王夢圓, 韓海斌, 王惠萍, 岳方正, 叢靖宇,劉愛萍*

(1. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學，呼和浩特 010010；2. 中國農(nóng)業(yè)科學院草原研究所，呼和浩特 010010；3. 錫林郭勒盟太仆寺旗草原站，內(nèi)蒙古寶昌 027000)

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傘裙追寄蠅不同地理種群遺傳多樣性的ISSR分析

王夢圓1，2, 韓海斌2, 王惠萍3, 岳方正2, 叢靖宇1*,劉愛萍2*

(1. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學，呼和浩特 010010；2. 中國農(nóng)業(yè)科學院草原研究所，呼和浩特 010010；3. 錫林郭勒盟太仆寺旗草原站，內(nèi)蒙古寶昌 027000)

為從分子水平探索不同地區(qū)傘裙追寄蠅種群間的內(nèi)在聯(lián)系，本文利用ISSR分子標記技術對8個不同地區(qū)傘裙追寄蠅自然種群進行遺傳多樣性、種群間分化程度以及聚類分析等研究。結果表明：篩選出11對多態(tài)性穩(wěn)定的ISSR引物，對8個地區(qū)傘裙追寄蠅群體的80個個體進行PCR擴增，共獲得166個重復性好且清晰可辨的ISSR條帶，平均每條引物擴增出15.0909個片段，且均為多態(tài)性條帶，多態(tài)信息含量(PIC)為0.8441-0.8653；香農(nóng)信息指數(shù)(I)為0.1240-0.3455；Nei’s遺傳多樣性指數(shù)(H)為0.0841-0.2285；基因分化率(Gst)為28.78%，基因流(Nm)的均值為1.5702，即遺傳變異主要存在于個體之間，不同種群間基因交流處于中等水平；8個地區(qū)傘裙追寄蠅種群被劃分為4個類群，種群間的遺傳分化與地理距離呈正相關關系。

傘裙追寄蠅；地理種群；ISSR；遺傳多樣性；遺傳分化

傘裙追寄蠅Exoristacivilis屬雙翅目Diptera寄蠅科 Tachinidae，是多主寄生性天敵昆蟲(相紅燕等，2012)。近年來，因其對多種草地害蟲，如小地老虎Agrotisypsilon、棉鈴蟲Helicoverpaarmigera、粘蟲Mythimnaseparata和銀紋夜蛾Argyrogrammaagnata等有控制作用而逐漸引起重視，尤其是對草地螟LoxostegesticticalisL.等間歇性大發(fā)生的害蟲有很好的防控作用(王建梅等，2013)。由于傘裙追寄蠅的控害作用近幾年才被人們發(fā)現(xiàn)，故對傘裙追寄蠅的研究主要集中在其生物學特性等方面(相紅燕等，2013)，對不同地理種群傘裙追寄蠅基因水平的研究國內(nèi)外尚無報道。

簡單重復序列間區(qū)(inter-simple sequence repeat, ISSR)，被認為是目前最簡便有效的分子標記技術之一，是基于SSR標記開發(fā)的一種分子標記方法(Ziekienlczetal.，1994)。因其操作簡單、多態(tài)性豐富、重復性好等優(yōu)點(Guietal.，2008)，被廣泛的應用到遺傳多樣性(梁紅蕾等，2012；宋忠魁等，2012;朱勛等，2012)、親緣關系(賀學勤等，2005)、種質(zhì)資源鑒定(Ammirajuetal.，2001；侯永翠等，2005；盧家仕等，2013)等研究當中。近年來ISSR技術主要應用于植物領域(Bornetetal.，2004；Li Hetal.，2009；Christopoulosetal.，2010；李娜，2014；周蘭英，2014)，在動物、昆蟲遺傳結構研究方面也已有一些報道(余德億等，2011；林杰君等，2012)。本文首次采用ISSR分子標記技術對不同地區(qū)傘裙追寄蠅種群遺傳多樣性進行了研究，以期從分子水平探索8個不同地區(qū)自然種群傘裙追寄蠅的基因交流程度、遺傳分化及內(nèi)在聯(lián)系，為今后利用傘裙追寄蠅防控害蟲提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1供試蟲源

本實驗所用傘裙追寄蠅成蟲個體采自錫林郭勒盟太仆寺旗(TQ)、新疆哈巴河縣(XJ)、河北康?？h(KB)、呼和浩特第七牧場(HH)、四子王旗(SQ)、土默特左旗(TZ)、興安盟代欽塔拉蘇木(DS)、興安盟義和道卜蘇木(YS)8個地區(qū)的自然種群(表1)，采集后的樣本經(jīng)100%乙醇浸泡后放置于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｃ總€種群分別取10-15頭個體進行DNA的提取。

表1　供試傘裙追寄蠅采集信息

注：種群代碼全文同。 Note：Population code all same in this paper.

1.2基因組DNA的提取與檢測

傘裙追寄蠅蟲體用無菌雙蒸水沖洗2-3次，晾干。單頭傘裙追寄蠅，去頭、足、翅于1.5 mL離心管中，加液氮研磨成粉(每個個體單獨研磨，不要混用研磨棒)。使用天根dp304動物基因組DNA提取試劑盒對樣本進行DNA提取。提取出的基因組DNA用1%的瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，然后置于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆?。每個種群選取10個DNA樣品進行ISSR遺傳多樣性分析。

1.3ISSR引物的合成與篩選

從加拿大哥倫比亞大學設計并公布的100條通用引物中篩選出擴增條帶明亮、清晰、重復性好的引物，用于傘裙追寄蠅遺傳多樣性的ISSR-PCR擴增反應，引物由上海生工生物工程技術服務有限公司進行合成。

1.4ISSR-PCR擴增體系的優(yōu)化及產(chǎn)物檢測

經(jīng)預實驗，對DNA模板、Mg2+、dNTPs、引物和Taq聚合酶用量進行篩選，得到最適反應體系(20 μL)為：10×PCR Buffer 2.0 μL，DNA模板1.0 μL，Mg2+1.8 μL，dNTPs 1.8 μL，引物1.0 μL，Taq聚合酶0.4 μL，ddH2O補足。經(jīng)預實驗得到最佳的擴增程序為：94℃預變性10 min；94℃變性45 s，54℃退火45 s，72℃延伸2 min，40個循環(huán)；72℃補充延伸10 min；最后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

擴增出的ISSR-PCR產(chǎn)物用1.5%的瓊脂糖凝膠在100 V恒壓條件下電泳1 h，對擴增產(chǎn)物進行檢測。電泳完成后，在紫外凝膠成像儀上對結果進行檢測并拍照保存。

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

對電泳圖譜中清晰可見的擴增條帶進行統(tǒng)計，一些亮度較低、較模糊的條帶視為無效的雜帶。在同一遷移位置上有清晰可辨的條帶時，被認為是同一DNA片段產(chǎn)物，計為“1”，無帶的則計為“0”，建立“01”二元數(shù)據(jù)矩陣，對數(shù)據(jù)進行分析。

采用群體遺傳學分析軟件Popgene 32 (Version 1.31)、Excel軟件對多態(tài)位點百分率(P)、Nei’s遺傳多樣性指數(shù)(H)、香農(nóng)信息指數(shù)(I)、基因分化系數(shù)(Gst)、基因流(Nm)、Nei’s遺傳相似度(S)、遺傳距離(D)和多態(tài)信息含量(PIC)進行計算(孫潔茹等，2011)。應用MEGA 4.0軟件，通過UPGMA(unweighted pair-group method with arithmetic averages)聚類法構建聚類圖。選用TFPGA軟件對遺傳距離和地理聚類進行mantel測定，其中地理距離由Distance 3.2軟件根據(jù)經(jīng)緯度坐標計算得出。

2　結果與分析

2.18個地區(qū)傘裙追寄蠅的ISSR-PCR擴增結果

8個地區(qū)自然種群傘裙追寄蠅的ISSR-PCR產(chǎn)物部分電泳結果如圖1和圖2。11對ISSR引物共擴增出166個色彩明亮、清晰可辨的條帶，11對引物擴增出的條帶數(shù)在11-18條，平均為15.0909，其中引物841和809擴增出的條帶數(shù)最多為18條，引物848擴增出的條帶數(shù)最少為11條。本實驗中11對引物擴增出的166個條帶均為多態(tài)性條帶，平均多態(tài)信息含量(PIC)為0.8591，大于0.5，均呈現(xiàn)高度多態(tài)性(表2)。

表2　11對ISSR引物對8個傘裙追寄蠅種群擴增信息

圖1　引物827對傘裙追寄蠅的ISSR擴增結果

注：M, DNA分子量標準物。圖2同。Note:M,DNA molecular weight marker.Some to Pig.2.

圖2　引物823對傘裙追寄蠅的ISSR擴增結果

2.2傘裙追寄蠅種群的遺傳多樣性分析

由表3可知，傘裙追寄蠅8個不同地理種群擴增出的條帶范圍為75-127條，其中土默特左旗種群(TZ)最多，新疆種群(XJ)最少，均值為107.1250。8個地區(qū)傘裙追寄蠅種群擴增條帶的多態(tài)比例(P)平均為79.85%，其中新疆種群最低為49.33%，多態(tài)性條帶37條，錫林郭勒盟太仆寺旗種群(TQ)最高為88.39%，多態(tài)性條帶有99條。8個地區(qū)傘裙追寄蠅的香農(nóng)信息指數(shù)(I)為0.1240-0.3455，平均值0.2736。新疆種群最低，土默特左旗種群最高。Nei’s遺傳多樣性指數(shù)(H)在0.0841-0.2285，平均值為0.1814。新疆種群最低，土默特左旗種群最高。以上結果表明：錫林郭勒盟太仆寺旗種群和土默特左旗種群的遺傳多樣性程度最豐富，而新疆種群的遺傳多樣性較差。

表3　傘裙追寄蠅8個種群的種群內(nèi)遺傳變異統(tǒng)計

注：N,擴增總條帶數(shù)；Q,多態(tài)性條帶數(shù)；P,多態(tài)比例；H,Nei’s遺傳多樣性；I,香農(nóng)信息指數(shù)；SD,標準差。Note:N, Number of bands;P, Percentage of polymorphism;H,Nei’sgene diversity;I, Shannon’s information index; SD, Standard deviation.

2.3傘裙追寄蠅種群間的遺傳分化分析

11對ISSR引物對8個地區(qū)傘裙追寄蠅自然種群的擴增中(表2)，基因分化系數(shù)(Gst)在0.1291-0.5955，均值為0.2878，其中引物827最大，引物809最小?；蛄?Nm)平均值為1.5702，引物809最大，為3.3743，引物827最小，為0.3396。對于整個群體而言，平均遺傳分化率為28.78%，說明有71.22%的變異來源于個體之間，群體內(nèi)的變異遠高于群體間的變異；根據(jù)基因流的大小，種群間基因交流較大(Nm<1)的位點有827、836、847、848，種群間基因交流較小(Nm>4)的位點沒有，其余位點在各種群間存在中等程度的分化。

根據(jù)11對引物擴增片段大小的統(tǒng)計分析，計算出傘裙追寄蠅8個種群間遺傳距離(D)和Nei’s遺傳相似度(S)，進一步分析了種群間的遺傳分化程度(表4)。四子王旗種群(SQ)與土默特左旗種群(TZ)之間的遺傳距離最小，為0.0734，新疆種群(XJ)與四子王旗種群之間的遺傳距離最大，為0.3556；Nei’s遺傳相似度的范圍在0.7008-0.9292，其中新疆種群與四子王旗種群之間最小，S為0.7008,四子王旗種群與土默特左旗種群之間最大,S為0.9292。

表4　傘裙追寄蠅8個地理種群間的遺傳距離和遺傳相似度系數(shù)

注：對角線上方為遺傳相似度系數(shù)，對角線下方為遺傳距離。Note:Genetic similarity index is above the diagonal, while the genetic distance is below the diagonal.

圖3　傘裙追寄蠅8個種群間基于Nei’s遺傳距離的UPGMA聚類圖Fig.3　UPGMA cluster analysis of the 8 Exorista civilis populations generated from the Nei’s genetic distance

2.4傘裙追寄蠅種群間的聚類分析

采用UPGMA方法聚類，對供試的8個不同地理種群傘裙追寄蠅進行聚類分析，得到聚類圖(圖3)。11對引物對8個地區(qū)傘裙追寄蠅種群的聚類分析結果如下：興安盟代欽塔拉蘇木種群、興安盟義和道卜蘇木種群以及錫林郭勒盟太仆寺旗種群聚為第1支；呼和浩特第七牧場種群、四子王旗種群及土默特左旗種群聚為第2支；河北康?？h種群單獨聚為第3支；新疆哈巴河縣種群單獨聚為第4支。傘裙追寄蠅8個種群的聚類結果與其自然地理分布呈現(xiàn)出一定的規(guī)律性，說明地理距離較近的種群聚為同一組或相鄰組，傘裙追寄蠅種群間的遺傳距離與其地理距離呈正相關關系。

2.5遺傳距離與地理距離的相關性分析

利用TFPGA軟件對傘裙追寄蠅8個種群間的遺傳距離與相應的地理距離進行Mantel測定(圖4)，回歸方程為y=7410.8x-625.60，相關系數(shù)r=0.6292(P=0.0130)。由此可見，傘裙追寄蠅種群間的遺傳距離與其地理距離呈顯著正相關關系。

圖4　傘裙追寄蠅8個種群的遺傳距離與地理距離間的回歸分析Fig.4　Regression analysis between genetic distance and geographical distance of the 8 Exorista civilis populations

3　結論與討論

ISSR分子標記技術在遺傳學研究領域發(fā)揮著重要作用，在昆蟲上的應用多數(shù)以農(nóng)業(yè)、蔬菜、瓜果類害蟲為主(朱振華等，2005；張長禹，2007；王帥宇，2010；張敏哲等，2013；韓海斌等，2013；陳英才，2014；高立志，2014)，但應用ISSR分子標記技術對天敵昆蟲遺傳多樣性研究卻少有報道。本研究首次選用ISSR標記的方法對傘裙追寄蠅種群的遺傳多樣性進行研究，從分子水平上探討了傘裙追寄蠅不同地理區(qū)域自然種群的內(nèi)在聯(lián)系，為進一步研究天敵昆蟲傘裙追寄蠅提供了理論依據(jù)。

多態(tài)信息含量(PIC)是衡量遺傳多樣性較好的指標，其值大小反映基因豐富程度(楊建寶等，2012)。Botstein等(1980)提出，當PIC>0.5時，該基因位點為高度多態(tài)性位點。本文檢測到11對ISSR引物的PIC值均大于0.5，呈現(xiàn)高度多態(tài)性，能為本研究的遺傳多樣性分析提供充足信息。其中引物841的多態(tài)信息含量最高，為0.8653，引物848的多態(tài)信息含量最低，為0.8441。說明不同引物對傘裙追寄蠅種群的多態(tài)性表現(xiàn)不同，故對不同種群的傘裙追寄蠅群體，選擇合適的引物十分重要。

多態(tài)位點比例(P)、香農(nóng)信息指數(shù)(I)和Nei’s遺傳多樣性指數(shù)(H)是衡量種群多樣性最常用的指標。綜合以上3個反映群體遺傳多樣性的重要參數(shù)指標表明，錫林郭勒盟太仆寺旗種群和土默特左旗種群的遺傳多樣性程度最豐富，而新疆種群的遺傳多樣性較差。這可能是由于太仆寺旗、土默特左旗兩地地勢平坦，無高山河流的阻隔，自然種群基因交流頻繁，從而導致遺傳多樣性比較豐富，而新疆哈巴河縣的傘裙追寄蠅自然種群由于與其他采集地區(qū)相隔較遠，基因交流受阻，其遺傳多樣性較差。

基因分化系數(shù)(Gst)是反映群體間遺傳分化的重要指標。根據(jù)Wright(1978)提出的標準，本研究中Gst平均值為0.2878(Gst>0.15)，說明傘裙追寄蠅8個種群的遺傳分化較大，群體中有28.78%的變異來自種群間，71.22%的變異來源于群體內(nèi)，即群體間的變異遠低于群體內(nèi)的變異。基因流(Nm)的基本作用是消弱種群間的遺傳差異，故其存在是影響種群間遺傳分化的重要因素。本研究中，11對ISSR引物檢測到基因流的均值為1.5702(1

群體間的遺傳距離揭示了群體遺傳分化的程度。本研究中8個種群傘裙追寄蠅的UPGMA聚類分析結果表明，8個地理種群共聚為4支。興安盟的代欽塔拉蘇木種群、義和道卜蘇木種群以及錫林郭勒盟太仆寺旗種群聚為第1支；呼和浩特第七牧場種群、四子王旗種群、土默特左旗種群聚為第2支；河北康保縣種群、新疆哈巴河縣種群分別單獨聚為第3支和第4支。其中興安盟代欽塔拉蘇木與義和道卜蘇木相鄰，為傘裙追寄蠅種群之間的交流提供了便利條件，且相似的生活習慣也使得基因交流變得容易。錫林郭勒盟太仆寺旗種群與以上兩地區(qū)種群共同聚為一支，可能是農(nóng)作物在收割過程中夾帶被傘裙追寄蠅寄生過的害蟲，由于交通貿(mào)易與當?shù)氐膫闳棺芳南壏N群進行基因交流，造成錫林郭勒盟太仆寺旗與興安盟兩地傘裙追寄蠅種群遺傳距離較近而共同聚為一類；呼和浩特第七牧場、四子王旗、土默特左旗三地地理距離較近，故三地傘裙追寄蠅種群在基因交流上受到的阻礙較小，基因交流頻繁；而新疆地區(qū)種群單獨聚為一支可能是因為地理距離較遠，與其他種群形成較大的地理隔離造成的，并且新疆哈巴河縣種群樣本采集于賀蘭山以西，由于賀蘭山的阻隔，在某種程度上起著天然屏障的作用，地理隔離較大，在生物資源方面有一定的差異，總體與其它種群差距較大，故而新疆哈巴河縣種群單獨聚為一支；河北康?？h種群單獨聚為一支可能是由于康?？h位于陰山山脈以東，內(nèi)蒙古高原南緣的壩上草原地區(qū)，同其他種群的基因交流較少引起的。地形的差異可能是傘裙追寄蠅種群遺傳變異的重要因素。Mantel檢測結果發(fā)現(xiàn)，種群間遺傳分化與地理距離呈正相關。地理距離和地形差異是限制其種群間基因交流，導致遺傳分化較高的主要原因。說明傘裙追寄蠅不同群體間的地理距離通過影響基因流而形成了現(xiàn)有的遺傳結構。綜上所述，傘裙追寄蠅8個種群的遺傳分化較大，不同種群間基因交流處于中等水平。

由于ISSR分子標記技術不能區(qū)分顯性純合基因型和雜合基因型(張民照和康樂，2002)，為傘裙追寄蠅種群遺傳結構分析所提供的信息量比較有限，加之本文所涉及傘裙追寄蠅的個體數(shù)量和種群還不足以覆蓋全國，故本文雖為傘裙追寄蠅不同地理種群的遺傳多樣性提供了有價值的分子生物學依據(jù)，但由于技術和采集數(shù)量的局限，很難全面反映全國各地傘裙追寄蠅的整體情況，尚需進一步研究。

References)

Ammiraju JSS, Dholakia BB, Santra DK. Identification of inter simple sequence repeat (ISSR) markers saaociated with seed size in wheat[J].TheoreticalandAppliedGentics, 2001, 102(5): 726-732.

Botstein D, White RL, Skolnick M,etal. Construction of a genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphisms[J].AmericanJournalofHumanGenetics, 1980, 32(3): 314-331.

Bornet B, Antoine E, Bardouil M,etal. ISSR as new markers for genetic characterization and evaluation of relationships among phytoplankton[J].JournalofAppliedPhycology, 2004, 16(4): 285-290.

Chen YC. Population Genetic Structure ofBactroceracorrecta(Diptera: Tephritidae) in Main Distributions Areas[D]. China Agricultural University, 2014. [陳英才. 世界主要分布區(qū)番石榴果實蠅種群遺傳結構研究[D]. 中國農(nóng)業(yè)大學, 2014]

Christopoulos MV, Rouskas D, Tsantili E,etal. Germplasm diversity and genetic relationships among walnut (JuglansregiaL.) cultivars and Greek local selections revealed by Inter-Simple Sequence Repeat (ISSR) markers[J].ScientiaHorticulturae, 2010, 125(4): 584-592.

Gui FR, Wan FH, Guo JY. Population genetics ofAgeratinaadenophorausing inter-simple sequence repeat (ISSR) molecular markers in China[J].PlantBiosystems, 2008, 142(2): 255-263.

Gao LZ. Population Genetic Structure Analysis ofBactroceraminax(Diptera: Tephritidae) in China Inferred from ND4 and Microsatellite Markers[D]. Southwest University, 2014. [高立志. 基于ND4和微衛(wèi)星標記的中國柑橘大實蠅種群遺傳結構分析[D]. 西南大學, 2014]

He XQ, Liu QC, Zhai H,etal. The use of RAPD, ISSR and AFLP markers for analyzing genetic relationships amongSweetpotatoCultivarswith known origin[J].ActaAgronomicasinica, 2005, 31(10): 1300-1304. [賀學勤, 劉慶昌, 翟紅, 等. 用RAPD、ISSR、和AFLP標記分析系譜關系明確的甘薯品種的親緣關系[J]. 作物學報, 2005, 31(10): 1300-1304]

Hou YC, Yan ZH, Lan XJ,etal. Genetic diversity among barley germplasm with known origins based on the RAMP and ISSR markers[J].ScientiaAgriculturaSinica, 2005, 38(12): 2555-2565. [侯永翠, 顏澤洪, 蘭秀錦, 等. 利用RAMP和ISSR標記分析大麥種質(zhì)資源的遺傳多樣性[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學, 2005, 38(12): 2555-2565]

Han HB, Zhou XR, Pang BP,etal. Microsatellite marker analysis of the genetic diversity ofOedaleusasiaticus(Orthoptera: Acrididae) populations in Inner Mongolia, northern China[J].ActaEntomologicaSinica, 2013, 56(1): 79-87. [韓海斌, 周曉榕, 龐保平, 等. 內(nèi)蒙古亞洲小車蝗種群遺傳多樣性的微衛(wèi)星分析[J]. 昆蟲學報, 2013, 56(1): 79-87]

Liang HL, Bao CH, Jiang YL,etal. Genetic diversities of two geographical populations ofPelodiscussinensisby ISSR[J].JournalofAnhuiAgriculturalUniversity, 2012, 39(1): 31-35. [梁紅蕾, 鮑傳和, 蔣業(yè)林, 等. 中華鱉兩個地理種群遺傳多樣性的ISSR分析[J]. 安徽農(nóng)業(yè)大學學報, 2012, 39(1): 31-35]

Lu JS, Bo ZY, Lv WL,etal. ISSR analysis on genetic diversity of germplasms resources inDendrobiumSW. from different habitats[J].ChineseTraditionalandHerbalDrugs, 2013, 44(1): 96-100. [盧家仕, 卜朝陽, 呂維莉, 等. 不同產(chǎn)地石斛屬種質(zhì)資源的ISSR遺傳多樣性分析[J]. 中草藥, 2013, 44(1): 96-100]

Li H, Ruan CJ, Silva JAT.Identification and genetic relationship based on ISSR analysis in a germplasm collection of sea buckthorn (Hippophae L.) from China and other countries[J].ScientiaHorticulturae, 2009, 123(2): 263-271.

Li N. Using ISSR Marker to Analyze Genetic Resources ofQuercusvariabilis[D]. North West Agriculture and Forestry University, 2014. [李娜. 栓皮櫟遺傳資源的ISSR分析[D]. 西北農(nóng)林科技大學, 2014]

Lin JJ, Bao YX, Liu J,etal. ISSR marker and its applications in analyzing animal genetic structure[J].ChineseJournalofEcology, 2012, 31(5): 1319-1326. [林杰君, 鮑毅新, 劉軍, 等. ISSR分子標記及其在動物遺傳結構研究中的應用[J]. 生態(tài)學雜志, 2012, 31(5): 1319-1326]

Song ZK, Sun FY, Li MY,etal. Genetic diversity of six mud crab (Scyllaparamamosain) populations in Beibu Gulf of South China based on ISSR analysis[J].ChineseJournalofEcology, 2012, 31(10): 2585-2590. [宋忠魁, 孫奉玉, 李夢蕓, 等. 北部灣6個擬穴青蟹群體遺傳多樣性的ISSR分析[J]. 生態(tài)學雜志, 2012, 31(10): 2585-2590]

Sun JR, Li Y, Yan S,etal. Microsatellite marker analysis of genetic diversity ofCacopsyllachinensis(YangetLi)(Hemiptera: Psyllidae) populations in China[J].ActaEntomologicaSinica, 2011, 54(7): 820-827. [孫潔茹, 李燕, 閆碩, 等. 微衛(wèi)星標記分析中國梨木虱種群的遺傳多樣性[J]. 昆蟲學報, 2011, 54(7): 820-827]

Wang JM, Liu AP, Gao SJ,etal. Parasitic functional response ofExoristacivilisRond. toLoxostegesticticalisL. larvae[J].ChineseJournalofGrassland, 2013, 35(5): 169-172. [王建梅, 劉愛萍, 高書晶, 等. 傘裙追寄蠅對草地螟幼蟲的寄生功能反應[J]. 中國草地學報, 2013, 35(5): 169-172]

Wang SY. Analysis of Mitochondrial Genome Sequences and Population Differentiation of Several Invasion Leafminers[D]. Chinese Academy of Agricultural Sciences, 2010. [王帥宇. 幾種入侵斑潛蠅線粒體全基因組序列分析及種群分化研究[D]. 中國農(nóng)業(yè)科學院, 2010]

Wright S. Evolution and the Genetics of Population Variability Within and Among Natural Population[M]. Chicago: University of Chicago Press, 1978.

Xiang HY, Liu AP, Gao SJ,etal. Selectivities ofExoristacivilisRond. to different hosts[J].JournalofEnvironmentalEntomology, 2012, 34(3): 333-338. [相紅燕, 劉愛萍, 高書晶, 等. 傘裙追寄蠅對不同寄主的選擇性[J]. 環(huán)境昆蟲學報, 2012, 34(3): 333-338]

Xiang HY, Liu AP, Gao SJ,etal. A biological study onExoristacivilis, a tachinid parasitoid ofLoxostegesticticalis[J].ActaPrataculturaeSinica, 2013, 22(3): 92-98. [相紅燕, 劉愛萍, 高書晶, 等. 草地螟優(yōu)勢寄生性天敵——傘裙追寄蠅生物學特性研究[J]. 草業(yè)學報, 2013, 22(3): 92-98]

Yu DY, Yao JA, Hu JF,etal. Genomic DNA extraction of three kinds of fruit flies and their ISSR-PCR reaction system establishment[J].JournalofAgriculture, 2011, 1(5): 22-28. [余德億, 姚錦愛, 胡進鋒, 等. 3種實蠅基因組DNA提取及ISSR-PCR反應體系的建立[J]. 農(nóng)學學報, 2011, 1(5): 22-28]

Yang JB, Zhang YP, Su JH,etal. Genetic analysis of culturedSalvelinusfontinalisin China inferred form microsatellites[J].SichuanJournalofZoology, 2012, 31(3): 348-352. [楊建寶, 張艷萍, 蘇軍虎, 等. 引進美洲紅點鮭群體遺傳多樣性微衛(wèi)星的分析[J]. 四川動物, 2012, 31(3): 348-352]

Ziekienlcz E, Rafashl A, Labuda D. Genome fingerprinting by simple sequence repeats (SSR) anchored polymerase chain reaction amplification[J].Genomics, 1994, 20(2): 176-183.

Zhu X, Yang JQ, Wu QJ,etal. Genetic diversity of different geographical populations ofPlutellaxylostella(Lepidoptera: Plutellidae) from China based on ISSR analysis[J].ActaEntomologicaSinica, 2012, 55(8): 981-987. [朱勛, 楊家強, 吳青君, 等. 小菜蛾不同地理種群遺傳多樣性的ISSR標記研究[J]. 昆蟲學報, 2012, 55(8): 981-987]

Zhou LY. ISSR Analysis on the Diversity of Oil-teaCamelliaGermplasms[D]. Hunan Normal University, 2014. [周蘭英. 油茶種質(zhì)資源多樣性的ISSR分析[D]. 湖南師范大學, 2014]

Zhang MZ, Pang BP, Zhou XR,etal. Optimization of SSR-PCR reaction system forPararcypleramicropterameridionalis[J].JournalofInnerMongoliaAgriculturalUniversity(Natural Science Edition), 2013, 34(3): 26-31. [張敏哲, 龐保平, 周曉榕, 等. 寬翅曲背蝗SSR反應體系的優(yōu)化[J]. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學學報 (自然科學版), 2013, 34(3): 26-31]

Zhu ZH, Ye H, Zhang ZY. Genetic relationships among fourBactroceracucurbitaegeographic populations in Yunnan Province[J].ChineseJournalofAppliedEcology, 2005, 16(10): 1889-1892. [朱振華, 葉輝, 張智英. 云南四個瓜實蠅地理種群的遺傳關系分析[J]. 應用生態(tài)學報, 2005, 16(10): 1889-1892]

Zhang CY. Molecular Phylogenetic Study and Molecular Identification in Five Species offruitflies(Diptera: Tephritidae)[D]. Huazhong Agricultural University, 2007. [張長禹. 五種實蠅的分子系統(tǒng)發(fā)育分析與分子快速鑒定研究[D]. 華中農(nóng)業(yè)大學, 2007]

Zhang MZ, Kang L. Amplified fragment length polymorphism (AFLP) and its applications in entomological research[J].ActaEntomologicaSinica, 2002, 45(4): 538-543. [張民照, 康樂. AFLP標記的特點及其在昆蟲學研究中的應用[J]. 昆蟲學報, 2002, 45(4): 538-543]

Genetic diversity ofExoristacivilisfrom different geographical populations based on ISSR marker

WANG Meng-Yuan1,2, HAN Hai-Bin2, WANG Hui-Ping3,YUE Fang-Zheng2,CONG Jing-Yu1*, LIU Ai-Ping2*

(1.Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010010, China; 2. Grassland Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Hohhot 010010, China; 3. Taipusi Banner Grassland Station, Baochang 027000, Inner Mongolian Autonomous Region, China)

In order to explore the genetic link of the different geographic populations ofExoristacivilisat the molecular level, the molecular marker technique based on inter-simple sequence repeat (ISSR) was used to assess the genetic diversity, population differentiation and cluster analysis in natural populations ofE.civilisfrom eight different regions. The results showed that eleven primers with stable polymorphic were sieved from primers of ISSR and a total of 166 clear ISSR bands with high repeatable were amplified from the 80 individuals, on average, each primer amplified segments were 15.0909, and these were all the polymorphic bands, Polymorphism Information Content(PIC)of per locus was 0.8441-0.8653; the Shannon’s Information Index(I)and theNei’sGene Diversities Index(H)were 0.1240-0.3455 and 0.0841-0.2285, respectively; Coefficient of Gene Differentiation (Gst) was 28.78%, the index of Gene Flow (Nm) an average of 1.5702, that is, genetic variability mainly exist in individual within population, and moderate gene flow among the different popilations;E.civilisindividuals from eight different habitats natural populations were divided into four groups and between the genetic differentiation of interspecific and geographical distance shows a positive correlation.

Exoristacivilis; geographical population; ISSR; genetic diversity; genetic differentiation

公益性行業(yè)項目(201103002)；“十二五”國家科技支撐計劃項目(2012BAD13B07)；農(nóng)業(yè)部“948”項目(2011-G4)

王夢圓, 女，1989年生，內(nèi)蒙古錫林郭勒盟人，碩士，研究方向為生物化學與分子生物學，E-mail：wmy19891012@126.com

Author for corresponding，E-mail：congjingyuwyh@163.com；E-mail：liuaiping806@sohu.com

2015-10-15; 接受日期 Accepted: 2015-11-12

Q968.1；S433.5

A

1674-0858(2016)04-0805-08