謝茂云，黃耀，彭家桃，王新根，余利娃

（廣東醫(yī)學(xué)院附屬福田醫(yī)院，廣東 深圳 518033）

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程序性細胞死亡因子4在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達及意義*

謝茂云，黃耀，彭家桃，王新根，余利娃

（廣東醫(yī)學(xué)院附屬福田醫(yī)院，廣東 深圳 518033）

目的研究程序性細胞死亡因子4（PDCD4）蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達及臨床意義。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測PDCD4蛋白在62例甲狀腺乳頭狀癌、20例癌旁正常組織及28例甲狀腺良性腫瘤中的陽性表達，并結(jié)合臨床資料進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果甲狀腺乳頭狀癌組織中PDCD4蛋白的陽性表達率明顯低于癌旁正常組織及甲狀腺良性腫瘤（P＜0.05）。隨著PDCD4表達水平的降低，甲狀腺乳頭狀癌惡性程度可能也隨之增加（P＜0.05）。PDCD4蛋白表達與甲狀腺乳頭狀癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論PDCD4蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中低表達，與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展有密切聯(lián)系。

甲狀腺乳頭狀癌；程序性細胞死亡因子4；免疫組織化學(xué)

程序性細胞死亡因子4（programmed cell death 4，PDCD4）是新近發(fā)現(xiàn)的與細胞凋亡相關(guān)的基因，已被證實為是一種腫瘤抑制基因。已有不少研究表明，PDCD4在腎癌、前列腺癌、肝細胞癌、胃癌、口腔唾液腺癌、卵巢癌等人類惡性腫瘤中表達低下或缺失［1-5］，但有關(guān)PDCD4在甲狀腺癌組織中的表達研究在國內(nèi)尚未見報道。甲狀腺癌多起病隱匿，常以無痛性甲狀腺結(jié)節(jié)為最初臨床表現(xiàn)，具體機制不是十分明確，本研究利用免疫組織化學(xué)法，探討PDCD4在甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生發(fā)展中的可能機制以及與腫瘤臨床病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，檢測PDCD4在甲狀腺乳頭狀癌的表達并探討其臨床意義。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2012年5月-2015年7月于廣東醫(yī)學(xué)院附屬福田醫(yī)院甲乳外科收治的住院患者。經(jīng)病理診斷明確為甲狀腺乳頭狀癌62例，作為甲狀腺乳頭狀癌組（有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者21例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者41例），20例癌旁正常組織及28例甲狀腺良性腫瘤作為對照組。所有患者術(shù)前都未作放療、化療及其他針對腫瘤的治療。

1.2主要試劑及儀器

鼠抗人PDCD4抗體（美國Ray Biotech公司），SP免疫組織化學(xué)試劑盒及DAB顯色試劑盒（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司）。

1.3免疫組織化學(xué)法檢測PDCD4的陽性表達

免疫組織化學(xué)主要步驟參照免疫組織化學(xué)SP檢測試劑盒說明書進行操作，主要操作步驟為：標(biāo)本用10%甲醛固定，脫水，石蠟包埋，5μm石蠟連續(xù)切片，切片厚度2μm，二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，抗原修復(fù)，血清封閉，一抗稀釋至1∶200，滴加一抗，體積分?jǐn)?shù)1%過氧化氫H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶，滴加二抗及鏈霉親和素-過氧化物酶復(fù)合物，DAB顯色，蘇木精復(fù)染。

1.4PDCD4陽性表達判定標(biāo)準(zhǔn)

PDCD4主要在核周、細胞漿陽性表達，以棕黃色或黃褐色顆粒為陽性細胞，在高倍視野下（×100），選取5個不重復(fù)陽性視野進行計數(shù)，根據(jù)染色強度和陽性細胞所占百分比進行評分判定。①按染色強弱：陰性為0分，染色弱但明顯強于陰性對照者為1分，染色較強者為2分；染色強者為3分。②陽性細胞比例：陽性細胞比例≤10%為1分，11%～30%為2分，31%～60%為3分，＞60%為4分；上述兩種分值相加≥3分為陽性。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，PDCD4各組間陽性表達率用χ2檢驗（必要時采用校正χ2檢驗或Fisher精確檢驗），P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1PDCD4蛋白在不同組織中的表達率

在癌旁正常組織及甲狀腺良性腫瘤中PDCD4陽性顆粒以核周、細胞漿表達為主，呈棕黃色或黃褐色顆粒（見圖1，A為癌旁正常組織，B為甲狀腺腺瘤），在甲狀腺乳頭狀癌組織中PDCD4陽性顆粒表達以細胞漿為主（見圖2，A為PDCD4陽性表達，B為陰性表達）。PDCD4在甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽性表達率為27.4%（17/62），在癌旁正常組織及甲狀腺良性腫瘤中的陽性表達率分別為 100.0%（20/20）、89.3%（25/28），組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.2PDCD4蛋白表達與甲狀腺乳頭狀癌惡性程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

PDCD4的陽性表達率隨甲狀腺乳頭狀癌臨床病理分期的增高而降低，Ⅰ、Ⅱ期的癌組織PDCD4陽性表達率高于Ⅲ、Ⅳ期的癌組織，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的PDCD4陽性表達率低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

3組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。其中甲狀腺乳頭狀癌與癌旁正常組織比較，χ2=32.171，P= 0.000；甲狀腺乳頭狀癌與甲狀腺良性腫瘤相比較，χ2=29.663，P=0.000。

圖1　癌旁正常組織及甲狀腺良性腫瘤中PDCD4蛋白表達（SP×100）

圖2　甲狀腺乳頭狀癌組織中PDCD4蛋白表達（SP×100）

表1　PDCD4蛋白在不同組織中的表達率

表2　PDCD4蛋白表達與甲狀腺乳頭狀癌惡性程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

3　討論

甲狀腺癌是最常見的內(nèi)分泌腫瘤，近年來發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，而甲狀腺癌中以甲狀腺乳頭狀癌為最多見。早期容易出現(xiàn)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，晚期可發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，其分化程度越差，惡性程度越高。雖然甲狀腺癌的治療取得了長足的進展，尤其是在外科治療方面的發(fā)展取得較好的效果。但仍有少部分患者出現(xiàn)術(shù)后癌灶復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移情況，臨床上對甲狀腺癌的發(fā)病機制尚不十分明確，關(guān)于甲狀腺癌的發(fā)病原因至今仍未完全探明，目前認(rèn)為其為環(huán)境因素和個體遺傳因素共同作用的結(jié)果。

PDCD4是一種新的腫瘤抑制因子，PDCD4的蛋白序列編碼469個氨基酸，在蛋白序列的164-275區(qū)和329-440區(qū)兩個區(qū)域各含有一個保守的a螺旋結(jié)構(gòu)區(qū)-MA3。MA3同樣也存在于真核翻譯起始因子eIF4GⅠ和eIF4GⅡ中，因此PDCD4可以通過MA3的結(jié)構(gòu)域競爭性的結(jié)合到eIF4A上。eIF4A是一種依賴ATP的RNA解旋酶，其能夠展開mRNA，使核糖體移行到3’位，定位到起動密碼子AUG上，從而啟動基因的翻譯。PDCD4通過阻止eIF4A和eIF4G的結(jié)合來抑制解螺旋酶活性，從而抑制翻譯的進行［6-7］。也有研究發(fā)現(xiàn)PDCD4本身可以抑制自噬的發(fā)生，通過對LPS誘導(dǎo)自噬的幾個通路進行分析，進一步探索發(fā)現(xiàn)LPS可以誘導(dǎo)磷酸化P38 MAPK的表達，并且在PDCD4-/-小鼠的巨噬細胞中，這種誘導(dǎo)作用更加明顯，磷酸化P38 MAPK的表達明顯高于c57小鼠，因此P38 MAPK通路可能是PDCD4調(diào)控自噬發(fā)生的主要通路。

本研究結(jié)果表明，PDCD4蛋白在癌旁正常組織全部陽性表達，在甲狀腺良性腫瘤絕大多數(shù)呈陽性表達，而在甲狀腺乳頭狀癌中的表達明顯降低甚至缺失，并隨著癌組織臨床病理分期越差，PDCD4表達程度越低。這提示PDCD4可能與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生、發(fā)展與惡性程度密切相關(guān)?？赡苁且驗镻DCD4的表達下調(diào)，失去對真核翻譯起始因子的抑制從而發(fā)揮類似癌基因的作用，同時低表達的PDCD4喪失其抑制癌細胞生長及抑制自噬發(fā)生的作用。有研究表明PDCD4可以作為結(jié)直腸癌新輔助化療療效及判斷預(yù)后的客觀指標(biāo)［8］。對于腎癌、卵巢癌、乳腺癌患者，PDCD4缺失提示組織學(xué)分級較低，并且容易發(fā)生遠處和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，可作為評估預(yù)后的一個指標(biāo)［1，4，9］。結(jié)合本研究結(jié)果，PDCD4也可能成為甲狀腺乳頭狀癌惡性程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后判斷的一個因子。隨著研究不斷深入，PDCD4靶基因治療或許也會成為甲狀腺乳頭狀癌患者一個新的治療途徑。

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（張蕾編輯）

Expression and significance of PDCD4 in thyroid papillary cancer（TPC）*

Mao-yun Xie，Yao Huang，Jia-tao Peng，Xin-gen Wang，Li-wa Yu
（Affiliated Futian Hospital of Guangdong Medical College，Shenzhen Guangdong 518033，China）

Objective To investigate the expression and significance of PDCD4 in thyroid papillary cancer（TPC）. MethodsPDCD4 immunohistochemical expression was investigated in 62 cases of TPC，20 cases of paracarcinomatous normal tissue and 28 cases of benign thyroid tumor.Their relationship with clinical data was analyzed.Result The positive rate of PDCD4 protein was significantly lower in TPC than that in paracarcinomatous normal tissue and benign thyroid tumor（P＜0.05）.And with the decreasing of PDCD4 protein expression level，the malignant degree of TPC increased，which had statistically significant difference among groups（P＜0.05）.But the expression of PDCD4 protein had no relationship to lymph node metastasis（P＞0.05）.Conclusions The down-regulated expression of PDCD4 protein is correlated with the pathogenesis and development in TPC.

thyroid papillary cancer；PDCD4；immunohistochemistry

R736.1

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.16.010

1005-8982（2016）16-0049-03

2016-01-28

深圳福田區(qū)公益性科研項目（No：FTWS2014010）