黃春青，曹桂紅，萇　玲

(貴州省食品藥品檢驗所，貴州 貴陽　550004)

?

HPLC法測定復(fù)方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復(fù)合制劑中姜黃素含量

黃春青，曹桂紅，萇玲

(貴州省食品藥品檢驗所，貴州 貴陽550004)

建立復(fù)方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復(fù)合制劑中姜黃素的含量測定方法。采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以乙腈-0.4%磷酸溶液(45∶55)為流動相，流速1.0mL/min，檢測波長為430nm，柱溫25℃。姜黃素在3.7～74.6ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，方法回收率為98.23%(RSD=1.39%)。建立的方法簡便、快速、準(zhǔn)確及可靠，并可用于制劑中姜黃素的定量測定。

姜黃素；復(fù)方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復(fù)合制劑；HPLC法；含量測定

0　引言

復(fù)方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復(fù)合制劑是由復(fù)方珊瑚姜溶液和尿素咪康唑軟膏組成的外用復(fù)方制劑，主要用于治療手足癬、甲癬等。其中復(fù)方珊瑚姜溶液處方是由復(fù)方珊瑚姜汀、冰片、水楊酸及輔料組成，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只對水楊酸進行了含量測定，我們曾對處方中冰片及復(fù)方珊瑚姜汀的質(zhì)量控制進行了研究，并對原標(biāo)準(zhǔn)中水楊酸的含量測定方法進行了改進，該試驗著重對復(fù)方珊瑚姜汀含量控制進行研究。

復(fù)方珊瑚姜汀是由珊瑚姜和姜黃兩味藥材提取制得，珊瑚姜和姜黃兩味藥材均為姜科姜屬植物，其主要有效成分均為姜黃素[1-7]，姜黃素(curcumin)最早是在1870年從姜黃中首次分離出來的一種低相對分子質(zhì)量多酚類化合物[8，9]，其分子式為C21H20O6，有烯醇式和酮式2種形式，分子量368.37，熔點183℃[9]。姜黃素具有抗炎、抗氧化、調(diào)脂、抗病毒、抗感染、抗腫瘤、抗凝、抗肝纖維化、抗動脈粥樣硬化等廣泛的藥理活性，且毒性低、不良反應(yīng)小[8-15]。為確保產(chǎn)品質(zhì)量，保證臨床用藥安全有效，通過實驗建立了HPLC法測定復(fù)方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復(fù)合制劑中姜黃素的含量，結(jié)果表明本法操作簡便，快速，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確。

1　儀器與試劑

儀器：Ultimate3000和Agilent1260高效液相色譜儀；XP205DK電子天平；UV-2550紫外可見分光光度計；Agilent zorbax.sb-C18(4.6×150mm)；依利特Hypersil ods(4.6×200mm)；Thermo C18(4.6×250mm)。

試劑與藥品：姜黃素對照品(110823-201004，中國食品藥品檢定研究院，98.8%)；所有樣品均由貴州金橋藥業(yè)股份有限公司提供，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件的選擇

采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以乙腈-0.4%磷酸溶液(45∶55)為流動相，流速1.0mL/min，檢測波長為430nm，柱溫25℃，測定效果良好。根據(jù)紫外吸收光譜和查閱相關(guān)文獻，選定430nm為檢測波長。

2.2專屬性試驗

采用廠家提供的陰性樣品，按上述色譜條件進行檢測，陰性樣品未見吸收峰；測定樣品中姜黃素峰的保留時間，與對照溶液中姜黃素的保留時間一致。

2.3系統(tǒng)適用性試驗

按上述色譜條件分別測定制劑中姜黃素的含量，姜黃素峰與其它相鄰峰的分離度達到要求，理論板數(shù)按姜黃素峰計不低于3 000。

圖1　復(fù)方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復(fù)合制劑中姜黃素的液相色譜圖Fig.1　compound coral miconazole ginger solution urea ointment compound preparation of curcumin in HPLC

2.4線性

對照品溶液的制備：精密稱取姜黃素對照品11.79mg，置25mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL置50mL容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取該溶液10mL置25mL容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，作為對照品溶液。

分別吸取上述對照品溶液1μL、4μL、7μL、10μL、13μL和20μL注入高效液相色譜儀中，按姜黃素含量測定的色譜條件測定峰面積，記錄色譜圖。并以對照品的量(g)為橫坐標(biāo)，峰面積的值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程如下：A=105.02C-0.035 3，r=0.999 9。試驗結(jié)果表明，姜黃素在3.7～74.6ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗

精密吸取線性對照品溶液10μL注入高效液相色譜儀，重復(fù)進樣6次，記錄色譜圖，結(jié)果RSD為0.55%，表明精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗

樣品溶液的制備：精密量取本品2mL，置50mL量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

在室溫下每0、1、2、4、6、8、10和12h各精密吸取樣品溶液10μL注入高效液相色譜儀中，按姜黃素含量測定的色譜條件試驗方法測定峰面積，計算含量，結(jié)果RSD為0.99%，表明本品在12h之內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7重復(fù)性試驗

按穩(wěn)定性樣品制備方法同法平行制備6份樣品。各精密吸取樣品溶液10μL注入高效液相色譜儀中，按姜黃素含量測定的色譜條件試驗方法測定峰面積，結(jié)果RSD為0.52%，表明該方法重復(fù)性良好，滿足含量測定的要求。

2.8回收率試驗

對照品儲備液：精密稱取姜黃素對照品11.79mg，置25mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL置200mL容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。

樣品溶液的制備：精密量取本品1mL(含量為0.118 3mg/mL)，置50mL量瓶中，高濃度精密加入對照品儲備溶液12mL、中濃度精密加入對照品貯備溶液10mL、低濃度精密加入對照品貯備溶液8mL，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。高、中、低3個濃度樣品，各平行制備3份，共9份。

表1　回收率試驗結(jié)果(n=3)Tab.1　Recovery test results (n=3)

2.9耐用性試驗

用重復(fù)性樣品1和2同時使用安捷倫與戴安兩臺儀器，并使用戴安色譜柱、安捷倫色譜柱和依利特色譜柱進行耐用性試驗，比較了不同柱溫，不同流速，不同的流動相比列對測定結(jié)果的影響，結(jié)果表明：該方法耐用性試驗結(jié)果良好。具體數(shù)據(jù)如下：

表2　耐用性試驗結(jié)果Tab.2　Durability test results

2.10樣品含量測定

按樣品處理方法和色譜條件進行13個批次的樣品含量測定，其中120301、120303和120304三個批號的第二次數(shù)據(jù)為樣品超過有效期5個月后的測定數(shù)據(jù)，作為限度制定的一個參考，結(jié)果如下：

表3　樣品含量測定結(jié)果Tab.3　The sample content determination results

2.11檢出限的測定

精密稱取姜黃素對照品適量，配成不同濃度樣品按上述色譜條件進行測定，以3倍信噪比(S/N)計算，得到姜黃素的檢出限為1.026ng。

2.12定量限的測定

精密稱取姜黃素對照品適量，配成不同濃度樣品按上述色譜條件進行測定，以10倍信噪比(S/N)計算，得到姜黃素的檢出限為3.078ng。

3　討論

1)根據(jù)各批樣品姜黃素含量測定的結(jié)果，通過與生產(chǎn)企業(yè)進行溝通，為確保本品質(zhì)量及考慮生產(chǎn)企業(yè)的成品合格率，還結(jié)合企業(yè)的長期穩(wěn)定性試驗數(shù)據(jù)及本制劑特點，擬定限度為本品含復(fù)方珊瑚姜酊以姜黃素(C21H20O6)計每1mL不得少于0.07mg。

2)復(fù)方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復(fù)合制劑為2010年國家提高標(biāo)準(zhǔn)行動品種，上述姜黃素含量測定的方法是按照國家藥典委員會，國藥典化發(fā)[2010]84號文有關(guān)要求增加，經(jīng)寧夏回族自治區(qū)食品藥品檢驗所復(fù)核，并于2015年2月收到該復(fù)核所關(guān)于“復(fù)方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復(fù)合制劑”標(biāo)準(zhǔn)復(fù)核的復(fù)核意見，現(xiàn)已報送國家藥典委員會。

[1] 周瑤瑤,韋小未,郭玲玉,等.姜黃素對不同亞型THP-1來源巨噬細(xì)胞表達炎癥因子的抑制作用[J].心臟雜志,2016,28(3):258-262.

[2] 董赫,殷鐘意,鄭旭煦.珊瑚姜中姜黃素回流提取工藝條件的優(yōu)化[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40(9)：213-215.

[3] 段雪芹.姜黃屬藥用植物姜黃素的提取、含量測定及抗氧化活性研究[D/OL].雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013[2016-03-25].http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10626-1014102464.htm.

[4] 李明，周欣，趙超，等.HPLC同時測定姜黃中3種姜黃素的含量[J].藥物分析雜志，2008，28(11)：1810-1814.

[5] 劉瑩，霍昕，楊迺嘉，等.珊瑚姜中姜黃素的鑒別及含量測定研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19(7)：1675-1676.

[6] 陳文慧，曹煜，楊占南.珊瑚姜中揮發(fā)油的化學(xué)成分分析[J].華西藥學(xué)雜志，2008，23(6)：718-719.

[7] 余德順，葉菲菲，楊秀群.珊瑚姜油的抗氧化性[J].食品科學(xué)，2011，32(17)：164-167.

[8] JAYAPRAKASHA G K,JAGAN M R L,SAKARIAH K K,et al.Improved HPLC method for the determination of curcumin,demethoxycurcumin,and bisdemethoxycurcumin[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2002,50(13):3668-3672.

[9] 劉素標(biāo).姜黃素的作用研究進展[J].中醫(yī)臨床研究，2013，5(4)：117-118.

[10]蘇旬，賀秀麗，劉秀菊，等.姜黃素的臨床研究進展[J].食品與藥品，2012，14(5)：193-198.

[11]王彬輝，章文紅，張曉芬，等.姜黃素的藥理及劑型研究進展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2013，31(5)：1102-1105.

[12]李琦，金劍，許穎.姜黃素的藥理作用及其臨床應(yīng)用進展[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，21(12)：1366-1368.

[13]狄建彬，顧振綸，趙笑東，等.姜黃素的抗氧化和抗炎作用研究進展[J].中草藥，2010，41(5)：28-31.

[14]LI J,JIANG Y,WEN J,et al.A rapid and simple HPLC method for the determination of curcumin in rat plasma: assay development,validation and application to a pharmacokinetic study of curcumin liposome[J].Biomedical chromatography,2009,23(11):1201-1207.

[15]MA Z,SHAYEGANPOUR A,BROCKS D R,et al.High-performance liquid chromatography analysis of curcumin in rat plasma:application to pharmacokinetics of polymeric micellar formulation of curcumin[J].Biomedical Chromatography,2007,21(5):546-552.

HPLC method for determination of compound coral miconazole ginger solution urea ointment of curcumin content in compound preparation

HUANG Chunqing, CAO Guihong, CHANG Ling

(Guizhou Institute for Food and Drug Control, Guiyang, Guizhou 550004, China)

To establish a compound coral miconazole ginger solution urea ointment of curcumin content in compound preparation method, we used octadecyl silane bonded silica as filler of chromatographic column, 0.4% acetonitrile-phosphate solution (45∶55) as mobile phase, flow rate of 1.0 mL/min, detection wavelength of 430nm, column temperature 25 ℃. The range of curcumin concentration was from 3.7 ng to 74.6ng inside had good (r=0.999 9), method recovery rate was 98.23% (RSD=1.39%). The method was simple, rapid, accurate, and could be used for the preparation of the determination of curcumin.

curcumin; compound coral miconazole ginger solution urea ointment compound preparation; HPLC method; quantitative analysis

1004—5570(2016)04-0082-04

2016-04-07

2010～2015年度國家藥品標(biāo)準(zhǔn)提高項目：573

黃春青(1981-)，女，碩士研究生，主管藥師，研究方向：中藥、化學(xué)藥質(zhì)量控制，E-mail:gyhcq@163.com.

TQ460.7+2；O657.7+2

A