魏繼海，趙永華，王　燕，岳蒙蒙，趙金良

(上海海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201306)

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催產(chǎn)激素對尼羅羅非魚人工繁殖效果的研究

魏繼海，趙永華，王燕，岳蒙蒙，趙金良*

(上海海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201306)

根據(jù)催產(chǎn)激素注射后前期血清類固醇激素的水平變化，篩選了尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)最佳催產(chǎn)激素組合。為了進(jìn)一步驗(yàn)證該催產(chǎn)激素組合的生產(chǎn)效果，在尼羅羅非魚繁殖生產(chǎn)期間進(jìn)行人工催產(chǎn)試驗(yàn)，觀察催產(chǎn)后144h內(nèi)實(shí)際含卵雌魚比例與催產(chǎn)效應(yīng)時(shí)間，并從卵子形態(tài)變化方面觀察催產(chǎn)效應(yīng)。結(jié)果顯示：水溫21～29℃時(shí)，催產(chǎn)試驗(yàn)組平均獲產(chǎn)率為57.5%，對照組平均獲產(chǎn)率為27.5%，試驗(yàn)組的平均獲產(chǎn)率顯著高于對照組(P<0.05)；試驗(yàn)組含卵時(shí)間集中在72h內(nèi)，對照組含卵時(shí)間比較分散；催產(chǎn)后72h，試驗(yàn)組50%雌魚卵子發(fā)育達(dá)到成熟期，對照組僅30%。試驗(yàn)結(jié)果為尼羅羅非魚全人工繁殖生產(chǎn)提供了參考依據(jù)。

尼羅羅非魚；人工催產(chǎn)；催產(chǎn)激素；獲產(chǎn)率

尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)原產(chǎn)于非洲，具有生長快、養(yǎng)殖周期短、群體繁殖能力高、適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)，目前已成為我國重要的淡水養(yǎng)殖魚類之一[1]。尼羅羅非魚是一年多次產(chǎn)卵型魚類，性腺發(fā)育非同步性，自然繁殖容易[2]，但人工繁殖比較困難，主要是很難獲得成熟卵，這也影響了羅非魚相關(guān)研究工作的深入開展[3-4]。目前，國內(nèi)外對羅非魚催產(chǎn)激素種類研究較少[5-7]，李建平等[8]對奧利亞羅非魚(O.aureus)進(jìn)行了人工繁殖試驗(yàn)，催產(chǎn)激素為DOM和LRH-A2，雌魚催產(chǎn)劑量為4mg/kgDOM+6ug/kgLRH-A2時(shí)，獲產(chǎn)率為62.5%。李瑞偉等[9]對吉富羅非魚(O.niloticus)進(jìn)行了人工催產(chǎn)試驗(yàn)，認(rèn)為3 000IU/kgHCG+15ug/kgLRH-A2+9mg/kgDOM的催產(chǎn)效果最佳，獲產(chǎn)率達(dá)66%左右。Fernandes等[10]比較了幾種單一催產(chǎn)激素(PE、HCG、GnRH)對尼羅羅非魚卵母細(xì)胞成熟與排卵效果，發(fā)現(xiàn)HCG誘導(dǎo)效果最佳，劑量為1 000～5 000IU/kg時(shí)，均能產(chǎn)生有效誘導(dǎo)。在此基礎(chǔ)上，本試驗(yàn)室根據(jù)催產(chǎn)后血清類固醇激素(GnRH、GTH、E2、P)水平變化特征，篩選了尼羅羅非魚的最佳催產(chǎn)激素組合及劑量[11]，并在尼羅羅非魚繁殖生產(chǎn)期開展催產(chǎn)激素注射試驗(yàn)，評估混合催產(chǎn)激素對尼羅羅非魚繁殖產(chǎn)卵的影響，驗(yàn)證其實(shí)際生產(chǎn)效果，以期為尼羅羅非魚人工繁殖技術(shù)與應(yīng)用積累資料。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

尼羅羅非魚親魚取自上海海洋大學(xué)羅非魚種質(zhì)資源試驗(yàn)站，1齡，體重為140～300g。催產(chǎn)時(shí)間為2015年5月30日—7月19日，每隔15天左右進(jìn)行一次催產(chǎn)試驗(yàn)，共進(jìn)行4次。催產(chǎn)前，通過擠卵、精子觀察法，挑選性腺發(fā)育較好的雌、雄魚各20尾，按雌雄比1：1分別放養(yǎng)在兩個(gè)2m×2m×1.5m網(wǎng)箱中，每個(gè)網(wǎng)箱10組親魚。試驗(yàn)期間水溫為21～29℃，pH為6.3～7.6，日投餌量為魚體重的5%左右。促黃體素釋放激素A2(LRH-A2)、絨毛膜促性腺激素(HCG)、地歐酮(DOM)均購自于寧波第二激素廠。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1獲產(chǎn)率試驗(yàn)

試驗(yàn)分成試驗(yàn)組和對照組，采用一次注射法，胸鰭基部注射；試驗(yàn)組注射催產(chǎn)激素劑量為9mg/kgDOM+15ug/kgLRH-A2+3 000IU/kgHCG，每尾雌魚的注射量控制在1mL左右，雄魚不注射；對照組注射相同劑量的生理鹽水。催產(chǎn)后72h第一次檢測含卵雌魚個(gè)數(shù)，之后每隔24h檢測1次，144h為最后一次檢測。

1.2.2卵子形態(tài)發(fā)育觀察

7月20日，挑選雌魚10尾進(jìn)行催產(chǎn)，另挑選10尾作為對照組注射相同劑量的生理鹽水，試驗(yàn)組和對照組均無雄魚。催產(chǎn)前(0h)及催產(chǎn)后72h，每隔24 小時(shí)用人工方法擠出少量卵子保存于0.7%生理鹽水中，用OLYMPUS-SZX7解剖鏡觀察拍照。

2　結(jié)果與分析

2.1催產(chǎn)效果

從5月30日到7月19日進(jìn)行的4個(gè)批次催產(chǎn)結(jié)果見表1。試驗(yàn)組4次催產(chǎn)后的雌魚獲產(chǎn)率分別為60%、60%、60%、50%，對照組獲產(chǎn)率為30%、20%、30%、30%。試驗(yàn)組平均獲產(chǎn)率顯著高于對照組(P<0.05)。試驗(yàn)組產(chǎn)卵時(shí)間多在72h內(nèi)完成，對照組產(chǎn)卵時(shí)間、范圍較分散。

表1　激素催產(chǎn)后尼羅羅非魚雌魚含卵尾數(shù)

2.2卵子的質(zhì)量鑒別

催產(chǎn)前、后通過人工擠卵獲得的卵子形態(tài)見圖1。未成熟卵子表面有少量血絲，卵黃較為明顯、充滿，長徑為1.7～2.4mm，短徑為0.5～1.8mm；成熟卵子呈鴨梨形、黃褐色，卵黃顆粒大而飽滿，長徑為1.8～2.7mm，短徑為0.6～1.8mm；過熟卵子呈橢圓形，或不規(guī)則，卵黃顆粒液化，卵徑減小，動(dòng)、植物極兩端變白，表層布滿黑色斑點(diǎn)，輕碰卵子即破裂。

催產(chǎn)后各時(shí)間點(diǎn)成熟雌魚情況見表2。催產(chǎn)后72h時(shí)，試驗(yàn)組有4尾雌魚卵子發(fā)育成熟或過熟，對照組有2尾雌魚成熟或過熟。催產(chǎn)后96h，對照組有1尾雌魚成熟。催產(chǎn)后120h，試驗(yàn)組有1尾雌魚成熟；144h，試驗(yàn)組、對照組均無成熟期雌魚。

注：①未成熟卵，②成熟卵，③過熟卵。

Notes：①immatureeggs，②matureeggs，③overripeeggs.

表2　催產(chǎn)后各時(shí)間點(diǎn)尼羅羅非魚成熟發(fā)育

3　討論

早期開展的魚類人工繁殖研究試驗(yàn)中，多數(shù)學(xué)者使用單一人工催產(chǎn)激素進(jìn)行人工催產(chǎn)試驗(yàn)研究，如鯉魚垂體[12]、HCG[13]、GnRH以及GnRHa[14]。由于羅非魚性腺發(fā)育的特殊性，對人工催產(chǎn)激素具有不敏感性，單一催產(chǎn)激素、低劑量均對羅非魚人工繁殖未能產(chǎn)生明顯效果。本研究利用前期篩選出的催產(chǎn)激素種類及劑量9mg/kgDOM+15ug/kgLRH-A2+3 000IU/kgHCG，在實(shí)際生產(chǎn)中對尼羅羅非魚進(jìn)行了催產(chǎn)試驗(yàn)，試驗(yàn)組平均獲產(chǎn)率達(dá)57.5%，對照組平均獲產(chǎn)率27.5%；試驗(yàn)組含卵時(shí)間集中在72h內(nèi)完成，對照組含卵時(shí)間無明顯集中時(shí)間，說明DOM+LRH-A2+HCG激素組合對尼羅羅非魚產(chǎn)卵產(chǎn)生了較明顯的影響，能有效提高尼羅羅非魚獲產(chǎn)率。尼羅羅非魚屬于一年多次產(chǎn)卵型魚類，性腺發(fā)育不同步，催產(chǎn)效率明顯低于同步產(chǎn)卵型魚類，而且效應(yīng)時(shí)間也大于同步產(chǎn)卵型魚類，如“四大家魚”等獲產(chǎn)率都能達(dá)到90%以上，效應(yīng)時(shí)間一般在10～28h之間。本試驗(yàn)中，催產(chǎn)組的實(shí)際獲產(chǎn)率也低于之前的奧利亞羅非魚、吉富羅非魚催產(chǎn)試驗(yàn)結(jié)果[8-9]，奧利亞羅非魚催產(chǎn)親本體重為150～750g，實(shí)際年齡組為1～3齡，吉富羅非魚人工催產(chǎn)試驗(yàn)中水溫條件達(dá)27～30℃，因此，羅非魚人工催產(chǎn)時(shí)間效率還受種間差異、親魚年齡、性腺發(fā)育、試驗(yàn)水溫等因素的共同影響。

催產(chǎn)前的卵子表面有少量血絲，卵黃幾乎充滿細(xì)胞質(zhì)，屬于未成熟期。催產(chǎn)后，卵子呈鴨梨狀，卵黃充滿整個(gè)細(xì)胞質(zhì)，卵徑達(dá)到最大，為卵細(xì)胞的成熟期[15]。隨時(shí)間推移，部分卵細(xì)胞動(dòng)、植物極開始變白，卵徑減小，處于過熟期；之后，卵子呈不規(guī)則形狀、白色，卵黃開始液化，表層出現(xiàn)黑色斑點(diǎn)。本試驗(yàn)中，催產(chǎn)后72h，試驗(yàn)組40%的雌魚達(dá)到或超過成熟期，對照組20%雌魚達(dá)到或超過成熟期；催產(chǎn)后96～120h，試驗(yàn)組、對照組各有10%雌魚發(fā)育成熟，這與實(shí)際催產(chǎn)試驗(yàn)中雌魚含卵比例與含卵時(shí)間的結(jié)果基本一致，從卵子形態(tài)發(fā)育角度驗(yàn)證了催產(chǎn)試驗(yàn)效果。

由于尼羅羅非魚個(gè)體性腺發(fā)育不同步性，催產(chǎn)前，應(yīng)對雌魚進(jìn)行嚴(yán)格挑選，這也是催產(chǎn)試驗(yàn)的關(guān)鍵步驟。催產(chǎn)過程中，要輕拿輕放，防止親魚受強(qiáng)烈刺激后產(chǎn)生較大應(yīng)激反應(yīng)，影響催產(chǎn)效果。

[1]孫政才，張?zhí)伊?羅非魚技術(shù)100問[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2009：1-7.

[2]劉筠，劉國安，陳淑群，等.尼羅羅非魚性腺發(fā)育的研究[J].水生生物學(xué)集刊，1983，8(1)：17-30.

[3]ChourroutD，ItskovichJ.Threemanipulationspermittedbyartificialinseminationintilapia：induceddiploidgynogenesis，productionofalltriploidpopulationsandintergenerichybridization[C]//FishelsonL，YaronZ.(eds)Proceedingsoftheinternationalsymposiumontilapiainaquaculture.Israel：TelAvivUniversity，1983：246-255.

[4]MairGC，ScottAG，BeardmoreJA，etal.AtechniqueforinductionofdiploidgynogenesisinOreochrmisniloticusbysuppressionofthefirstmitoticdivision[C]//TiewsK.ProceedingoftheWorldSymposiumonSelection，Hybridization，andGeneticEngineeringinAquaculture.Berlin:HeenemannnVerlagsgesellschaftmbH，1987:289- 300.

[5]WeberGM，PowellJFF，ParkM，etal.Evidencethatgonadotropin-releasinghormone(GnRH)functionsasaprolactin-releasingfactorinateleostfish(Oreochromis mossambicus)andprimarystructuresforthreenativeGnRHmolecules[J].Endocrinol，1997，155：121-132.

[6]BhujelRC.AreviewofstrategiesforthemanagementofNiletilapia(Oreochromis niloticus)broodfishinseedproductionsystems，especiallyhapa-basedsystems[J].Aquaculture，2000，181：37-59.

[7]El-GamalAEE，El-GreisyZA.Effectofphotoperiod，temperatureandHCGonovarianrecrudescenceandabilityofspawninginNiletilapia，Oreochromis niloticus (TeleosteiCichlidae)[J].EgyptJAquatRes，2005，31：419-431.

[8]李建林，劉麗平.奧利亞羅非魚全人工繁殖試驗(yàn)[J].水產(chǎn)養(yǎng)殖，2006，27(5)：26-27.

[9]李瑞偉，彭俊，王輝，等.吉富羅非魚工催產(chǎn)技術(shù)研究[J].海洋與漁業(yè)，2011，9(2)：33-34.

[10]FernandesAFA，AlvarengaER，OliveraDAA，etal.ProductionofoocytesofNiletilapia(Oreochromis niloticus)forinVitrofertilizationviahormonaltreatments[J].ReproductioninDomesticAnimals，2013，48(10)：1049-1055.

[11]魏繼海，趙金良，ThammaratsuntornJeerawat，等.催產(chǎn)激素對雌性尼羅羅非魚血清類固醇激素水平變化的影響[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2016，47(1):128-133.

[12]ArantesFP，SantosHB，RizzoE，etal.Influenceofwatertemperatureoninducedreproductionbyhypophysation，sexsteroidsconcentrationsandfinaloocytematurationofthecurimata-pacuProchilodus argenteus(Pisces：Prochilodontidae)[J].GenCompEndocrinol，2011，172：400-408.

[13]ZoharY，MylonasCC.Endocrinemanipulationsofspawninginculturedfish：fromhormonestogenes[J].Aquaculture，2001，197：99-136.

[14]RosenfeldH，MylonasCC，BridgesCR，etal.GnRHa-mediatedstimulationofthereproductiveendocrineaxisincaptiveAtlanticbluefintuna，Thunnus thynnus[J].GenCompEndocrinol，2012，77：1709-1716.

[15]羅明坤，趙金良，趙巖，等.尼羅羅非魚♀×薩羅羅非魚♂人工雜交中卵子、精子形態(tài)觀察[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，3：127-131.

Artificial propagation of Oreochromis niloticus by hormone combination injection

WEI Jihai，ZHAO Yonghua，WANG Yan，YUE Mengmeng，ZHAO Jinliang*

(LaboratoryofFreshwaterFisheriesGermplasmResources，MinistryofAgriculture，ShanghaiOceanUniversity，Shanghai201306，China)

InordertoverifythepracticaleffectonartificialpropagationofOreochromis niloticusbyhormonecombinationinjection，thespawningrateandoxytocineffecttimewereinvestigatedwithin144hafterhormonesinjectioninbreedingseason.Meantime，morphologyoftheeggssqueezedfromtheinjectedfemaleswasobserved.Resultsshowed，underwatertemperatureof21～29℃，thespawningratewas57.5%intheexperimentalgroup，andmostlyhappenedwithin72hafterinjection，whilethespawningratewas27.5%inthecontrolwithairregularspawningtime.At72hafterinjectionofhormones，50%femaleintheexperimentalgroupreachedmaturity，incomparisonwith30%incontrolgroup.Theseresultsshowedthathormonescombinationinjectioncouldeffectivelyimprovethespawningrate，whichprovidedsomebaseforartificialpropagationofNiletilapia.

Oreochromis niloticus；artificialpropagation；oxytocin；spawningrate

2015-11-25

國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(xiàng)資金(CARS-49)；水產(chǎn)動(dòng)物遺傳育種中心上海市協(xié)同創(chuàng)新中心(ZF1206).

魏繼海(1990-)，男，碩士研究生，從事水產(chǎn)動(dòng)物遺傳育種與繁殖研究.E-mail：962000203@qq.com

趙金良(1969-)，男，教授，從事水產(chǎn)動(dòng)物遺傳育種與繁殖研究.E-mail：jlzhao@shou.edu.cn

S917.4

A

1006-5601(2016)01-0036-05

魏繼海，趙永華，王燕，等.催產(chǎn)激素對尼羅羅非魚人工繁殖效果的研究[J].漁業(yè)研究，2016，38(1)：36-40.