胡強(qiáng)，隋爽，王國棟，姚利民

(山東省煙臺市解放軍第107醫(yī)院 燒傷整形科，山東 煙臺 264000)

抗TNF-α與透明質(zhì)酸共軛結(jié)合對抑制燒傷炎癥反應(yīng)的效果

胡強(qiáng)，隋爽，王國棟，姚利民

(山東省煙臺市解放軍第107醫(yī)院 燒傷整形科，山東 煙臺 264000)

目的制備抗TNF-α與透明質(zhì)酸(hyaluronic acid,HA)軛合物，研究其對燒傷炎癥反應(yīng)的抑制效果。方法制備了抗TNF-α 抗體與HA共軛結(jié)合物，并將其燒傷抗炎效果與生理鹽水、HA、抗TNF-α 抗體以及HΑ與抗TNF-α非共軛混合物進(jìn)行比較研究。結(jié)果該軛合物會減少無法存活的組織，并使巨噬細(xì)胞CD68減少，IL-1β濃度降顯著降低。結(jié)論研究結(jié)果表明，與直接運用非共軛抗體比較，抗TNF-α與高分子量 HΑ共軛結(jié)合應(yīng)用能更持久的局部調(diào)節(jié)損傷后炎癥反應(yīng)。

TNF-α；傷口愈合；透明質(zhì)酸；燒傷創(chuàng)面；炎癥

研究證明促炎癥細(xì)胞因子的單克隆抗體與高分子量透明質(zhì)酸(hyaluronic acid，HΑ)結(jié)合能保存抗體結(jié)合親和力，并使炎癥反應(yīng)水平下調(diào)[1-2]。這種共軛結(jié)合會延緩細(xì)胞外環(huán)境中細(xì)胞因子的擴(kuò)散，通過減緩信號級聯(lián)反應(yīng)來調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度。燒傷可產(chǎn)生的強(qiáng)烈炎癥反應(yīng)，并引起繼發(fā)性組織壞死。這種繼發(fā)性壞死的原因可能與炎癥介導(dǎo)機(jī)制有關(guān)[3]，會使燒傷的深度和面積不斷加重，因此燒傷是這種軛合物的一種潛在臨床應(yīng)用。

急性炎癥的特征是促炎癥細(xì)胞因子增多，在傷口微環(huán)境中具有噬菌作用的巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞增多，以及血管的擴(kuò)張能力和滲透性增加。在急性炎癥過程中，細(xì)胞因子能激活吞噬死亡細(xì)胞、殘骸的巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞，并阻止微生物的侵襲，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)就是由上述這些活化的巨噬細(xì)胞釋放，并在該環(huán)境中一直保持激活狀態(tài)的調(diào)節(jié)因子[4]。TNF-α是一種炎癥反應(yīng)的上游調(diào)節(jié)因子，具有多種生理作用，在燒傷創(chuàng)面組織和傷口液體中表達(dá)水平很高[5]，因此TNF-α是燒傷創(chuàng)面中造成組織破壞的關(guān)鍵因子。TNF-α 能導(dǎo)致血管擴(kuò)張，并增強(qiáng)中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附性，可幫助液體轉(zhuǎn)移和具有噬菌作用的白細(xì)胞到達(dá)損傷部位。TNF-α也能與中性粒細(xì)胞相互作用從而加強(qiáng)組織破壞程度,中性粒細(xì)胞通過與內(nèi)皮細(xì)胞粘附來抑制液體從血液流向組織，TNF-α?xí)怪行粤＜?xì)胞壽命延長，導(dǎo)致活性氧的釋放，從而造成血管破壞，促進(jìn)液體從血液流向組織。TNF-α水平的升高還會引發(fā)角質(zhì)細(xì)胞壞死，使愈合過程停止。許多研究發(fā)現(xiàn)[6-8]，燒傷后的血清中TNF-α 水平并沒有明顯上升，但是在局部燒傷皮膚中，其水平顯著升高。因此，局部控制性調(diào)節(jié)TNF-α 信號可能會改善創(chuàng)面愈合結(jié)果。

作為表皮下葡萄糖胺聚糖的主要成分，HΑ具有良好的生物相容性和生物活性，已被廣泛應(yīng)用于傷口敷料、皮膚替代產(chǎn)品以及其它再生醫(yī)學(xué)應(yīng)用品中[9]。高分子量HΑ具有多種功能，不僅能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞的遷移、增殖和細(xì)胞因子生成，還具有免疫抑制作用和清除自由基的作用。本研究旨在通過制備抗TNF-α 抗體與HA共軛結(jié)合物，并將其燒傷抗炎效果與生理鹽水、HA、抗TNF-α 抗體以及HΑ與抗TNF-α非共軛混合物進(jìn)行了比較，以進(jìn)一步闡明局部抗體療法的效果。

1 材料與方法

1.1 材料 HΑ(MW= 1.6 MDα)和 4-二甲氨基吡啶(Sigmα-Αldrich；St.Louis, MO)；羥基硫代琥珀酰亞胺(sulfo-NHS)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳酰胺(EDC)(Pierce；Rockford, IL)；抗rTNF-α 純化的鼠單克隆 IgG(R&D Systems；Minneαpolis，MN)；CD68檢測試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)；光學(xué)顯微鏡(BX51，奧林巴斯中國有限公司)；酶標(biāo)儀(Multiskan FC 賽默飛)；T-PER組織總蛋白抽提試劑購自美國賽默飛公司，大鼠IL-1β ELISA試劑盒購自上海西唐生物科技有限公司，所有試劑均按照使用說明保存和使用。

1.2 方法

1.2.1 單克隆抗體和HΑ結(jié)合[10]：HA(12 mg，7.5 nmol)分散于1 mL 緩沖液中(pH 7.4)，然后加入EDC(240 μg，1.55 mol)， sulfo-NHS (650 μg，3.00 μmol)和DMAP(10 μg)。室溫反應(yīng)過夜，抗rTNF-α (1 mg，6.66 nmol)溶解于200 uL PBS中然后加入上述HA活化溶液，4 ℃下反應(yīng)過夜。產(chǎn)物經(jīng)過PBS透析24 h，在4 ℃下PBS洗滌4遍。最終得到的產(chǎn)物由約1%(w/v) HΑ 溶液組成。為了使結(jié)合物獲得更大的粘度以及更適合在開放創(chuàng)面應(yīng)用，將3份共軛產(chǎn)物與4份8% HΑ溶液混合，得到含5%HΑ的共軛溶液，最終抗rTNF-α抗體的濃度約為400 μg/mL。見圖1。

圖1 共軛結(jié)合原理圖(EDC活化HΑ，與抗體上的胺基形成酰胺鍵)Fig.1 Schematic of conjugation( HA was activated with EDC to form amide bond with an amine group on the antibody)

1.2.2 大鼠深Ⅱ度燒傷模型:用焊接工具作為可控?zé)嵩?，并對其烙鐵進(jìn)行改進(jìn)，使其尖端有一直徑17 mm、厚度2.5 mm、重量500 g的銅盤。銅盤非接觸的一邊與熱耦合器連接，以監(jiān)測銅盤的實際溫度。用20只剃毛的Wistar成年大鼠(山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實驗動物中心提供，動物合格證：魯動質(zhì)字201507008號)(體質(zhì)量200 g左右)后背部制造燒傷模型[11]，隨機(jī)分為5組，每組4只。銅盤加熱到85 ℃，然后穩(wěn)定2 min，將其置于大鼠皮膚上10 s，在每只大鼠身上制造一個燒傷部位。第2天用手術(shù)剪刀切除焦痂，并盡可能使切口靠近焦痂邊緣。5個實驗組分別為：生理鹽水處理組、HA組、只運用抗TNF-α處理組、抗TNF-α與HΑ混合(抗TNF-α+ HΑ)處理組以及(抗TNF-α)-HΑ絡(luò)合物處理組。將大鼠隨機(jī)分配到不同的治療組和時間點(見圖2)，規(guī)定去除焦痂的日期為第0天，并在同一天進(jìn)行第1次處理。傷口用TegαdermTM覆蓋，并用氰基丙烯酸酯密封。分別在第0、2和4天進(jìn)行干預(yù)，并在第7天實驗結(jié)束時將大鼠處死，用剪刀剪下燒傷灶周圍的組織。用10%甲醛浸泡組織以方便組織學(xué)分析或迅速冰凍以進(jìn)行下一步的蛋白提取。

圖2 燒傷實驗的時間軸有3個時間點， n=4 只大鼠，在第 1、4、7天接受了第1、2、3次處理Fig.2 Timeline of burn testThere were three times, n=4, rats were accept three treatments in the first, fourth, seventh days

1.2.3 組織學(xué)染色[12]:將燒傷部位的樣本置于載玻片上，用石蠟包埋，然后用二甲苯脫蠟，接著以不同濃度的酒精處理(70%～100%)，運用曼森氏三色染色進(jìn)行形態(tài)學(xué)評估。然后運用與脫蠟程序相反的步驟，使切片脫水，最后蓋玻片密封。

1.2.4 CD68細(xì)胞染色:取燒傷部位的15個樣本首先進(jìn)行脫蠟，用95 ℃～100 ℃檸檬酸抗原修復(fù)緩沖液浸泡切片20 min，之后冷卻到60 ℃。分別用TRIS-緩沖鹽水-Tween 20和PBS沖洗切片各2次。按檢測試劑盒操作，一抗為小鼠抗大鼠CD68，二抗為生物素化的馬抗-鼠IgG，4%二氨基聯(lián)苯胺染色，并用哈里斯蘇木精復(fù)染。利用顯微鏡分析免疫組化染色圖像，目測進(jìn)行CD68陽性細(xì)胞計數(shù)。

1.2.5 IL-1β 濃度測定:取切碎的快速冰凍組織0.1 g，加入到600 μL T-PER組織蛋白提取液中混勻，10000轉(zhuǎn)/分離心5 min，取上清液-80 ℃保存。按IL-1β ELISA試劑盒操作，分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00 μL，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100 μL，將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，37 ℃反應(yīng)120 min。棄去液體，每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100 μL，37 ℃反應(yīng)60 min。棄去孔內(nèi)液體，洗板3次。每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液100 μL，37 ℃反應(yīng)60 min。棄去孔內(nèi)液體，洗板5次，依序每孔加底物溶液90 μL，37 ℃避光顯色30 min。依序每孔加終止溶液50 μl，終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀分析450 nm 時的吸光度，計算IL-1β濃度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，利用ANOVA法來分析結(jié)果的顯著性，IL-1β濃度經(jīng)過了對數(shù)轉(zhuǎn)換后分析，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 組織學(xué)定性評估 曼森氏三色染色定性展現(xiàn)了傷口的大體表現(xiàn)，第4天時，所有大鼠完好的皮膚和焦痂之下均發(fā)現(xiàn)有新形成的肉芽組織。但是在軛合物處理的傷口中，肉芽組織更牢固，表明軛合物處理組愈合反應(yīng)發(fā)生較早。見圖3。

圖3 燒傷邊緣的曼森氏三色染色圖像焦痂去除后4 d，在真皮深處開始出現(xiàn)肉芽組織，(抗TNF-α)-HΑ處理部位的肉芽組織最多。HΑ、抗TNF-α和抗TNF-α+ HΑ處理組肉芽組織形成緩慢，生理鹽水處理組肉芽組織的形成最緩慢。第4天時，大多數(shù)創(chuàng)面觀察到新生成的焦痂(#)；第7天時，生理鹽水和抗TNF-α處理的燒傷部位出現(xiàn)明顯壞死。(抗TNF-α)-HΑ處理部位第7天時，毗組織(*)最健康。比例尺=1 mmFig.3 Msson’s trichrome images of burn edgesGranulation tissue started to appear 4 days after eschar removal in the deep dermal region,with the most robust granulation tissue in the(anti-TNF-a)-HA treated sites.HA, anti-TNF-a, and anti-TNF-a 1 HA treatments shows slower granulation tissue formation, while saline treated wound sites display the slowest granulation tissue formation.On day 4, newly forming eschar(#)is observed in most of the wound sites, and on day 7, necrosis has grown significantly particularly in saline and anti-TNF-a treated burn sites.Adjacent tissue( * ) appears healthiest day 7 in the(anti-TNF-a)-HA treated sites.Bar is 1 mm

盡管第1天時焦痂已被去除，但在第4天和第7天時，大多數(shù)傷口中均出現(xiàn)新生成的焦痂。生理鹽水和混合抗TNF-α處理組中，該暗紅色層明顯更厚，這有可能是皮膚組織繼發(fā)性壞死的原因。第7天圖像顯示，生理鹽水和抗TNF-α 處理組中暗紅色層會顯著增厚，該現(xiàn)象在軛合物處理組中表現(xiàn)不明顯。

第7天時軛合物處理組與其他組比較，毗鄰傷口的有活性組織似乎最健康，保持了表皮和真皮結(jié)構(gòu)。軛合物處理組中該區(qū)域的毛囊是完好的，然而在其它組中是受損的，尤其是在生理鹽水對照組。生理鹽水處理組焦痂去除后1天，毗鄰傷口的組織中，血管發(fā)生擴(kuò)張, 但相比較而言，抗TNF-α、抗TNF-α+HΑ混合組和軛合物處理組的血管擴(kuò)張不明顯?？筎NF-α和軛合物處理組第7天時目測觀察血管擴(kuò)張的程度比生理鹽水處理組第1天小。

2.2 巨噬細(xì)胞浸潤 利用CD68免疫組化染色來評估創(chuàng)面以及深達(dá)200～500 μm的健康和受損組織連接處在燒傷后不同時間點活化巨噬細(xì)胞的總數(shù)目。選取3個放大40×倍的顯微鏡視野，進(jìn)行CD68陽性細(xì)胞計數(shù)，計算CD68陽性細(xì)胞在細(xì)胞中的百分率，最后進(jìn)行平均，結(jié)果如圖4、表1所示?？筎NF-α或(抗TNF-α)-HΑ軛合物處理組與生理鹽水處理組相比，巨噬細(xì)胞計數(shù)顯著減少(第1天時，P<0.001；第4天時，P<0.05；第7天時，P<0.001)；抗TNF-α +HΑ混合處理組的巨噬細(xì)胞計數(shù)也顯著減少(第4天時，P<0.05；第7天時，P<0.001)。(抗TNF-α)-HΑ軛合物或抗TNF-α+HΑ混合處理與生理鹽水比較，第7天時會使巨噬細(xì)胞明顯減少約20%?？筎NF-α 處理第4天和第7天時，巨噬細(xì)胞數(shù)目減少最明顯，與生理鹽水處理比較減少約40%，與(抗TNF-α)-HΑ處理比較減少約20%。在巨噬細(xì)胞浸潤減少方面，非共軛抗TNF-α處理效果最明顯，而(抗TNF-α)-HΑ軛合物和抗TNF-α + HΑ混合處理對巨噬細(xì)胞浸潤的影響效果相似。

圖4 巨噬細(xì)胞浸潤百分比第1天時，巨噬細(xì)胞計數(shù)受到(抗TNF-α)-HΑ的影響最大，受到抗TNF-α影響較小。第4天和第7天時，抗TNF-α處理使巨噬細(xì)胞計數(shù)減少最明顯。第7天時，(抗TNF-α)-HΑ 處理會使巨噬細(xì)胞計數(shù)輕度減少，與生理鹽水對照組比較仍具有顯著差異*P<0.001，*P<0.05，與生理鹽水組比較Fig.4 Macrophage infiltration countsOn day 1, macrophage count appears to be most affected by(anti-TNF-a)-HA, and slightly by anti-TNF-a treatment.Anti-TNF-a treatments appeared to decrease macrophage counts the most by days 4 and 7.(Anti-TNF-a)-HA treatment attenuated slightly by day 7, but was still significantly decreased compared to saline control*P<0.001, *P<0.05,compared with saline group

表1 巨噬細(xì)胞浸潤百分比Tab.1 Macrophage infiltration counts

2.4 IL-1β 濃度 選取細(xì)胞因子IL-1β作為整體炎癥微環(huán)境的標(biāo)志物的原因是它參與了炎癥反應(yīng)，并且與燒傷后1-3h活化TNF-α的水平有關(guān)[13-14]。正如圖5、表2所示，與生理鹽水比較，抗TNF-α處理第1天時，IL-1β濃度減少最明顯。非共軛抗TNF-α 早期效果明顯，但隨著時間推移其效果下降，第7天時，抗TNF-α處理和生理鹽水對照組相似。第4天時和第7天時，與生理鹽水比較，(抗TNF-α)-HΑ 處理后IL-1β濃度顯著下降(第4、7天時，P<0.05)。

圖5 燒傷組織中IL-1β的濃度生理鹽水和(抗TNF-α)-HΑ 處理組中, IL-1b 濃度在第1天時達(dá)到高峰，第4天時降低；但整個實驗階段，IL-1β濃度仍顯著低于生理鹽水處理組(*P<0.01第4天時，*P<0.05第7天時)?？筎NF-α 處理與生理鹽水和(抗TNF-α)-HΑ處理的效應(yīng)相反，第1天時能抑制 IL-1β濃度，但隨后在第4天和第7天時效應(yīng)減弱Fig.5 IL-1b concentration in extracted burn tissue IL-1b concen-tration peaks at day 1, and attenuates on day 4 in saline and(antiTNF-a)-HA treated wound sites, however, IL-1b levels are significantly lower than those in saline treated sites throughout the experimental period( *P<0.01 day 4, and *P<0.05 day 7).Anti-TNF-a treatment exhibited the opposite response to saline and(anti-TNF-a)-HA, inhibiting IL-1b day 1 compared to saline, but then steadily loses effect by days 4 and 7

表2 燒傷組織中IL-1β的濃度Tab.2 Concentration of IL-1β in burn tissues

3 討論

由于急性炎癥反應(yīng)與燒傷愈合過程有關(guān)，所以調(diào)節(jié)炎癥是改善燒傷預(yù)后的一個有效策略，但與對燒傷患者全身性抗炎癥藥物給藥有一定的風(fēng)險，最有效安全的方式是局部療法。抗體結(jié)合到生物聚合物會通過兩種途徑使效果增加：一是將抗體置于傷口中的時間延長，而不擴(kuò)散進(jìn)入血流中，二是阻斷抗體的Fc區(qū)，后者對于抑制 TNF-α來說非常重要[15-17]。

抗TNF-α與高分子量HΑ共軛后，抗TNF-α 的滯留時間會顯著延長。(抗TNF-α)-HΑ滯留時間的延長會顯著減少繼發(fā)性壞死，這是IL-1β濃度下降和巨噬細(xì)胞CD68減少的共同結(jié)果。(抗TNF-α)-HΑ比只運用抗TNF-α 或抗TNF-α+ HΑ更有效，只運用抗TNF-α 或抗TNF-α+ HΑ處理會使巨噬細(xì)胞CD68計數(shù)減少，但不能顯著減少無法存活的組織或IL-1β濃度,并且抗TNF-α和抗TNF-α + HΑ 處理組中無法存活的組織的量明顯多于(抗TNF-α)-HΑ 處理組。實驗結(jié)果表明，HΑ與抗TNF-α 共軛結(jié)合物與抗TNF-α、HΑ或抗TNF-α+HΑ混合處理相比，會減少無法存活的組織以及降低相關(guān)的炎癥指標(biāo)。

綜上所述，與直接運用非共軛抗體比較，抗TNF-α與高分子量 HΑ共軛結(jié)合應(yīng)用能更持久的局部調(diào)節(jié)損傷后炎癥反應(yīng)，這對臨床上燒傷治療有一定的指導(dǎo)意義。但是抗體與 HA 結(jié)合能抑制炎癥反應(yīng)和燒傷進(jìn)展的機(jī)制目前還不清楚，未來還需要進(jìn)一步的研究，還可以比較抗體和具有不同的生物學(xué)惰性或活性的多糖結(jié)合的效果。

[1] 張文強(qiáng)，黃岳山，支曉興.透明質(zhì)酸在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2008，12(23)：4515-4518.

[2] Sun LT, Bencherif SA, Gilbert TW,et al.Biological activities of cytokine-neutralizing hyaluronicacid-antibody conjugates[J].Wound Repair Regen,2010,6(18):4708-4715.

[3] 常朋飛， 馬印東， 賈軍，等.Ⅲ度燒傷創(chuàng)面修復(fù)的病理組織學(xué)特點及其臨床意義[J].山 東 大 學(xué) 學(xué) 報(醫(yī) 學(xué)版)，2013，51(7)：36-41.

[4] Akira S, Takeda K.Toll-like receptor signaling[M].Nat Rev Immunol 2004,4:499-511.

[5] 陳凱.嚴(yán)重?zé)齻摱景Y患者血清TNF-α 、IL-6、IL-10、PLA2的變化及器官功能損害狀況分析[J].重慶醫(yī)學(xué)，2014,43(8)：937-940.

[6] 江瓊，陳曉東，吳伯瑜，等.燒傷患者TNFα-、NO和ET水平的變化及相關(guān)性研究[J].中國醫(yī)師雜志，2006，8(11)：1563-1564.

[7] 潘宇紅，黃璇，丁羚濤，等.嚴(yán)重?zé)齻颊叽傺缀涂寡准?xì)胞因子的變化及其意義[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(19)：2510-2511.

[8] 梁建國，梁法湯，劉立民，等.燒傷后血清炎癥因子TNF-α值的變化與臨床意義[J].中國醫(yī)藥科學(xué)，2015，5(1):210-213.

[9] 崔媛，段潛，李艷輝.透明質(zhì)酸的研究進(jìn)展[J].長春理工大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2011，34(3)：101-105.

[10] Sun LT,Buchholz KS,Lotze MT,Washburn NR.Cytokine binding by polysaccharide-antibody conjugates[J].Mol Pharm 2010,7(5):1769-1777.

[11] Chang KC, Ma H, Liao WC,et al..The optimal time for early burn wound excision to reduce pro-inflammatory cytokine production in a murine burn injury model.Burns 2010;36:1059-1066.

[12] 呼和塔娜， 郭麗， 陳強(qiáng)，等.骨髓間質(zhì)干細(xì)胞對小鼠皮膚瘢痕形成的抑制作用觀察，吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2005，31(3)：334-336.

[13] 李伙新，胡鳳龍，曲心宇，等.燒傷患者血清內(nèi)毒素對外周血單個核細(xì)胞中4種細(xì)胞因子的影響[J].中國燒傷創(chuàng)瘍雜志，2014，9(3)：257-260.

[14] 李濟(jì)福，屈躍軍.烏司他丁對重度燒傷患者血清TNF-α、IL-6、IL-8 水平的影響[J].山東醫(yī)藥, 2010，50(30)：87-88.

[15] Daley JM,Brancato SK,Thomay AA,et al.The phenotype of murine wound macrophages[J].J Leukoc Biol 2010,87:59-67.

[16] 王世婷，矯強(qiáng)，徐芒華，等.TNF-α受體-IgG1 Fc段融合蛋白對感染性休克大鼠的治療作用[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2007,27(8)：909-912.

[17] Arend WP.The mode of action of cytokine inhibitors[J].J Rheumatol Suppl,2002,65:16-21.

(編校：吳茜)

StudyontheinhibitoryeffectofantiTNF-alphaandhyaluronicacidconjugateontheinflammatoryresponseinburn

HU Qiang, SUI Shuang, WANG Guo-dong, YAO Li-min
(The Burn and Plastic Surgery Department, Shandong Yantai the People’s Liberation Army 107 Hospital, Yantai 264000, China)

ObjectiveTo study the inhibitory effect of anti TNF- alpha and hyaluronic acid(HA) conjugate on the inflammatory response in burn.MethodsAnti TNF alpha antibody was prepared with HA conjugate, and compared the anti-inflammatory effects with HA, anti-TNF-α antibody and HΑ with anti-TNF-α unconjugated mixture.ResultsThe conjugate can reduce the survival of the tissues, reduced the CD68 of macrophages and decreased the IL-1β concentration.ConclusionThe results indicate that, compared with direct use of Non-conjugated antibody, the application of anti-TNF-α conjugated to high molecular weight HΑ can adjust the inflammatory response after injury more lasting.

TNF-α; wound healing; hyaluronic acid; burn wound; inflammation

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.10.009

胡強(qiáng)，男，博士，主治醫(yī)師，研究方向：燒傷整形，E-mail：3285315279@qq.com。

R644

A