常紅星，竇　霞

（1.甘肅省武威市第二人民醫(yī)院，甘肅　武威　733000；2.甘肅中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，甘肅　蘭州　730000）

甘肅紋黨參指紋圖譜研究*

常紅星1，竇霞2

（1.甘肅省武威市第二人民醫(yī)院，甘肅武威733000；2.甘肅中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，甘肅蘭州730000）

研究紋黨參的指紋圖譜。應用高效液相色譜法。通過指紋圖譜的分析研究，可以作為黨參質(zhì)量控制的方法。

黨參；紋黨參；指紋圖譜

黨參為桔?？浦参顲odonopsis pilosula（Franch）Nann.f。具有補中益氣，健脾益肺的功能，用于脾肺虛弱，氣短心悸，食少便溏，虛喘咳嗽，內(nèi)熱消渴［1］。黨參的商品有西黨、東黨、潞黨、條黨及白條黨（紋黨）。

指紋圖譜技術(shù)自20世紀70年代出現(xiàn)發(fā)展至今，已經(jīng)得到了突飛猛進的發(fā)展，目前由最初的研究階段進入到實際應用階段。并且，這項技術(shù)從總體上對中藥的質(zhì)量控制起到了推動作用。中藥指紋圖譜由于其能夠從整體上來表征中藥的內(nèi)在特征，目前被國際上公認為控制天然藥物質(zhì)量的有效手段之一［2］，為真正實現(xiàn)中藥走向世界提供了極為有利的質(zhì)量保證。

我們用高效液相色譜法對甘肅產(chǎn)紋黨參進行了指紋圖譜研究該研究結(jié)果對紋黨參道地性研究也具有重要意義。

1　儀器與試藥

1.1實驗儀器

LC-20AD高效液相色譜儀 （日本島津公司）：SPD-M20D二極管陣列檢測器；BP210S電子分析天平（Sarlorius公司）；SK7200H超聲波清洗器（上?？茖С晝x器有限公司）；IECMicromax離心機 （美國ThermoElectron公司）。

1.2實驗材料

黨參，產(chǎn)于甘肅渭源縣，由蘭州市冠蘭中藥飲片廠提供，經(jīng)楊錫倉主任中藥師鑒定為來源于桔?？频狞h參；黨參炔苷對照品：（批號：110796-200514，購買自中國生物制品藥品檢定所）。乙腈（色譜純），水（超純水），其余試劑均為分析純。

2　色譜條件及檢測波長的選擇

2.1色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑 （色譜柱：Thermo Hypersil Gold-C18：150×4.6mm，5μm）；流速為1mL？min-1；以乙腈為流動相A，水為流動相B，洗脫程序見表1：

表1　色譜條件

2.2檢測波長選擇

黨參中主要成分黨參炔苷最大吸收波長為268nm。［3］為全面反映樣品中的主要成分，經(jīng)218 nm、230nm、245nm、275nm、300nm五個波長測定指紋圖譜的比較分析（如圖1～6所示），由于在268nm波長的指紋圖譜中，較好地體現(xiàn)各主要峰，且各峰分離度好，基線較平穩(wěn)，故確定268nm波長下為黨參指紋圖譜的檢測波長。

圖1　218nm波長所測指紋圖譜

圖2　230nm波長所測指紋圖譜

圖3　245nm波長所測指紋圖譜

圖4　268nm波長所測指紋圖譜

圖5　285nm波長所測指紋圖譜

圖6　300nm波長所測指紋圖譜

2.3指紋圖譜系統(tǒng)適應性及延長時間檢測，如圖7～10所示。

圖7　黨參炔苷參照物指紋圖譜

圖9　空白溶劑指紋圖譜

圖10　延長時間120分鐘指紋圖譜

2.3.1參照物溶液的制備

取黨參炔苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含50μg的對照品溶液，即得［4］。

2.3.2供試品溶液的制備

取紋黨參約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，超聲30min，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，即得。（因含量測定研究中考察過本品供試品制備方法，故本研究中不再重復。）

2.3.3精密度試驗

取紋黨參，按上述供試品溶液的制備方法制備供試品，連續(xù)進樣6次測定。結(jié)果表明，各供試品溶液中共有峰的保留時間及各主要峰 （占總峰面積5%以上）的峰面積基本保持一致（RSD＜3%），以第1次進樣所得指紋圖譜做為對照圖譜計算相似度，結(jié)果相似度均不小于0.95，符合指紋圖譜的相關(guān)技術(shù)要求。表明該方法精密度良好。

2.3.4穩(wěn)定性試驗考察

取紋黨參，按正文中供試品溶液制備方法制備供試品溶液，每隔3h測定一次指紋圖譜，共測6次，以0h所得指紋圖譜為對照，計算相似度，各指紋圖譜相似度結(jié)果均不小于0.99，符合指紋圖譜相關(guān)技術(shù)要求（應不小于0.95）。表明供試品溶液15h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5重復性試驗

取紋黨參，按正文中供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，同法制備供試品溶液6份，依法測定，計算相似度，相似度結(jié)果均不小于0.99，符合指紋圖譜的技術(shù)要求（不小于0.95），說明本方法重復性良好。

2.3.610批紋黨參的測定及對照指紋圖譜的獲得

取10批紋黨參樣品，按正文中供試品溶液制備方法分別制備供試品溶液，依法測定，計算相似度，用相似度軟件以這10批樣品指紋圖譜為基礎獲得“共有模式”作為黨參對照指紋圖譜，如圖11～12所。

圖11　10批紋黨參指紋圖譜共有模式

圖12　10批紋黨參指紋圖譜共有模式

根據(jù)10批紋黨參指紋圖譜與對照指紋圖譜計算相似度，根據(jù)多批次數(shù)據(jù)積累，確定紋黨參指紋圖譜與對照指紋圖譜經(jīng)相似度軟件計算，相似度應不低于0.80。

3　討論

本試驗過程中，為全面反映紋黨參的指紋特征，分別選用不同波長檢測樣品，經(jīng)過在218nm、230 nm、245nm、275nm、300nm五個波長所測定指紋圖譜的比較，發(fā)現(xiàn)218nm及230nm基線較差，300nm波長下峰較少，而且峰面積非常小，245nm及275nm基線較平穩(wěn)，峰較多，但是相比較，268nm波長下的峰面積較大，能夠較好地體現(xiàn)樣品各主要峰，且各峰分離度好，基線較平穩(wěn)，故最終確定268nm波長為黨參指紋圖譜的檢測波長。

通過以上各項試驗，指紋圖譜的分析，作為紋黨參主要鑒別手段，可以為紋黨參質(zhì)量控制提供依據(jù)［5］。

［1］ 封士蘭，胡芳弟，劉欣，等.HPLC研究甘肅產(chǎn)白條黨參指紋圖譜［J］.中成藥，2005（07）745-748.

［2］ 邵建強.中藥指紋圖譜的研究進展［J］.中草藥，2009（06）994-997.

［3］ 竇霞，甘肅黨參超微粉的制備及其質(zhì)量標準研究［D］.南京：中醫(yī)藥大學，2014（學位論文）.

［4］ 孫永成，竇霞，尚強，等，桂枝茯苓膠囊（精制）多成分指紋圖譜的研究［J］.世界科學技術(shù)（中醫(yī)藥現(xiàn)代化），2010，12 （2）：294-297.

［5］ 武果桃，賀東昌，張李俊，劉紅霞，任杰，孟冬霞.中藥黨參的HPLC指紋圖譜研究［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2009（05）54-56.

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2014年度甘肅中醫(yī)學院中青年科研基金（ZQ2014-31）。