劉敏杰　劉柱明

摘要：以雙色茉莉嫩枝莖段為外植體，采用不同的滅菌處理，不同的誘導和生根培養(yǎng)基，進行最佳培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)程序的研究。結果表明：滅菌處理以75%乙醇浸泡10s后，再在O.1%升汞溶液中浸泡3min為最佳；腋芽誘導的適宜培養(yǎng)基是MS+1.0mg/L+NAA 0.1mg/L；誘導生根的適宜培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 1.0mg/L+0.2%的活性炭；試管苗移栽基質以蛭石1份+珍珠巖1份+園土1份成活率最高，可達95%。

關鍵詞：雙色茉莉；滅菌方法；組織快繁；培養(yǎng)基

雙色茉莉又名鴛鴦茉莉，是茄科常綠矮灌木?；ǘ涑蹰_為藍紫色，漸變?yōu)檠┣嗌?，最后變?yōu)榘咨?，由于在同株上能同時見到藍紫色和白色的花，故名雙色茉莉。其花期長，花香濃郁，盆栽可點綴庭院和居室，片植色彩斑斕，具有廣闊的市場前景。目前雙色茉莉多采用扦插和壓條的方法繁殖，但該方法容易攜帶病毒，使植株生長不良，且繁殖系數(shù)小，成苗慢。利用組培技術可以優(yōu)質、快速地生產大量的雙色茉莉苗來滿足市場需求。

1 材料與方法

1.1 材料

2014年4月22號在信陽綠欣花市購買的2～3年生雙色茉莉盆栽。從生長旺盛、無病蟲害的新生嫩枝上剪取帶頂芽或腋芽的莖段，作為外植體培養(yǎng)材料。

1.2 方法

1.2.1 外植體的滅菌。剪去外植體莖段葉片，留葉柄基部，先用自來水沖洗3 min，再用洗潔精漂洗5 min，后用流水沖洗30 min。將清洗干凈的莖段放在燒杯中轉入超凈工作臺。然后用75%乙醇浸泡10、20s做表面消毒，無菌水沖洗4次，再移入0.1%的升汞溶液中，分別浸泡1、3、5min。后用無菌水浸泡2 min，并沖洗3次，用滅菌濾紙吸干水分備用。將滅菌好的外植體用解剖刀切成1cm大小的莖段，接種到初代培養(yǎng)基上，初代培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L。每個處理分別接種10瓶，每瓶接種3個外植體。定期觀察并記錄外植體污染情況和外植體成活率。

1.2.2 腋芽誘導。以滅菌效果最佳的處理進行外植體滅菌，切取帶腋芽的莖段1cm大小，接種到下列培養(yǎng)基中：A₁：MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L；A₂：MS+6-BA1.0mg/L+NAA 0.1mg/L；A₃：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA0.1mg/L；A₄：MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L；A₅：MS+6-BA 2.5mg/L+NAA 0.1mg/L；A₆：MS+6-BA3.0mg/L+NAA 0.1 mg/L。每種處理接種10瓶，每瓶接種3個外植體，定期觀察芽的誘導情況。

1.2.3 繼代培養(yǎng)。將誘導出的芽叢，轉接于MS+6-BA2.0mg/L+NAA 0.1 mg/L培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)。

1.2.4 生根培養(yǎng)。選取2cm以上，有3片完整葉片的無根苗轉接到下列培養(yǎng)基中培養(yǎng)生根：B₁：1/2 Ms；B₂：1/2MS+NAA 0.5mg/L；B₃：1/2MS+NAA 1.0mg/L；B₄：1/2MS+NAA 2.0mg/L；B₅：1/2 MS+NAA 3.0mg/L，并在B₃、B₄、B₅培養(yǎng)基中各添加濃度為0.2%的活性炭。每種處理接種10瓶，每瓶接種3株，20d后，統(tǒng)計生根率。

以上MS培養(yǎng)基中蔗糖含量為30g/L，1/2 MS培養(yǎng)基中蔗糖含量為20g/L，瓊脂含量均為8g/L，pH值5.8。培養(yǎng)溫度：25±2℃，光照強度：1500～2000Lx，光照時間：12～14h/d。

1.3 馴化移栽

當試管苗長至3～4cm高，根長1cm以上時，打開瓶口煉苗5～7d。將經過鍛煉的試管苗輕輕取出，用自來水沖洗掉根部的培養(yǎng)基，分別栽植于下列基質中：C₁：蛭石；C₂：珍珠巖；C₃：細沙；C₄：園土；C₅：蛭石1份+珍珠巖1份+園土1份，蓋上塑料薄膜，溫度控制在25%左右，保證80%以上的相對濕度。30d后，統(tǒng)計移栽苗成活率。

2 結果與分析

2.1 不同滅菌方法的滅菌效果

20d后的觀察顯示（表1），延長乙醇浸泡時間，對降低外植體污染率效果不明顯，而增加升汞浸泡時間，明顯減少了外植體的污染率。但是過長時間的升汞接觸外植體，發(fā)現(xiàn)試驗外植體皺縮，失去萌動力，后期褐化率也明顯增加。這可能因汞離子具有很強的殺傷力和穿透力，容易殺死或損傷植物細胞，造成外植體成活率低，因此在控制污染發(fā)生的過程中，用升汞做滅菌處理的時間不宜過長，控制在3min左右為宜。

2.2 不同培養(yǎng)基激素組合對腋芽誘導的影響

外植體培養(yǎng)5～7天，莖段基部開始膨大，產生少量愈傷組織，腋芽也開始萌動。6種培養(yǎng)基均能誘導腋芽萌動，但腋芽生長情況有所差異（表2），在A₁、A₂、A₃培養(yǎng)基上腋芽萌動時間早，但數(shù)量少，苗細弱。在A₄：MS+1.0mg/L+NAA 0.1 mg/L培養(yǎng)基上，芽萌動后直接分化叢生芽，苗健壯。A5、A6形成的叢芽時間短且數(shù)量多，但芽畸形、變異?？梢娕囵B(yǎng)基的成分直接影響外植體的萌動和分化。培養(yǎng)基的濃度不適合會導致新生芽矮小，還可能出現(xiàn)玻璃狀苗。

2.3 生根培養(yǎng)

在培養(yǎng)基中加入活性炭可以顯著促進生根量和根的長勢，這可能與活性炭對有害酚類物質的吸附有關，同時活性炭所造成的暗環(huán)境也可能有利于根的發(fā)生和發(fā)育。從表3可以看出，B₁、B₂的根徒長且比較細弱，植株難以在移栽時正常生長，B₃、B₄、B₅的生根率都達到100%，且生根時間短，根數(shù)多。但以B₃：1/2MS+NAA1.0mg/L+0.2%的活性炭，生根效果最好，根粗壯且有根毛，最適合移栽。

2.4 生根苗馴化移栽

從表4可以看出，雙色茉莉試管苗在所試5種栽培基質上，移栽成活率都很高。其中基質D₅的幼苗生長健壯，葉色嫩綠，成活率高達95%。

3 小結

（1）在植物組織培養(yǎng)過程中，要盡量降低污染率，同時還要盡可能減少消毒劑對外植體的傷害。雙色茉莉外植體滅菌以75%的醇消毒10s，再配合0.1%的升汞溶液浸泡3min效果最好，可達80%。

（2）細胞分裂素6-BA能克服頂端優(yōu)勢，促進側枝的萌發(fā)和生長，因而，嫩芽的繁殖主要是細胞分裂素影響的結果。生長素NAA最明顯的作用是促進生長，但其促進作用因濃度而異，較低濃度促進生長，較高濃度抑制生長。外源激素6-BA和NAA的不同濃度對芽的誘導和生長影響十分顯著。適宜芽誘導的初代培養(yǎng)基為MS+1.0mg/L+NAA 0.1mg/L；幼苗的最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 1.0mg/L+0.2%的活性炭。試管苗移栽基質以蛭石1份+珍珠巖1份+園土1份成活率最高，可達95%。

（3）通過組織培養(yǎng)可大大提高雙色茉莉的繁殖速率，且生長健壯。

（收稿：2016-03-10）