林振華（山東恒信檢測(cè)技術(shù)開發(fā)中心，山東 濟(jì)南 250000）

地方養(yǎng)殖場(chǎng)豬大腸桿菌病的發(fā)病情況與耐藥性檢測(cè)分析

林振華
（山東恒信檢測(cè)技術(shù)開發(fā)中心，山東 濟(jì)南 250000）

目的：分析地方養(yǎng)殖場(chǎng)豬大腸桿菌病的發(fā)病情況與耐藥性檢測(cè)。方法：采集我縣126多個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)患有仔豬直腸拭子、腸內(nèi)容物、腸系膜淋巴結(jié)等疾病的豬樣品，對(duì)他們進(jìn)行菌株分離、血清型鑒定和耐藥性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，然后對(duì)研究資料進(jìn)行整理歸納。結(jié)果：從樣品中分離出102株致病性大腸桿菌；通過藥敏試驗(yàn)表明，對(duì)大腸桿菌致病菌株敏感度最高的有頭孢三嗪氟苯尼考、頭孢西丁、先鋒霉素V和丁胺卡那等9種抗生素，而對(duì)青霉素、利福平、阿莫西林、強(qiáng)力霉素等藥物的耐藥性菌株比例均大于60.7%。結(jié)論：為了降低細(xì)菌對(duì)抗生素產(chǎn)生耐藥性，在豬大腸桿菌病臨床上交替使用高敏抗生素，增強(qiáng)抗生素療效。

豬大腸桿菌病；發(fā)病情況；耐藥性檢測(cè)分析

在養(yǎng)殖場(chǎng)中，大腸桿菌病是危害嚴(yán)重的常見病和多發(fā)病，其發(fā)病率和死亡率位于仔豬疫病之首。如果大腸桿菌病情況出現(xiàn)，含有細(xì)菌的糞便排泄物被其它同窩豬只食入經(jīng)消化道感染，就會(huì)直接讓同圈的豬暴發(fā)大腸桿菌病，具有傳染性。而目前的治療方式主要通過抗生素進(jìn)行治療，但是近年來，但是大腸桿菌極易產(chǎn)生耐藥性，加上抗生素大量的濫用，從而導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生嚴(yán)重的耐藥性，需要加大劑量才能使得抗生素對(duì)病菌產(chǎn)生作用，使得治療成本增多，加重養(yǎng)殖負(fù)擔(dān)。為了能更加有效的進(jìn)行治療和預(yù)防，節(jié)約養(yǎng)殖場(chǎng)成本，合理利用抗生素，通過耐藥性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)分析，探討豬大腸桿菌病治療與預(yù)防的幾點(diǎn)措施，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1 一般資料

采集我縣126多個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)患有仔豬直腸拭子、腸內(nèi)容物、腸系膜淋巴結(jié)等疾病的豬樣品作為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象，通過對(duì)大腸桿菌病死仔豬心、肝、脾、肛門等部位還有可疑病豬的直腸內(nèi)容物等病料進(jìn)行大腸桿菌分離實(shí)驗(yàn)，并對(duì)實(shí)驗(yàn)做出分析和總結(jié)［1］。

1.2 方法

1.2.1 菌株分離和鑒定法

首先，使用滅菌棉從126例有豬大腸桿菌病中取白痢仔豬病例直腸內(nèi)糞便或者是死亡仔豬腸內(nèi)容物。其次，接種于麥康凱培養(yǎng)基上，在37攝氏度的溫度下培養(yǎng)18至24個(gè)小時(shí)后，取粉紅色可疑菌落接種于伊紅美蘭培養(yǎng)基，再次放于37攝氏度的溫度下培養(yǎng)18至24個(gè)小時(shí)，挑取紫黑色帶金屬光澤可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色進(jìn)行鏡檢。最后，將其培養(yǎng)特性、形態(tài)和革蘭氏染色反應(yīng)均符合大腸桿菌特征的菌株，采用普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂純化作，再進(jìn)一步生化鑒定。

1.2.2 生化試驗(yàn)法

首先，將已經(jīng)分離純化的菌株采用微量生化反應(yīng)管進(jìn)行生化反應(yīng)試驗(yàn)。其次，取待檢菌純培養(yǎng)物分別接種在乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、鳥氨酸、賴氨酸、尿素酶、枸櫞酸鹽、半固體瓊脂培養(yǎng)基上，37攝氏度恒溫培養(yǎng)18至24個(gè)小時(shí)，然后觀結(jié)果。最后，再將待檢菌純培養(yǎng)物少量接種于葡萄糖蛋白胨水生化管中，37攝氏度恒溫培養(yǎng)24至48小時(shí)后進(jìn)行甲基紅試驗(yàn)、VP試驗(yàn)和吲哚試驗(yàn)［2］。

1.2.3 藥敏試驗(yàn)法

首先，挑取以鑒定好的豬源致病性大腸桿菌，將其均勻密集劃線于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上。然后，用滅菌的鑷子取各種藥敏紙片按每?jī)蓚€(gè)紙片中心距離不少于25 mm分別貼于培養(yǎng)基表面，紙片一旦貼在某一位置上，在37攝氏度恒溫下培養(yǎng)24個(gè)小時(shí)。

2　結(jié)果

2.1 菌株分離和鑒定法結(jié)果分析

經(jīng)過觀察試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)病料接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板經(jīng)培養(yǎng)后可見有菌落長(zhǎng)出，具體的調(diào)整為：圓形、凸起、光滑、濕潤(rùn)、直徑為1～3 mm邊緣和不規(guī)則半透明；將菌落再接種于麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)后，長(zhǎng)出圓形、光滑、濕潤(rùn)、直徑2至3 mm的磚紅色菌落；最后，挑取紫黑色帶金屬光澤可疑菌落接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，通過鏡檢可發(fā)現(xiàn)鏡檢紫紅色、著色均勻、單個(gè)或成對(duì)的無(wú)莢膜、無(wú)芽孢、兩端鈍圓的短桿菌，有101株疑似菌株符合豬大腸桿菌形態(tài)特征。

表1 關(guān)于86株生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

2.2 生化試驗(yàn)法結(jié)果分析

對(duì)101株分離菌進(jìn)行了16項(xiàng)生化試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)有86株病原菌符合大腸桿菌生化特性，詳見表1。注（+為陽(yáng)性，-為陰性）

2.3 耐藥性結(jié)果分析

經(jīng)過試驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)有99株豬源致病性大腸桿菌對(duì)20種受試藥物表現(xiàn)不同程度的耐藥性，其中對(duì)磺胺類四環(huán)素類大環(huán)內(nèi)酯類及青霉素類的藥物耐藥性強(qiáng)，耐藥率高達(dá)73.2%以上。

3　討論

能及時(shí)快速的對(duì)豬大腸桿菌病的判斷非常重要，事關(guān)到養(yǎng)殖場(chǎng)安全問題，危急到豬等健康和生命安全都應(yīng)該給予重視的。通過本研究通過病原菌分離觀察、純化培養(yǎng)和鏡檢以及生化試驗(yàn)，結(jié)果表明了解病原特點(diǎn)對(duì)及時(shí)有效地制定防治方案對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)而言是非常有幫助的。本次研究中，疑似豬大腸桿菌病病料126份中有86份符合大腸桿菌特性，并通過生化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大腸桿菌的抗原類型主要由O、K、H抗原組成的，大部分是大腸桿菌的O抗原類群。

綜上所述，為了能做到預(yù)防大腸桿菌傳染給仔豬或者是其他的豬圈，要加強(qiáng)消毒措施，重視豬舍外部環(huán)境，保持豬舍通風(fēng)、清潔、干燥，定期對(duì)豬圈進(jìn)行消毒，提升他們的生存環(huán)境，控制它們的的發(fā)病情況。

［1］高敏，賈瑞志，仇天雷，等.集約化養(yǎng)雞場(chǎng)空氣環(huán)境中生物氣溶膠特點(diǎn)研究［J］.農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)，2015，（04）.

［2］段俊秀.雞大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性試驗(yàn)［J］.中國(guó)畜牧業(yè)，2015，（05）.

（編輯：晏兵兵）

S858.28

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1006-799X（2016）13-0085-02