyrosinase activities.It has significant synergetic effect of antioxidation and whitening activities for combination of Aloe vera and Angelica dahurica extracts.

Keywords：Aloe vera;Angelica dahurica;extract;antioxidation;whitening;tyrosinase;synergetic effect

黃立森，張瞳昕，龐海月，等.蘆薈、白芷提取物聯(lián)合應用的抗氧化和美白活性評估[J].化學與生物工程，2016，33(7)：58-60.